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    实验六植物抗氧化酶活性的测定幻灯片.ppt

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    实验六植物抗氧化酶活性的测定幻灯片.ppt

    实验六植物抗氧化酶活性的测定第1页,共14页,编辑于2022年,星期五POD、SOD、CAT(AOX)(PPO)第2页,共14页,编辑于2022年,星期五抗氧化抗氧化酶与植物抗逆性关系与植物抗逆性关系第3页,共14页,编辑于2022年,星期五Journal of Experimental Botany,2009,60(2):377390H2O2H2O2第4页,共14页,编辑于2022年,星期五李忠光,2009.10第5页,共14页,编辑于2022年,星期五POD一、实验原理一、实验原理Peroxidase,POD第6页,共14页,编辑于2022年,星期五(ROS,H2O2)第7页,共14页,编辑于2022年,星期五PPOPolyphennol oxidase,PPO第8页,共14页,编辑于2022年,星期五抗氧化抗氧化酶动力学曲力学曲线第9页,共14页,编辑于2022年,星期五植物抗氧化酶提取和测定参考文献第10页,共14页,编辑于2022年,星期五二、二、实验方法方法1、提取:分、提取:分别取取0.5 g实验材料材料加入少加入少许石英砂和石英砂和3 ml提取液(提取液(50mmol/L PBS,pH5.8,内含内含0.mmol/LEDTA,1%PVP)充分研磨充分研磨转入离心管中入离心管中用用2 ml提取液提取液洗研洗研钵 5000 rpm离心离心10 min 上清液定容至上清液定容至5 ml 用用于于测定定POD和和PPO酶活性或分装后活性或分装后转至至-20或或-80保存。保存。第11页,共14页,编辑于2022年,星期五2、POD测测定定:取取POD反反应应混合液(混合液(10mmol/L愈愈创创木酚,木酚,5 mmol/L H2O2,用用PBSPBS溶解)溶解)2.90 ml2.90 ml,25 水浴水浴5 min,加入加入酶酶液液100 m ml(空白(空白调调零用提取液取代),立即零用提取液取代),立即记时记时,摇摇匀,匀,读读出反出反应应30 s和和3 min时时的的A A470470。用。用计计算算PODPOD活性。活性。3、PPO测测定:取定:取PPO反反应应混合液(混合液(20 mmol/L邻邻苯二酚,用苯二酚,用PBS溶解)溶解)2.8 ml,25 水浴水浴5 min,加入,加入酶酶液液0.2 ml(空(空白白调调零用零用提取液提取液取代),立即取代),立即记时记时,摇摇匀,匀,读读出反出反应应 30 s和和2 min时时的的A410。以以每分每分钟钟A A值变值变化化0.010.01所需要的所需要的酶酶液的液的量量为为一个活力一个活力单单位(位(U U),则则:第12页,共14页,编辑于2022年,星期五POD activities=(mmol.g-1FWmin-1)PPO activities=(U.g-1FW)4、计算、计算第13页,共14页,编辑于2022年,星期五5、思考题、思考题5.1 简述植物POD和PPO的生理意义。5.2在论述呼吸代谢多途径及其生理意义。第14页,共14页,编辑于2022年,星期五

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