RP-HPLC法测定舒心降脂片中大黄素的含量_舒心降脂片.docx

RP-HPLC法测定舒心降脂片中大黄素的含量_舒心降脂片 R969.4 A 16723783(2011)06032601 目的 建立用RP-HPLC测定舒心降脂片中大黄素的含量的方法。方法 用C18柱( Hypersil ODS柱，4. 6 mm×250 mm , 5 m )，流淌相为甲醇-0. 1 %磷酸溶液(85 : 15 )，流速1. 0 mL•min-1，柱温25，检测波长254nm。结果 该样品在进样量1.5-3.5g•mL-1时成良好的线性关系。平均回收率为：102.6%。相对偏差RSD为0.9%。结论 本方法操作简便，定量精确，可作为舒心降脂片的质量限制标准。 舒心降脂片；大黄素；反相高效液相色谱法 舒心降脂片（薄膜衣）是河北国金药业有限责任公司生产的制剂。原糖衣片处方收载于卫生部药品标准第14册，原质量标准无法进行有效的质量监控。现增加一个薄膜衣的规格，为了更好地限制该药品质量,本文参照有关文献1-3，采纳反相高效液相法( RP-HPLC )测定舒心降脂片中君药虎杖中大黄素的含量，操作简便，精确，可作为本品质量限制的方法。 1 试药与仪器 1.1 仪器：岛津LC-10AVP型高效液相色谱仪(单元泵,紫外检测器,浙大N2000色谱工作站)。 1.2 试药：大黄素比照品(中国药品生物制品检定所，批号:0713-200310，含量测定用);甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯;水为重蒸馏水;舒心降脂片（薄膜衣）样品由河北国金药业供应，规格0.25g/片（每片相当于原药材0.62g）。 2 方法与结果. 2.1 色谱条件：色谱柱：C18 Hypersil ODS柱，4. 6 mm×250 mm , 5 m；流淌相为甲醇-0. 1 %磷酸溶液(85 : 15 )，流速1. 0 mL•min-1，柱温25，检测波长254nm。 2.2 系统适用性试验 2.2.1 比照品溶液的制备：精密称取大黄素比照品5mg，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取5mL置100mL量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，吸取20L检测。 2.2.2 供试品溶液的制备：取装量差异项合格下的药物，去除薄膜衣，研细，取10g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇50mL超声处理30min，滤过，滤液至100mL量瓶中，药渣加甲醇30mL，接着超声处理10min，滤过，取滤液50mL置250mL圆底烧瓶中，蒸去甲醇，加2.5mol•L-1硫酸20mL，回流1h，冷至60，加氯仿30mL回流2h，移至分液漏斗中，洗液并入分液漏斗中，分取氯仿层至50mL量瓶中，酸液再用氯仿提取2次，氯仿液并入50mL量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，吸取氯仿液25mL，蒸干，加甲醇适量溶解转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，吸取20L测定，各个组分分别良好。 2.2.3 阴性比照液的制备：精密称取阴性比照品10g，同上法制成虎杖大黄素阴性比照溶液，精密量取20L,注入液相色谱仪，见图13。阴性比照液在大黄素峰位置无色谱峰，故定量不受其他色谱峰干扰。 2.3 线性关系考察：精密量取大黄素比照品2.5mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取3mL、4mL、5mL、6mL、7mL，各置100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取20L，依次注入液相色谱仪，结果以进样量为自变量，峰面积为因变量，进行线性回来，得回来方程：Y-1.052+309.61X, r0.9999，即在1.5-3.5g•mL-1范围内，大黄素浓度与峰面积呈良好线性关系。 2.4 方法精密度试验：精密量取大黄素比照品溶液20L,按2.2.1操作，重复进样5次，结果RSD（%）=0.1%，符合规定 2.5 加样回收率试验：称取已精确测定含量的样品按2.2.2处理，分别加入大黄素比照溶液（浓度为0.5mg•mL-1）的50%甲醇溶液4mL,6mL,8mL,按标准项下依法检测，进样量20L.计算回收率，舒心降脂片在0.2mg0.4mg范围内，回收率好，辅料不干扰测定。计算加样回收率，平均回收率为102.6%，结果RSD(%)0.9%，符合规定。 3 探讨 3.1 流淌相的选择：本试验考察了在不同比例甲醇-0. 1 %磷酸溶液系统中大黄素和杂质的分别状况，选择了分别状况最好的甲醇-0. 1 %磷酸溶液(85 : 15 )为流淌相。 3.2 大黄素的提取：大黄中的大黄素 以游离恩醌和结合恩醒的形式存在，其量不易限制，甲醇提取物经酸水解可使恩醌糖苷转变为游离恩醌，水解后的苷元大黄素量较稳定便于测定。 参考文献 1 中国药典2005年版S一部. 2 张文洁，张辉. 薄层扫描法测定复肝康中大黄素的含量J。辽宁中医学院学报，2000，2（1）:61. 作者单位：054000 邢台医学高等专科学校药剂教研室 注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文