维生素的测定精选PPT.ppt

关于维生素的测定第1页，讲稿共58张，创作于星期二5.7.1 5.7.1 概述概述（1 1）维生素的分类及生理功能）维生素的分类及生理功能（2 2）测定的目的和意义）测定的目的和意义（3 3）维生素的测定方法）维生素的测定方法第2页，讲稿共58张，创作于星期二 1 1、维生素的分类及生理功能、维生素的分类及生理功能功能功能：维生素是维持人体正常生命活动所必需的一类小维生素是维持人体正常生命活动所必需的一类小分子有机化合物。它的结构复杂，种类多，目前分子有机化合物。它的结构复杂，种类多，目前已经确认的有已经确认的有3030多种，其中有多种，其中有2020种被认为与维持种被认为与维持人体健康和促进生长发育是至关重要的。维生素人体健康和促进生长发育是至关重要的。维生素的主要功能是通过作为辅酶的成分调节代谢过程，的主要功能是通过作为辅酶的成分调节代谢过程，人体对它的需要量极少，但作用非常大。它一般人体对它的需要量极少，但作用非常大。它一般在体内不能合成或合成量不能满足生理需要，必在体内不能合成或合成量不能满足生理需要，必须经常从食物中摄取；长期缺乏任何一种维生素须经常从食物中摄取；长期缺乏任何一种维生素都会导致相关新陈代谢的紊乱，出现各种特有的都会导致相关新陈代谢的紊乱，出现各种特有的症状。症状。第3页，讲稿共58张，创作于星期二分类：分类：按维生素溶解性能可将它们分成两大类：按维生素溶解性能可将它们分成两大类：vv一类是能溶在脂肪或脂溶性溶剂中的，一类是能溶在脂肪或脂溶性溶剂中的，叫脂溶性维生素（如叫脂溶性维生素（如A A、D D、E E、K K等）；等）；vv另一类是能溶解在水中的，叫水溶性维另一类是能溶解在水中的，叫水溶性维生素（如生素（如B B1 1、B B2 2、B B6 6、C C、B B1212等）。等）。第4页，讲稿共58张，创作于星期二2、测定的目的和意义 多数维生素的性质是不稳定的，对光、氧、多数维生素的性质是不稳定的，对光、氧、热、热、PHPH等非常敏感，食物在加工、储存、运输、等非常敏感，食物在加工、储存、运输、销售等一系列环节都可能造成维生素的损失。为销售等一系列环节都可能造成维生素的损失。为了弥补这种损失，维生素常常作为强化剂在食品了弥补这种损失，维生素常常作为强化剂在食品工业的某些产品中使用。工业的某些产品中使用。第5页，讲稿共58张，创作于星期二意义：意义：（1 1）可评价食品的营养价值；）可评价食品的营养价值；（2 2）开发利用富含维生素的食品；）开发利用富含维生素的食品；（3 3）可以研究食品在不同的加工、储存条件下的）可以研究食品在不同的加工、储存条件下的稳定性，进而指导人们制定合理的工艺条件，减稳定性，进而指导人们制定合理的工艺条件，减少维生素的损失；少维生素的损失；（4 4）起到监督维生素强化食品的剂量，以防摄入过）起到监督维生素强化食品的剂量，以防摄入过多的维生素而引起中毒。多的维生素而引起中毒。第6页，讲稿共58张，创作于星期二 3 3、维生素的测定方法、维生素的测定方法n n微生物法：微生物法：基于某种微生物生长需要特定的维生素，基于某种微生物生长需要特定的维生素，方法特异性强、灵敏度高、不需要特殊仪器，样品不方法特异性强、灵敏度高、不需要特殊仪器，样品不需经特殊处理，但只能测定水溶性维生素。需经特殊处理，但只能测定水溶性维生素。n n化学法：化学法：比色法、滴定法比色法、滴定法n n仪器法：仪器法：色谱法、荧光法、酶法、免疫法等。特别色谱法、荧光法、酶法、免疫法等。特别是是HPLCHPLC可用于大多数维生素的测定，并且在某可用于大多数维生素的测定，并且在某些条件下可同时分析几种维生素，但分析费用较些条件下可同时分析几种维生素，但分析费用较高。高。n n应根据不同的食品基质和条件选择不同的分析方应根据不同的食品基质和条件选择不同的分析方法法第7页，讲稿共58张，创作于星期二重点讲解的方法：重点讲解的方法：n n高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLCHPLC法）同时测定法）同时测定脂溶性维生素脂溶性维生素A A和维生素和维生素E En n比色法测定维生素比色法测定维生素A An nHPLCHPLC法测定胡萝卜素法测定胡萝卜素n n荧光法测定荧光法测定 B B1 1 1 1、B B2 2 2 2n n滴定法和比色法测定维生素滴定法和比色法测定维生素C C第8页，讲稿共58张，创作于星期二5.7.2 5.7.2 维生素维生素A A、E E的测定（的测定（HPLCHPLC法）法）VAVA的性质的性质：维生素维生素A A是是-紫罗酮环与一元醇所组成的一类化合物紫罗酮环与一元醇所组成的一类化合物及其衍生物的总称。通常所说的维生素及其衍生物的总称。通常所说的维生素A A是指视黄是指视黄醇或视黄醇醋酸酯。醇或视黄醇醋酸酯。因有许多不饱和链，故见光易分解；因有许多不饱和链，故见光易分解；在在缺缺氧氧情情况况下下，对对热热较较稳稳定定，对对光光特特别别敏敏感感。如如测测强强化化奶奶粉粉时时，速速度度要要快快，一一般般要要求求测测定定时时间间长长短短，因因为为时时间间长长，见见光光时时间间长长，见见光光分分解解，故故测出的比出厂的含量要少；测出的比出厂的含量要少；不溶于水，溶于有机溶剂，对碱稳定；不溶于水，溶于有机溶剂，对碱稳定；第9页，讲稿共58张，创作于星期二VEVE的性质的性质：又称生育酚，目前已经确认的有又称生育酚，目前已经确认的有8 8种种异构体，最常见的有异构体，最常见的有、-生育酚。溶于脂生育酚。溶于脂溶性溶剂，对热稳定，酸性环境中比碱性环境中稳溶性溶剂，对热稳定，酸性环境中比碱性环境中稳定，无氧条件下，对热、光及碱性环境中也相对稳定，无氧条件下，对热、光及碱性环境中也相对稳定。定。VEVE广泛分布在各种粮食的胚和植物油中。广泛分布在各种粮食的胚和植物油中。第10页，讲稿共58张，创作于星期二 测定原理：测定原理：测定原理：测定原理：（1 1 1 1）液相色谱的原理）液相色谱的原理）液相色谱的原理）液相色谱的原理：液相色谱是采用液体为流动相的一液相色谱是采用液体为流动相的一液相色谱是采用液体为流动相的一液相色谱是采用液体为流动相的一种色谱法。高效液相色谱仪由高压泵、进样装置、色谱柱、种色谱法。高效液相色谱仪由高压泵、进样装置、色谱柱、种色谱法。高效液相色谱仪由高压泵、进样装置、色谱柱、种色谱法。高效液相色谱仪由高压泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录和数据处理装置等部分组成。高压泵以恒定检测器、记录和数据处理装置等部分组成。高压泵以恒定检测器、记录和数据处理装置等部分组成。高压泵以恒定检测器、记录和数据处理装置等部分组成。高压泵以恒定的流量，从贮液容器吸取作为流动相的溶剂输送到色谱柱，的流量，从贮液容器吸取作为流动相的溶剂输送到色谱柱，的流量，从贮液容器吸取作为流动相的溶剂输送到色谱柱，的流量，从贮液容器吸取作为流动相的溶剂输送到色谱柱，试样由进样装置导入，随流动相在色谱柱内进行分离。分试样由进样装置导入，随流动相在色谱柱内进行分离。分试样由进样装置导入，随流动相在色谱柱内进行分离。分试样由进样装置导入，随流动相在色谱柱内进行分离。分离后的组分进入检测器检测，并用记录仪绘出色谱图，或离后的组分进入检测器检测，并用记录仪绘出色谱图，或离后的组分进入检测器检测，并用记录仪绘出色谱图，或离后的组分进入检测器检测，并用记录仪绘出色谱图，或与其他数据处理装置相连，由数据处理系统进行数据处理与其他数据处理装置相连，由数据处理系统进行数据处理与其他数据处理装置相连，由数据处理系统进行数据处理与其他数据处理装置相连，由数据处理系统进行数据处理 色谱图：某一波长下各个不同时刻的吸光度值描点作色谱图：某一波长下各个不同时刻的吸光度值描点作色谱图：某一波长下各个不同时刻的吸光度值描点作色谱图：某一波长下各个不同时刻的吸光度值描点作图。图。图。图。第11页，讲稿共58张，创作于星期二n n（2 2）高效液相色谱检测样品中的维生素）高效液相色谱检测样品中的维生素A A、E E的原理：的原理：样品中的维生素样品中的维生素E E及维生素及维生素A A经经皂化提取处理后，将其从不皂化部分提取皂化提取处理后，将其从不皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法至有机溶剂中。用高效液相色谱法C18C18反反相柱将维生相柱将维生E E和维生素和维生素A A分离，经紫外检测分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量器检测，并用内标法定量第12页，讲稿共58张，创作于星期二（3 3）什么是内标法？）什么是内标法？取标准被测成分，按依次增加或减少的已知阶段量，各自取标准被测成分，按依次增加或减少的已知阶段量，各自取标准被测成分，按依次增加或减少的已知阶段量，各自取标准被测成分，按依次增加或减少的已知阶段量，各自分别加入各单体所规定的定量内标准物质中，调制成标准分别加入各单体所规定的定量内标准物质中，调制成标准分别加入各单体所规定的定量内标准物质中，调制成标准分别加入各单体所规定的定量内标准物质中，调制成标准溶液。分别取此标准液的一定量注入色谱柱，根据色谱图溶液。分别取此标准液的一定量注入色谱柱，根据色谱图溶液。分别取此标准液的一定量注入色谱柱，根据色谱图溶液。分别取此标准液的一定量注入色谱柱，根据色谱图取标准被测成分的峰面积或峰高和内标物质的峰面积或峰取标准被测成分的峰面积或峰高和内标物质的峰面积或峰取标准被测成分的峰面积或峰高和内标物质的峰面积或峰取标准被测成分的峰面积或峰高和内标物质的峰面积或峰高的比例为纵坐标，取标准被测成分量和内标物质量之比高的比例为纵坐标，取标准被测成分量和内标物质量之比高的比例为纵坐标，取标准被测成分量和内标物质量之比高的比例为纵坐标，取标准被测成分量和内标物质量之比或标准被测成分量为横坐标，制成标准曲线。或标准被测成分量为横坐标，制成标准曲线。或标准被测成分量为横坐标，制成标准曲线。或标准被测成分量为横坐标，制成标准曲线。然后按单体中所规定的方法调制试样液，调制试样液时，然后按单体中所规定的方法调制试样液，调制试样液时，然后按单体中所规定的方法调制试样液，调制试样液时，然后按单体中所规定的方法调制试样液，调制试样液时，预先加入与调制标准溶液等量的内标物质，然后按制作预先加入与调制标准溶液等量的内标物质，然后按制作预先加入与调制标准溶液等量的内标物质，然后按制作预先加入与调制标准溶液等量的内标物质，然后按制作标准曲线时的同样条件下得出色谱图，求出被测成分的标准曲线时的同样条件下得出色谱图，求出被测成分的标准曲线时的同样条件下得出色谱图，求出被测成分的标准曲线时的同样条件下得出色谱图，求出被测成分的峰面积或峰高和内标物质的峰面积或峰高之比，再按标峰面积或峰高和内标物质的峰面积或峰高之比，再按标峰面积或峰高和内标物质的峰面积或峰高之比，再按标峰面积或峰高和内标物质的峰面积或峰高之比，再按标准曲线来求出被测成分的含量。准曲线来求出被测成分的含量。准曲线来求出被测成分的含量。准曲线来求出被测成分的含量。内标物的选取原则：内标物的选取原则：内标物的选取原则：内标物的选取原则：能与被测成分完全分离，但其保留时间能与被测成分完全分离，但其保留时间能与被测成分完全分离，但其保留时间能与被测成分完全分离，但其保留时间又尽可能接近被测成分的稳定的物质。又尽可能接近被测成分的稳定的物质。又尽可能接近被测成分的稳定的物质。又尽可能接近被测成分的稳定的物质。第13页，讲稿共58张，创作于星期二 试剂试剂（1 1 1 1）无水乙醚：不含有过氧化物。）无水乙醚：不含有过氧化物。）无水乙醚：不含有过氧化物。）无水乙醚：不含有过氧化物。（2 2 2 2）无水乙醇：不得含有醛类物质。）无水乙醇：不得含有醛类物质。）无水乙醇：不得含有醛类物质。）无水乙醇：不得含有醛类物质。（3 3 3 3）无水硫酸钠。）无水硫酸钠。）无水硫酸钠。）无水硫酸钠。（4 4 4 4）甲醇：重蒸后使用。）甲醇：重蒸后使用。）甲醇：重蒸后使用。）甲醇：重蒸后使用。（5 5 5 5）重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。）重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。）重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。）重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。（6 6 6 6）抗坏血酸溶液（）抗坏血酸溶液（）抗坏血酸溶液（）抗坏血酸溶液（100100100100g g g gL L L L）：）：）：）：临用前进行配制。临用前进行配制。临用前进行配制。临用前进行配制。（7 7 7 7）氢氧化钾溶液（）氢氧化钾溶液（）氢氧化钾溶液（）氢氧化钾溶液（50505050g g g g100g100g100g100g）：）：）：）：取取取取50505050g g g g氢氧化钾氢氧化钾氢氧化钾氢氧化钾,溶于溶于溶于溶于50505050g g g g水中，混匀水中，混匀水中，混匀水中，混匀第14页，讲稿共58张，创作于星期二 标准溶液的配制标准溶液的配制（1 1 1 1）维生素维生素维生素维生素 A A A A标准液：视黄醇（纯度标准液：视黄醇（纯度标准液：视黄醇（纯度标准液：视黄醇（纯度85858585）或视黄醇乙酸酯（纯）或视黄醇乙酸酯（纯）或视黄醇乙酸酯（纯）或视黄醇乙酸酯（纯度度度度90909090）经皂化处理后使用。用脱醛乙醇溶解维生素）经皂化处理后使用。用脱醛乙醇溶解维生素）经皂化处理后使用。用脱醛乙醇溶解维生素）经皂化处理后使用。用脱醛乙醇溶解维生素A A A A标准品，标准品，标准品，标准品，使其浓度大约为使其浓度大约为使其浓度大约为使其浓度大约为lmg/mLlmg/mLlmg/mLlmg/mL。临用前用紫外分光光度法标定其。临用前用紫外分光光度法标定其。临用前用紫外分光光度法标定其。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。准确浓度。准确浓度。准确浓度。（2 2 2 2）维生素）维生素）维生素）维生素E E E E标准液：标准液：标准液：标准液：a a a a-生育酚（纯度生育酚（纯度生育酚（纯度生育酚（纯度95959595），），），），-生育酚（纯生育酚（纯生育酚（纯生育酚（纯纯纯纯纯95959595），），），），-生育酚（纯度生育酚（纯度生育酚（纯度生育酚（纯度95959595）。用脱醛乙醇分别溶解以上）。用脱醛乙醇分别溶解以上）。用脱醛乙醇分别溶解以上）。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素三种维生素三种维生素三种维生素E E E E标准品，使其浓度大约为标准品，使其浓度大约为标准品，使其浓度大约为标准品，使其浓度大约为lmg/mL,lmg/mL,lmg/mL,lmg/mL,临用前用紫外临用前用紫外临用前用紫外临用前用紫外分光光度法分别标定此三种维生素分光光度法分别标定此三种维生素分光光度法分别标定此三种维生素分光光度法分别标定此三种维生素E E E E的准确浓度。的准确浓度。的准确浓度。的准确浓度。（3 3 3 3）内标溶液：称取苯并芘（纯度）内标溶液：称取苯并芘（纯度）内标溶液：称取苯并芘（纯度）内标溶液：称取苯并芘（纯度98989898），用脱醛乙醇配制），用脱醛乙醇配制），用脱醛乙醇配制），用脱醛乙醇配制成成成成10ug/mL10ug/mL10ug/mL10ug/mL 的内标溶液。的内标溶液。的内标溶液。的内标溶液。第15页，讲稿共58张，创作于星期二仪器和设备仪器和设备（1 1 1 1）高效液相色谱仪带紫外分光检测器。）高效液相色谱仪带紫外分光检测器。）高效液相色谱仪带紫外分光检测器。）高效液相色谱仪带紫外分光检测器。（2 2 2 2）旋转蒸发器。）旋转蒸发器。）旋转蒸发器。）旋转蒸发器。（3 3 3 3）高速离心机（带小塑料离心管）高速离心机（带小塑料离心管）高速离心机（带小塑料离心管）高速离心机（带小塑料离心管）（4 4 4 4）高纯氮气。）高纯氮气。）高纯氮气。）高纯氮气。（5 5 5 5）紫外分光光度计。）紫外分光光度计。）紫外分光光度计。）紫外分光光度计。第16页，讲稿共58张，创作于星期二样品处理样品处理（1 1 1 1）皂化：）皂化：）皂化：）皂化：称取适量样品（含维生素称取适量样品（含维生素称取适量样品（含维生素称取适量样品（含维生素A A A A约约约约3 3 3 3gggg，维生素维生素维生素维生素E E E E各异构体约各异构体约各异构体约各异构体约40 40 40 40 g g g g）于三角瓶中，加于三角瓶中，加于三角瓶中，加于三角瓶中，加30303030mLmLmLmL无水乙醇，振摇使样品分散。加入无水乙醇，振摇使样品分散。加入无水乙醇，振摇使样品分散。加入无水乙醇，振摇使样品分散。加入 5mL100g5mL100g5mL100g5mL100gL L L L抗坏血酸溶液和抗坏血酸溶液和抗坏血酸溶液和抗坏血酸溶液和 2.2.2.2.0mL0mL0mL0mL苯并芘内标液，混匀，苯并芘内标液，混匀，苯并芘内标液，混匀，苯并芘内标液，混匀，加加加加 10 10 10 10mLmLmLmL氢氧化钾溶液（氢氧化钾溶液（氢氧化钾溶液（氢氧化钾溶液（50505050浓度），混匀，于沸水回流浓度），混匀，于沸水回流浓度），混匀，于沸水回流浓度），混匀，于沸水回流30303030minminminmin，使皂化完全，皂化后立即放入冰水中冷却。使皂化完全，皂化后立即放入冰水中冷却。使皂化完全，皂化后立即放入冰水中冷却。使皂化完全，皂化后立即放入冰水中冷却。思考：思考：1 1、皂化时加入、皂化时加入VcVc的作用是什么？的作用是什么？第17页，讲稿共58张，创作于星期二n n（2 2）提取：）提取：将皂化后的样品移入分液漏斗中，用将皂化后的样品移入分液漏斗中，用5050mLmL水分水分2-32-3次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用100mL100mL无无水乙醚分水乙醚分2 2次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中。轻轻振摇斗中。轻轻振摇2 2minmin，静置分层，弃去水层。然静置分层，弃去水层。然后每次用约后每次用约5050mLmL水将乙醚液洗至中性，需洗水将乙醚液洗至中性，需洗4545次次第18页，讲稿共58张，创作于星期二n n（3 3）浓缩：）浓缩：将乙醚提取液经无水硫酸钠（约将乙醚提取液经无水硫酸钠（约将乙醚提取液经无水硫酸钠（约将乙醚提取液经无水硫酸钠（约5g5g5g5g）滤入滤入滤入滤入150150150150 mL mL mL mL旋转蒸发旋转蒸发旋转蒸发旋转蒸发瓶内，用约瓶内，用约瓶内，用约瓶内，用约15151515mLmLmLmL乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2 2 2 2次，并入蒸次，并入蒸次，并入蒸次，并入蒸发瓶内，于发瓶内，于发瓶内，于发瓶内，于55555555水浴中减压蒸馏并回收乙醚，醚剩下约水浴中减压蒸馏并回收乙醚，醚剩下约水浴中减压蒸馏并回收乙醚，醚剩下约水浴中减压蒸馏并回收乙醚，醚剩下约2mL2mL2mL2mL时，时，时，时，取下蒸发瓶，用氮气吹干乙醚，随即加人取下蒸发瓶，用氮气吹干乙醚，随即加人取下蒸发瓶，用氮气吹干乙醚，随即加人取下蒸发瓶，用氮气吹干乙醚，随即加人2mL2mL2mL2mL乙醇，充乙醇，充乙醇，充乙醇，充分混合，溶解提取物。将乙醇液移人塑料离心管中，于离分混合，溶解提取物。将乙醇液移人塑料离心管中，于离分混合，溶解提取物。将乙醇液移人塑料离心管中，于离分混合，溶解提取物。将乙醇液移人塑料离心管中，于离心机上离心心机上离心心机上离心心机上离心5min5min5min5min（5000r5000r5000r5000rminminminmin），），），），上清液供色谱分析用。上清液供色谱分析用。上清液供色谱分析用。上清液供色谱分析用。第19页，讲稿共58张，创作于星期二液相色谱推荐条件：液相色谱推荐条件：分析柱：分析柱：分析柱：分析柱：C18C18C18C18反相柱反相柱反相柱反相柱 5 5 5 5m mm m，4.6mmX25Cm4.6mmX25Cm4.6mmX25Cm4.6mmX25Cm；流动相：甲醇：水流动相：甲醇：水流动相：甲醇：水流动相：甲醇：水=98=98=98=98：2 2 2 2，混匀，临用前，混匀，临用前，混匀，临用前，混匀，临用前 脱气；脱气；脱气；脱气；紫外检测器波长：紫外检测器波长：紫外检测器波长：紫外检测器波长：3 3 3 300nm;00nm;00nm;00nm;进样量：进样量：进样量：进样量：20 20 20 20 L L L L；流速：流速：流速：流速：1.701.701.701.70mL/minmL/minmL/minmL/min。第20页，讲稿共58张，创作于星期二标准曲线的制备标准曲线的制备（1 1）.维生素维生素A A和维生素和维生素E E标准溶液的标定标准溶液的标定：取上述取上述取上述取上述配制的维生素配制的维生素配制的维生素配制的维生素A A A A、E E E E的标准溶液按一定的倍数进行稀释，的标准溶液按一定的倍数进行稀释，的标准溶液按一定的倍数进行稀释，的标准溶液按一定的倍数进行稀释，在下表要求的条件下测定其吸光度，根据其吸光系数计算在下表要求的条件下测定其吸光度，根据其吸光系数计算在下表要求的条件下测定其吸光度，根据其吸光系数计算在下表要求的条件下测定其吸光度，根据其吸光系数计算其准确浓度。其准确浓度。其准确浓度。其准确浓度。标准标准比吸光系数比吸光系数E(1%,cm)E(1%,cm)测定波长（测定波长（nmnm）视黄醇视黄醇18351835325325-生育酚生育酚7171294294-生育酚生育酚92.892.8298298a a-生育酚生育酚91.291.2298298第21页，讲稿共58张，创作于星期二标准溶液浓度计算：标准溶液浓度计算：p-p-某维生素浓度，某维生素浓度，mgmgmLmL；A-A-维生素的平均紫外吸光值；维生素的平均紫外吸光值；E-E-某种维生素某种维生素l l比吸光系数比吸光系数;F-F-稀释倍数。稀释倍数。第22页，讲稿共58张，创作于星期二（2 2）标准曲线的制备）标准曲线的制备:本方法采用内标法定量。把高、低两个浓度的维生素本方法采用内标法定量。把高、低两个浓度的维生素本方法采用内标法定量。把高、低两个浓度的维生素本方法采用内标法定量。把高、低两个浓度的维生素A A A A、-生生生生育酚、育酚、育酚、育酚、a a a a-生育酚、生育酚、生育酚、生育酚、-生育酚及内标苯并芘液混合，（其内生育酚及内标苯并芘液混合，（其内生育酚及内标苯并芘液混合，（其内生育酚及内标苯并芘液混合，（其内标苯并芘的浓度值相同）将二种浓度的混合标准进行色谱标苯并芘的浓度值相同）将二种浓度的混合标准进行色谱标苯并芘的浓度值相同）将二种浓度的混合标准进行色谱标苯并芘的浓度值相同）将二种浓度的混合标准进行色谱分析，结果见色谱图。以维生素峰面积与内标物峰面积之分析，结果见色谱图。以维生素峰面积与内标物峰面积之分析，结果见色谱图。以维生素峰面积与内标物峰面积之分析，结果见色谱图。以维生素峰面积与内标物峰面积之比为纵坐标，维生素的浓度比为纵坐标，维生素的浓度比为纵坐标，维生素的浓度比为纵坐标，维生素的浓度(ug/mLug/mLug/mLug/mL）为横坐标绘制标准曲为横坐标绘制标准曲为横坐标绘制标准曲为横坐标绘制标准曲线。线。线。线。第23页，讲稿共58张，创作于星期二第24页，讲稿共58张，创作于星期二样品分析：样品分析：取样品处理液取样品处理液取样品处理液取样品处理液20 20 20 20 L L L L，用标准溶液同样的条件进行色谱分析，用标准溶液同样的条件进行色谱分析，用标准溶液同样的条件进行色谱分析，用标准溶液同样的条件进行色谱分析，绘制色谱图。绘制色谱图。绘制色谱图。绘制色谱图。定性：定性：定性：定性：根据保留时间定性根据保留时间定性根据保留时间定性根据保留时间定性 定量：定量：定量：定量：根据色谱图求出某种维生素的峰面积与内标物峰面根据色谱图求出某种维生素的峰面积与内标物峰面根据色谱图求出某种维生素的峰面积与内标物峰面根据色谱图求出某种维生素的峰面积与内标物峰面积的比值，以此比值在标准曲线上查得待测维生素的含量。积的比值，以此比值在标准曲线上查得待测维生素的含量。积的比值，以此比值在标准曲线上查得待测维生素的含量。积的比值，以此比值在标准曲线上查得待测维生素的含量。第25页，讲稿共58张，创作于星期二 计算：计算：式中：式中：式中：式中：XXXX某种维生素的含量，某种维生素的含量，某种维生素的含量，某种维生素的含量，mgmgmgmg100g100g100g100g；pppp由标准曲线上查到的某种维生素含量，由标准曲线上查到的某种维生素含量，由标准曲线上查到的某种维生素含量，由标准曲线上查到的某种维生素含量，g/mLg/mLg/mLg/mL；V V V V样品浓缩后定容体积，样品浓缩后定容体积，样品浓缩后定容体积，样品浓缩后定容体积，mLmLmLmL；mmmm样品质量，样品质量，样品质量，样品质量，g g g g。第26页，讲稿共58张，创作于星期二 说明及讨论说明及讨论 （1 1 1 1）维维维维生生生生素素素素极极极极易易易易被被被被光光光光破破破破坏坏坏坏，实实实实验验验验操操操操作作作作应应应应在在在在微微微微弱弱弱弱光光光光线线线线下下下下进进进进行行行行，或使用棕色玻璃仪器。或使用棕色玻璃仪器。或使用棕色玻璃仪器。或使用棕色玻璃仪器。（2 2 2 2）乙乙乙乙醚醚醚醚为为为为溶溶溶溶剂剂剂剂的的的的萃萃萃萃取取取取体体体体系系系系，易易易易发发发发生生生生乳乳乳乳化化化化现现现现象象象象。在在在在提提提提取取取取、洗洗洗洗涤涤涤涤操操操操作作作作中中中中，不不不不要要要要用用用用力力力力过过过过猛猛猛猛，若若若若发发发发生生生生乳乳乳乳化化化化，可可可可加加加加几几几几滴滴滴滴乙乙乙乙醇破乳。醇破乳。醇破乳。醇破乳。（3 3 3 3）本本本本法法法法是是是是国国国国家家家家标标标标准准准准检检检检验验验验方方方方法法法法，适适适适用用用用于于于于各各各各种种种种食食食食物物物物和和和和饲饲饲饲料料料料中中中中维生素维生素维生素维生素A A A A和维生素和维生素和维生素和维生素E E E E的同时测定。的同时测定。的同时测定。的同时测定。（4 4 4 4）本本本本法法法法不不不不能能能能将将将将-生生生生育育育育酚酚酚酚-生生生生育育育育酚酚酚酚分分分分开开开开，所所所所以以以以-生生生生育育育育酚酚酚酚的的的的色谱峰中含有色谱峰中含有色谱峰中含有色谱峰中含有-生育酚。生育酚。生育酚。生育酚。第27页，讲稿共58张，创作于星期二（5 5）维生素的含量可用国际单位（）维生素的含量可用国际单位（IUIU）表示：表示：1 1 1 1国际单位（国际单位（国际单位（国际单位（IUIUIUIU）=0.3 ug=0.3 ug=0.3 ug=0.3 ug维生素维生素维生素维生素A A A A =1mg =1mg =1mg =1mg维生素维生素维生素维生素E E E E =0.025 ug =0.025 ug =0.025 ug =0.025 ug维生素维生素维生素维生素D DD D第28页，讲稿共58张，创作于星期二n n5.7.3 5.7.3 维生素维生素A A的测定的测定（三氯化锑比色法）（三氯化锑比色法）l l原理：原理：V V V VA A A A+三三三三氯氯氯氯化化化化锑锑锑锑蓝蓝蓝蓝色色色色物物物物质质质质，于于于于620nm620nm620nm620nm测测测测吸吸吸吸光光光光度度度度，与与与与标标标标准比较定量。准比较定量。准比较定量。准比较定量。n n试剂试剂：无水无水无水无水NaNaNaNa2 2 2 2SOSOSOSO4 4 4 4、乙酸酐：吸水乙酸酐：吸水乙酸酐：吸水乙酸酐：吸水 乙醚：抽提乙醚：抽提乙醚：抽提乙醚：抽提 乙醇、乙醇、乙醇、乙醇、KOHKOHKOHKOH：皂化反应皂化反应皂化反应皂化反应 三氯甲烷：溶剂三氯甲烷：溶剂三氯甲烷：溶剂三氯甲烷：溶剂 三氯化锑三氯化锑三氯化锑三氯化锑-三氯甲烷：反应试剂三氯甲烷：反应试剂三氯甲烷：反应试剂三氯甲烷：反应试剂 酚酞：用于鉴别洗涤液中有无碱酚酞：用于鉴别洗涤液中有无碱酚酞：用于鉴别洗涤液中有无碱酚酞：用于鉴别洗涤液中有无碱第29页，讲稿共58张，创作于星期二l l步骤：步骤：（1 1 1 1）预处理：皂化、提取、洗涤、浓缩）预处理：皂化、提取、洗涤、浓缩）预处理：皂化、提取、洗涤、浓缩）预处理：皂化、提取、洗涤、浓缩（2 2 2 2）制制制制备备备备标标标标准准准准曲曲曲曲线线线线：用用用用V V V VA A A A标标标标准准准准液液液液绘绘绘绘制制制制，用用用用CHClCHClCHClCHCl3 3 3 3调调调调零零零零。注注注注意意意意在在在在移移移移入光路前，迅速加入三氯化锑，入光路前，迅速加入三氯化锑，入光路前，迅速加入三氯化锑，入光路前，迅速加入三氯化锑，6 6 6 6秒内秒内秒内秒内测定测定测定测定(3)(3)(3)(3)样品测定：用样品溶液代替标准液溶液。样品测定：用样品溶液代替标准液溶液。样品测定：用样品溶液代替标准液溶液。样品测定：用样品溶液代替标准液溶液。第30页，讲稿共58张，创作于星期二l l说明说明(1)(1)(1)(1)萃取时萃取时萃取时萃取时,不要用力过猛不要用力过猛不要用力过猛不要用力过猛,避免发生乳化。避免发生乳化。避免发生乳化。避免发生乳化。（2 2 2 2）氯仿中必须无水，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色）氯仿中必须无水，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色）氯仿中必须无水，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色）氯仿中必须无水，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。测定。测定。测定。（3 3 3 3）由于三氯化锑与）由于三氯化锑与）由于三氯化锑与）由于三氯化锑与V V V VA A A A所产生的兰色物质不稳定，注意在所产生的兰色物质不稳定，注意在所产生的兰色物质不稳定，注意在所产生的兰色物质不稳定，注意在移入光路前，迅速加入三氯化锑，移入光路前，迅速加入三氯化锑，移入光路前，迅速加入三氯化锑，移入光路前，迅速加入三氯化锑，6 6 6 6秒内秒内秒内秒内测定。测定。测定。测定。（4 4）三氯化锑腐蚀性强，且遇水生成白色沉淀，实验用过三氯化锑腐蚀性强，且遇水生成白色沉淀，实验用过三氯化锑腐蚀性强，且遇水生成白色沉淀，实验用过三氯化锑腐蚀性强，且遇水生成白色沉淀，实验用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。第31页，讲稿共58张，创作于星期二5.7.45.7.4、-胡萝卜素的测定（胡萝卜素的测定（HPLCHPLC法）法）n n试样中的试样中的-胡萝卜素，用石油醚胡萝卜素，用石油醚+丙酮混合丙酮混合液提取，经三氧化铝柱纯化，然后以高效液液提取，经三氧化铝柱纯化，然后以高效液相色谱法测定，以保留时间定性，以峰高或相色谱法测定，以保留时间定性，以峰高或峰面积定量。峰面积定量。n n注意：浓缩提取液时，防止蒸干，避免胡萝注意：浓缩提取液时，防止蒸干，避免胡萝卜素在空气中氧化或因高温、紫外线直射等卜素在空气中氧化或因高温、紫外线直射等破坏。破坏。第32页，讲稿共58张，创作于星期二5.7.5、维生素、维生素B1 1的测定的测定荧光法荧光法n n原理：硫胺素（原理：硫胺素（原理：硫胺素（原理：硫胺素（VBVBVBVB1 1 1 1）在碱性铁化钾溶液中被氧化为嘧噻）在碱性铁化钾溶液中被氧化为嘧噻）在碱性铁化钾溶液中被氧化为嘧噻）在碱性铁化钾溶液中被氧化为嘧噻色素，在紫外线照射下，嘧噻色素发出荧光。在给定条色素，在紫外线照射下，嘧噻色素发出荧光。在给定条色素，在紫外线照射下，嘧噻色素发出荧光。在给定条色素，在紫外线照射下，嘧噻色素发出荧光。在给定条件下，以及没有其他荧光物质干扰时，荧光强度与嘧噻件下，以及没有其他荧光物质干扰时，荧光强度与嘧噻件下，以及没有其他荧光物质干扰时，荧光强度与嘧噻件下，以及没有其他荧光物质干扰时，荧光强度与嘧噻色素成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。色素成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。色素成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。色素成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。试样在硫酸作用下试样在硫酸作用下试样在硫酸作用下试样在硫酸作用下,加热提取加热提取加热提取加热提取V V V VB1B1B1B1.冷却后用淀粉酶在冷却后用淀粉酶在冷却后用淀粉酶在冷却后用淀粉酶在pH=4.5pH=4.5pH=4.5pH=4.5时处理使时处理使时处理使时处理使V V V VB1B1B1B1分离分离分离分离如果样品中含杂质过多，应经离子如果样品中含杂质过多，应经离子如果样品中含杂质过多，应经离子如果样品中含杂质过多，应经离子交换剂处理，使硫胺素与杂质分离，然后以所得溶液交换剂处理，使硫胺素与杂质分离，然后以所得溶液交换剂处理，使硫胺素与杂质分离，然后以所得溶液交换剂处理，使硫胺素与杂质分离，然后以所得溶液做测定。做测定。做测定。做测定。n n测定步骤：提取测定步骤：提取测定步骤：提取测定步骤：提取净化净化净化净化氧化氧化氧化氧化测定测定测定测定n n加入淀粉酶的作用加入淀粉酶的作用加入淀粉酶的作用加入淀粉酶的作用:使结合态使结合态使结合态使结合态V V V VB1B1B1B1变为游离态变为游离态变为游离态变为游离态V V V VB1B1B1B1.第33页，讲稿共58张，创作于星期二5.7.6、维生素、维生素B2 2的测定的测定荧光法荧光法n n原理：试样在稀盐酸中水解、酶解，调整原理：试样在稀盐酸中水解、酶解，调整原理：试样在稀盐酸中水解、酶解，调整原理：试样在稀盐酸中水解、酶解，调整 PHPHPHPH值，过滤值，过滤值，过滤值，过滤除去蛋白质等物质；试样溶液经高锰酸钾氧化，除除去蛋白质等物质；试样溶液经高锰酸钾氧化，除除去蛋白质等物质；试样溶液经高锰酸钾氧化，除除去蛋白质等物质；试样溶液经高锰酸钾氧化，除去干扰物，再经硅镁吸附剂的柱层析，提纯的核黄去干扰物，再经硅镁吸附剂的柱层析，提纯的核黄去干扰物，再经硅镁吸附剂的柱层析，提纯的核黄去干扰物，再经硅镁吸附剂的柱层析，提纯的核黄素在波长素在波长素在波长素在波长525525525525nmnmnmnm下发生黄绿色荧光，在稀溶液中其荧下发生黄绿色荧光，在稀溶液中其荧下发生黄绿色荧光，在稀溶液中其荧下发生黄绿色荧光，在稀溶液中其荧光强度与核黄素的浓度成正比。再加入低亚硫酸钠，光强度与核黄素的浓度成正比。再加入低亚硫酸钠，光强度与核黄素的浓度成正比。再加入低亚硫酸钠，光强度与核黄素的浓度成正比。再加入低亚硫酸钠，将将将将V V V VB2B2B2B2还原成无荧光的物质，然后再测定试液中残余还原成无荧光的物质，然后再测定试液中残余还原成无荧光的物质，然后再测定试液中残余还原成无荧光的物质，然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光，两者相差即为食品中核黄素所产荧光杂质的荧光，两者相差即为食品中核黄素所产荧光杂质的荧光，两者相差即为食品中核黄素所产荧光杂质的荧光，两者相差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。生的荧光强度。生的荧光强度。生的荧光强度。n n测定核黄素的方法还有：微生物法和测定核黄素的方法还有：微生物法和测定核黄素的方法还有：微生物法和测定核黄素的方法还有：微生物法和HPLCHPLCHPLCHPLC法。法。法。法。第34页，讲稿共58张，创作于星期二n n讨论：P202 思考题：1、3、4第35页，讲稿共58张，创作于星期二5.7.7 5.7.7 维生素维生素C C（抗坏血酸）的测定抗坏血酸）的测定 维生素维生素C C的生理功能及性质的生理功能及性质 维维生生素素C C是是一一种种己己糖糖醛醛基基酸酸，有有抗抗坏坏血血病病的的作作用用，所所以以又又称称作作抗抗坏坏血血酸酸。维维生生素素