微生物纯培养和显微技术.ppt

关于微生物的纯培养和显微技术第一张，PPT共六十一页，创作于2022年6月微生物的分离和纯培养微生物的分离和纯培养 1.无菌技术无菌技术 2.用固体培养基分离纯培养用固体培养基分离纯培养 3.用液体培养基分离纯培养用液体培养基分离纯培养 4.单细胞（孢子）分离单细胞（孢子）分离 5.选择培养分离选择培养分离 6.二元培养物二元培养物 显微镜和显微技术显微镜和显微技术 1.显微镜的种类及原理显微镜的种类及原理 2.显微观察样品的制备显微观察样品的制备第二张，PPT共六十一页，创作于2022年6月微生物个体：小利用群体研究属性利用群体研究属性群体形式繁衍、保存群体形式繁衍、保存人为规定的条件下培养繁殖得到的人为规定的条件下培养繁殖得到的 微生物群体为微生物群体为培养物培养物第三张，PPT共六十一页，创作于2022年6月培养物培养物纯培养物纯培养物混合培养物混合培养物纯培养能较好地得到重复结果纯培养能较好地得到重复结果，是微生物研究的重要技术之一是微生物研究的重要技术之一第四张，PPT共六十一页，创作于2022年6月显微技术是微生物研究的另一项重要技术显微技术是微生物研究的另一项重要技术个体小个体小第五张，PPT共六十一页，创作于2022年6月一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养无菌技术（无菌技术（aseptic technique)分离、转接、纯化时防止其他微生物污染的技术分离、转接、纯化时防止其他微生物污染的技术第六张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n试管、烧瓶、培养皿等常用器皿试管、烧瓶、培养皿等常用器皿 n灭菌方法有：高压蒸汽灭菌、高温干热、煮沸灭菌方法有：高压蒸汽灭菌、高温干热、煮沸一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养微生物培养常用器皿及灭菌微生物培养常用器皿及灭菌第七张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n接种针接种针或或接种环接种环分离或将微生物从一个培养器皿转接分离或将微生物从一个培养器皿转接到另一个，无菌操作。火焰旁边或无菌箱或无菌室到另一个，无菌操作。火焰旁边或无菌箱或无菌室 进进行。行。n接种针采用迅速加热和冷却的镍铬合金制备接种针采用迅速加热和冷却的镍铬合金制备 n液体培养物用无菌移液管或移液枪液体培养物用无菌移液管或移液枪一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养接种操作，最基本技术接种操作，最基本技术第八张，PPT共六十一页，创作于2022年6月第九张，PPT共六十一页，创作于2022年6月第十张，PPT共六十一页，创作于2022年6月一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养无菌操作台无菌操作台火焰旁无菌区火焰旁无菌区第十一张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n用固体培养基分离纯培养用固体培养基分离纯培养 各种菌落各种菌落一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养菌落菌落(colony)：单个微生物在固体单个微生物在固体 培养基或培养基或(内层内层)生长繁殖形成肉眼生长繁殖形成肉眼 可见的，有一定形态结构的子细胞可见的，有一定形态结构的子细胞 生长群体。生长群体。菌落连成片为菌落连成片为菌苔菌苔（lawn）第十二张，PPT共六十一页，创作于2022年6月一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（形状、颜色形状、颜色等等），是微生物分类、鉴定的重要依据），是微生物分类、鉴定的重要依据。第十三张，PPT共六十一页，创作于2022年6月同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养第十四张，PPT共六十一页，创作于2022年6月一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养第十五张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n固体培养基：固体培养基：琼脂或其他凝胶物质固化的培养琼脂或其他凝胶物质固化的培养基。基。n平板：平板：即培养平板（即培养平板（culture plate)。融化的固体。融化的固体 培养基倒入无菌平皿冷却凝固后即为平板用，培养基倒入无菌平皿冷却凝固后即为平板用，于分离、培养微生物。于分离、培养微生物。一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养第十六张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n稀释平板法（稀释平板法（pour plate method)将细菌或其他微生物无菌水梯度稀释，取少量将细菌或其他微生物无菌水梯度稀释，取少量与冷却至与冷却至50固体培养基混合，摇匀，倒入培养皿，固体培养基混合，摇匀，倒入培养皿，凝固，倒置培养凝固，倒置培养2424小时，就会出现菌落。小时，就会出现菌落。一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养常用固体分离纯培养方法：常用固体分离纯培养方法：第十七张，PPT共六十一页，创作于2022年6月一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养稀释平板法稀释平板法第十八张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n涂布平板法（涂布平板法（spread plate method)稀释平板法因为细菌与稀释平板法因为细菌与50培养基培养基混合导致某些热敏混合导致某些热敏感菌死亡，及感菌死亡，及好氧菌好氧菌埋在培养基中缺乏氧气影响生长，所埋在培养基中缺乏氧气影响生长，所以更常用涂布平板法。以更常用涂布平板法。一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养常用固体分离纯培养方法：常用固体分离纯培养方法：第十九张，PPT共六十一页，创作于2022年6月第二十张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n平板划线分离法（平板划线分离法（streak plate method）接种环沾取少许微生物，在无菌平板扇形、平行等接种环沾取少许微生物，在无菌平板扇形、平行等划线，随划线次数增加而分散开，得到单菌落。划线，随划线次数增加而分散开，得到单菌落。平板划线分离平板划线分离一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养第二十一张，PPT共六十一页，创作于2022年6月第二十二张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n稀释摇管法稀释摇管法(dilution shake culture method）n厌氧微生物可用此法进行纯培养分离。厌氧微生物可用此法进行纯培养分离。n操作：盛培养基试管加热融化，冷却至操作：盛培养基试管加热融化，冷却至50，待分离材料待分离材料用这些试管梯度稀释用这些试管梯度稀释，摇匀，冷凝，石蜡封口，摇匀，冷凝，石蜡封口一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养第二十三张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n厌氧微生物分离装置：厌氧微生物分离装置：一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养厌氧罐厌氧罐厌氧手套箱厌氧手套箱第二十四张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n液体培养基分离纯培养：液体培养基分离纯培养：一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养有些微生物有些微生物液体培养基液体培养基分离纯培养，原生动物、藻类。分离纯培养，原生动物、藻类。稀释法：稀释法：接种物在液体培养基中顺序稀释，高度稀释，每个试管中分接种物在液体培养基中顺序稀释，高度稀释，每个试管中分配不到一个。若稀释后同一梯度的平行试管中大多数（配不到一个。若稀释后同一梯度的平行试管中大多数（95）没有微生物生长，那么有微生物的可能是纯培养，否则可能性下没有微生物生长，那么有微生物的可能是纯培养，否则可能性下降。降。第二十五张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n n显微分离法直接分离单细胞或单个个体培养获得纯养显微分离法直接分离单细胞或单个个体培养获得纯养显微分离法直接分离单细胞或单个个体培养获得纯养显微分离法直接分离单细胞或单个个体培养获得纯养一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养单细胞（单孢子）显微分离：单细胞（单孢子）显微分离：稀释法缺点稀释法缺点稀释法缺点稀释法缺点分离的优势菌分离的优势菌显微操作仪，专业程度高显微操作仪，专业程度高显微操作仪，专业程度高显微操作仪，专业程度高第二十六张，PPT共六十一页，创作于2022年6月 对某微生物生长需要了解后，设计适合其生长繁殖的对某微生物生长需要了解后，设计适合其生长繁殖的培养基，抑制其他菌生长，即使该微生物在混杂群体中（培养基，抑制其他菌生长，即使该微生物在混杂群体中（很很 少也可少也可)分离。分离。一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养选择培养分离方法：选择培养分离方法：第二十七张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n选择培养基直接分离选择培养基直接分离 一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养选择培养分离方法：选择培养分离方法：如：耐高温菌采用高温筛选；如：耐高温菌采用高温筛选；如：耐高温菌采用高温筛选；如：耐高温菌采用高温筛选；蛋白酶产生菌加牛奶筛选；蛋白酶产生菌加牛奶筛选；蛋白酶产生菌加牛奶筛选；蛋白酶产生菌加牛奶筛选；抗抗生素可采用加抗生素筛选抗抗生素可采用加抗生素筛选待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制第二十八张，PPT共六十一页，创作于2022年6月一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养选择培养分离方法：选择培养分离方法：富集培养富集培养 特定的环境条件特定的环境条件仅适应于该条件的微生物旺盛生长仅适应于该条件的微生物旺盛生长待分离微生物在群落中的数量大大增加待分离微生物在群落中的数量大大增加从自然界中分离到所需的特定微生物从自然界中分离到所需的特定微生物第二十九张，PPT共六十一页，创作于2022年6月根据微生物的特殊要求，从自然界分离出特定已知微生物种类；根据微生物的特殊要求，从自然界分离出特定已知微生物种类；分离培养在特定环境中能生长的微生物；分离培养在特定环境中能生长的微生物；富集培养富集培养 第三十张，PPT共六十一页，创作于2022年6月一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养n二元培养物：二元培养物：培养物只含两种微生物，并有意识保持两者之间培养物只含两种微生物，并有意识保持两者之间 的特定关系的培养物为二元培养物。的特定关系的培养物为二元培养物。如：如：病毒宿主病毒宿主，原生动物细小微生物原生动物细小微生物第三十一张，PPT共六十一页，创作于2022年6月一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养微生物菌种保藏技术：微生物菌种保藏技术：为何保藏为何保藏如何保藏如何保藏性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则 生产或科研都无法正常进行。生产或科研都无法正常进行。要求：菌种不死，不污染，不变易要求：菌种不死，不污染，不变易中国微生物菌种保藏委员会中国微生物菌种保藏委员会（CCCCM)，中国典型培养物保藏，中国典型培养物保藏中心（中心（CCTCC），美国典型菌种保），美国典型菌种保藏中心（藏中心（ATCC）等）等第三十二张，PPT共六十一页，创作于2022年6月一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养微生物菌种保藏技术：微生物菌种保藏技术：如何保藏如何保藏根据菌种特性和保藏目的不同，根据菌种特性和保藏目的不同，给特定环境使其存活而得以保存给特定环境使其存活而得以保存连续移种或改变环境条件：干燥、低温连续移种或改变环境条件：干燥、低温 缺氧、避光、缺乏营养等缺氧、避光、缺乏营养等第三十三张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n斜面：斜面：可保存数周至数年，可用石蜡或橡皮塞封口，低可保存数周至数年，可用石蜡或橡皮塞封口，低 温温延长保存时间延长保存时间 n液体：液体：菌苔制成菌悬液，低温（菌苔制成菌悬液，低温（悬液保藏法悬液保藏法）n缺点：繁琐、易污染、变异丧失原有特性缺点：繁琐、易污染、变异丧失原有特性一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养微生物菌种保藏技术：微生物菌种保藏技术：传代保藏传代保藏斜面、半固体琼脂柱、液体斜面、半固体琼脂柱、液体第三十四张，PPT共六十一页，创作于2022年6月斜面制作：第三十五张，PPT共六十一页，创作于2022年6月一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养微生物菌种保藏技术：微生物菌种保藏技术：冷冻保藏冷冻保藏液氮保藏、低温冰箱等液氮保藏、低温冰箱等 液氮可达液氮可达196，效果较好效果较好注意：注意：速冻，减少冰晶损伤细胞速冻，减少冰晶损伤细胞第三十六张，PPT共六十一页，创作于2022年6月一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养微生物菌种保藏技术：微生物菌种保藏技术：干燥保藏干燥保藏沙土管保藏、冷冻真空干燥沙土管保藏、冷冻真空干燥 保藏保藏沙土管：沙土管：产孢子菌。制成孢子悬液，加无菌沙土管，减压抽产孢子菌。制成孢子悬液，加无菌沙土管，减压抽干水分，石蜡封口，冰箱保存。干水分，石蜡封口，冰箱保存。冷冻真空干燥：冷冻真空干燥：加保护剂样品预先冷冻，真空冰升华去水，低温加保护剂样品预先冷冻，真空冰升华去水，低温保存，保存数十年，目前最普遍、最重要的方法，菌种保藏中心保存，保存数十年，目前最普遍、最重要的方法，菌种保藏中心多采用此法。菌种保藏时采用多采用此法。菌种保藏时采用不同手段保藏，防止某种方法失败防止某种方法失败导致菌种丧失导致菌种丧失。第三十七张，PPT共六十一页，创作于2022年6月二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术n决定显微观察效果重要因素：分辨率决定显微观察效果重要因素：分辨率和和 反差反差 n分辨率：辨别两点之间最小距离的能分辨率：辨别两点之间最小距离的能力力 n反差：样品与背景区别程度反差：样品与背景区别程度 n普通显微镜普通显微镜 n 调焦螺旋调焦螺旋 n 光学系统：光学系统：物镜、目镜、聚光器物镜、目镜、聚光器 机械装置：机械装置：镜座、支架、载物台、镜座、支架、载物台、普通显微镜结构示意图普通显微镜结构示意图显微镜种类和原理：显微镜种类和原理：第三十八张，PPT共六十一页，创作于2022年6月二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术光学显微镜一般配置的最大放大倍数是多少？为什么？光学显微镜一般配置的最大放大倍数是多少？为什么？目镜：目镜：10 15 ；物镜：；物镜：100 ；总放大倍数；总放大倍数10001500 ；如何实现光学显微镜一般配置的最大放大倍数？其原理？如何实现光学显微镜一般配置的最大放大倍数？其原理？使用油镜，即在使用油镜，即在100 ,物镜和载玻片之间滴加香柏油；物镜和载玻片之间滴加香柏油；香柏油与玻璃折射率相近香柏油与玻璃折射率相近第三十九张，PPT共六十一页，创作于2022年6月二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术n 0.5 l ln分辨率（最小可分辨距离）分辨率（最小可分辨距离）=n n sin q q分辨率与所用波长成反比！分辨率与所用波长成反比！第四十张，PPT共六十一页，创作于2022年6月nN：玻片与物镜间介质的折射率：玻片与物镜间介质的折射率空气（空气（n=1.0）、水（）、水（n=1.33）、香柏油（）、香柏油（n=1.52）显微观察时可根据物镜的特性而选用不同的介质显微观察时可根据物镜的特性而选用不同的介质二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术第四十一张，PPT共六十一页，创作于2022年6月二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术浸没油与玻璃的折射率相近浸没油与玻璃的折射率相近浸没油与玻璃的折射率相近浸没油与玻璃的折射率相近很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。第四十二张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n n暗视野显微镜暗视野显微镜二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术活细菌在普通显微镜下是透明，观察不清，采用暗视活细菌在普通显微镜下是透明，观察不清，采用暗视野显微镜，如：黑夜看星星就很清楚。野显微镜，如：黑夜看星星就很清楚。暗暗视视野野显显微微镜镜结结构构与与照照明明示示意意图图第四十三张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n n暗视野显微镜暗视野显微镜二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术特殊聚光器实现斜射照明，给样品照明的光线不直接穿过物特殊聚光器实现斜射照明，给样品照明的光线不直接穿过物镜，而经样品反射或折射后进入物镜，使样品与背景差别大，镜，而经样品反射或折射后进入物镜，使样品与背景差别大，可以清楚看到透明微小颗粒。用于：生活细菌运动性观察。可以清楚看到透明微小颗粒。用于：生活细菌运动性观察。第四十四张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n n相差显微镜相差显微镜二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术第四十五张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n n相差显微镜相差显微镜二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术光线透过透明标本，光线透过透明标本，波长（颜色）波长（颜色）和和振幅（亮度）振幅（亮度）没有没有多大变化，用普通显微镜观察透明标本，其形态和内部结构多大变化，用普通显微镜观察透明标本，其形态和内部结构难以分辨。细胞各部分折射率和厚度不同，当光线通过时，难以分辨。细胞各部分折射率和厚度不同，当光线通过时，直射光直射光和和衍射光衍射光光程有差别，而人眼看不到，但是可通过相光程有差别，而人眼看不到，但是可通过相差显微镜看到。差显微镜看到。相差显微镜相差显微镜采用特殊光学装置：采用特殊光学装置：环状光阑环状光阑和和相差板相差板，利用，利用光的干涉，将光的光的干涉，将光的相位差相位差转变为人眼可见的转变为人眼可见的振幅差（明暗），振幅差（明暗），使能不染色而看到活细胞及细胞内的某些显微结构。其发明使能不染色而看到活细胞及细胞内的某些显微结构。其发明人人F.Zernike因此获因此获1953年诺贝尔物理奖。年诺贝尔物理奖。第四十六张，PPT共六十一页，创作于2022年6月相差显微镜下的血液流动：第四十七张，PPT共六十一页，创作于2022年6月二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术透射电子显微镜（简写透射电子显微镜（简写TEM）用波长短的电磁波取代可见光，使分辨用波长短的电磁波取代可见光，使分辨率提高。率提高。工作原理类似，因光源不同，有区工作原理类似，因光源不同，有区别别:1)电子若遇空气中分子会发生偏转使物电子若遇空气中分子会发生偏转使物象不清楚，因此镜筒高真空象不清楚，因此镜筒高真空 2)电子带电荷，电镜是用电磁圈使电子带电荷，电镜是用电磁圈使之聚焦之聚焦 3)电子成像人眼看不到，用荧光屏显示电子成像人眼看不到，用荧光屏显示或感光胶片记录或感光胶片记录第四十八张，PPT共六十一页，创作于2022年6月大大肠肠杆杆菌菌 透透射射电电子子显显微微镜镜图图第四十九张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n n扫描电子显微镜（扫描电子显微镜（SEM）扫描电子显微镜扫描电子显微镜大肠杆菌扫描电镜图大肠杆菌扫描电镜图二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术工作原理与光学显微镜和透射电子显微镜不同，是电子束扫描，激发样品表工作原理与光学显微镜和透射电子显微镜不同，是电子束扫描，激发样品表面放出二次电子，电子产生多少与标本表面立体形貌有关。电子经探测器收面放出二次电子，电子产生多少与标本表面立体形貌有关。电子经探测器收集，经光电倍增管和放大器，产生样品立体图像于荧光屏上。集，经光电倍增管和放大器，产生样品立体图像于荧光屏上。主要用于：样品表面结构主要用于：样品表面结构第五十张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n n扫描隧道显微镜（扫描隧道显微镜（STM）二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术80年代出现的，原理：利用量子力学中的隧道效应。年代出现的，原理：利用量子力学中的隧道效应。其横向分辨率：其横向分辨率：0.10.2nm，纵向分辨率：，纵向分辨率：0.001nm 这种分辨率足以对单个原子观察。这种分辨率足以对单个原子观察。利用这种显微镜直接观察蛋白质、利用这种显微镜直接观察蛋白质、DNA、RNA等以及等以及virus等等结构。结构。第五十一张，PPT共六十一页，创作于2022年6月 厨厨房房抹抹布布上上的的细细菌菌和和霉霉菌菌棉纤维上的汗垢棉纤维上的汗垢扫描隧道显微镜下的扫描隧道显微镜下的DNA第五十二张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n显微样品制备显微样品制备二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术样品好坏直接影响观察结果。样品好坏直接影响观察结果。考虑因素：根据所用显微镜特点采用合适制样方考虑因素：根据所用显微镜特点采用合适制样方法，尽可能使样品生理结构稳定，采用各种方法法，尽可能使样品生理结构稳定，采用各种方法提高反差。提高反差。第五十三张，PPT共六十一页，创作于2022年6月二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术显微样品制备之显微样品制备之 光学显微镜制样光学显微镜制样光学显微镜制样光学显微镜制样活体观察活体观察染色染色压滴法压滴法悬滴法悬滴法菌丝埋片法菌丝埋片法活菌活菌死菌死菌美蓝染色美蓝染色简单染色简单染色鉴别染色鉴别染色革兰氏染色、鞭毛染色、芽孢染色革兰氏染色、鞭毛染色、芽孢染色第五十四张，PPT共六十一页，创作于2022年6月二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术n特点：避免染色对细胞结构的破坏，用于运动性、摄食特性、特点：避免染色对细胞结构的破坏，用于运动性、摄食特性、生长繁殖过程中形态变化等观察生长繁殖过程中形态变化等观察 n压滴法：压滴法：菌悬液滴载玻片，加盖玻片直接观察菌悬液滴载玻片，加盖玻片直接观察 n悬滴法：悬滴法：盖玻片滴一滴菌悬液，反转置于特制凹载玻片直盖玻片滴一滴菌悬液，反转置于特制凹载玻片直接观察接观察 n菌丝埋片法：菌丝埋片法：无菌小玻璃纸铺平板表面，涂布孢子悬液，培无菌小玻璃纸铺平板表面，涂布孢子悬液，培养后，取下玻璃纸置于载玻片，观察养后，取下玻璃纸置于载玻片，观察 光学显微镜样品制备活体观察光学显微镜样品制备活体观察第五十五张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n活体观察难看到微生物的细致形态和结构，需染色观察。活体观察难看到微生物的细致形态和结构，需染色观察。n染色前需要对染色前需要对样品固定样品固定，目的：杀死细菌使菌体黏附在，目的：杀死细菌使菌体黏附在 玻片玻片上；还可增加对染料的亲和力。上；还可增加对染料的亲和力。n常用：常用：酒精火焰加热酒精火焰加热和和化学固定化学固定两种方法两种方法 二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术光学显微样品制备染色观察光学显微样品制备染色观察第五十六张，PPT共六十一页，创作于2022年6月二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术大肠杆菌革兰氏染色大肠杆菌革兰氏染色 枯草杆菌革兰氏染色枯草杆菌革兰氏染色第五十七张，PPT共六十一页，创作于2022年6月二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术n电镜制样电镜制样显微样品制备之显微样品制备之 电镜制样电镜制样样品观察前要固定和干燥，一般要重金属盐染色或喷镀，提样品观察前要固定和干燥，一般要重金属盐染色或喷镀，提高反差，使电子图像清晰。高反差，使电子图像清晰。第五十八张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n透射电镜制样透射电镜制样 二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术显微样品制备之显微样品制备之 电镜制样电镜制样覆盖有支持网的载网（一般为铜网、不锈钢、金、覆盖有支持网的载网（一般为铜网、不锈钢、金、银等）银等）负染技术：电子密度高、本身不显示结构、与样品几负染技术：电子密度高、本身不显示结构、与样品几乎不反应的物质，如：乎不反应的物质，如：磷钨酸钠磷钨酸钠进行染色。进行染色。重金属盐不被样品吸附沉积在四周，若样品重金属盐不被样品吸附沉积在四周，若样品具有表面结构，重金属盐就进入表面凹陷部分，具有表面结构，重金属盐就进入表面凹陷部分，通过散射电子能力差异把样品外形和表面结构衬通过散射电子能力差异把样品外形和表面结构衬托出来。托出来。负染技术简便易行，病毒、细菌鞭毛、离体细负染技术简便易行，病毒、细菌鞭毛、离体细胞器、蛋白质和核酸可用此方法观察。胞器、蛋白质和核酸可用此方法观察。第五十九张，PPT共六十一页，创作于2022年6月n投影技术：投影技术：n超薄切片技术：超薄切片技术：二、显微镜和显微技术二、显微镜和显微技术透射电镜制样透射电镜制样 真空蒸发设备将铂或铬等对电子散射能力强的金属原子，由样品斜上方真空蒸发设备将铂或铬等对电子散射能力强的金属原子，由样品斜上方喷镀，提高样品反差。可用于病毒、细菌鞭毛、离体细胞器、蛋白质和核喷镀，提高样品反差。可用于病毒、细菌鞭毛、离体细胞器、蛋白质和核酸等观察。酸等观察。微生物个体虽小，微弱电子束无法透过整体标本，需制成微生物个体虽小，微弱电子束无法透过整体标本，需制成100纳米以纳米以下的超薄切片才能看清内部细微结构。基本操作过程：取样、固定、下的超薄切片才能看清内部细微结构。基本操作过程：取样、固定、脱水、浸透与包埋、切片、捞片、染色、观察。脱水、浸透与包埋、切片、捞片、染色、观察。第六十张，PPT共六十一页，创作于2022年6月感感谢谢大大家家观观看看第六十一张，PPT共六十一页，创作于2022年6月