外界因素对酶活性的影响幻灯片.ppt

外界因素对酶活性的影响第1页，共11页，编辑于2022年，星期五(一一一一)pH)pH值对酶活性的影响值对酶活性的影响值对酶活性的影响值对酶活性的影响 酶酶的的活活性性受受环环境境pH的的影影响响极极为为显显著著，通通常常各各种种酶酶只只有有在在一一定定的的pH范范围围内内才才能能表表现现它它的的活活，一一种种酶酶表表现现其其最最高高活活性性时时的的pHpH值值称称为为该该酶酶的的最最适适pH。高高高高于于于于或或或或低低低低于于于于最最最最适适适适pHpH值值值值时时时时，酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性降降降降低低低低。酶酶酶酶的的的的最最最最适适适适pH值值值值受受受受酶酶酶酶的的的的纯纯纯纯度度度度、底底底底物物物物的种类和浓度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。的种类和浓度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。的种类和浓度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。的种类和浓度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。(二二二二)温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响 每每每每种种种种酶酶酶酶都都都都有有有有其其其其最最适适温温度度，高高高高于于于于或或或或低低低低于于于于此此此此温温温温度度度度酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性都都都都降降降降低低低低。一一一一般般般般而而而而言言言言，酶酶酶酶处处处处于于于于过过过过高高高高的的的的温温温温度度度度环环环环境境境境中中中中，会会会会使使使使酶酶酶酶活活活活性性性性永永永永久久久久地地地地丧丧丧丧失失失失；而而而而处处处处于于于于极极极极低低低低温温温温度度度度的的的的环环环环境境境境中中中中只只只只会会会会使使使使酶酶酶酶活活活活性性性性受受受受到到到到抑抑抑抑制制制制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。一旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。一旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。一旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。第2页，共11页，编辑于2022年，星期五(三三)酶浓度对酶促反应速度的影响酶浓度对酶促反应速度的影响 在在其其它它条条件件不不变变的的情情况况下下，若若反反应应物物浓浓度度大大大大高高于于酶酶浓浓度度时时，则则反反应应速速度度随随酶酶浓浓度度增增加加而而增增加加，两两者者间间成正比关系，即：成正比关系，即：V=kEV=kE 但但但但若若若若反反反反应应应应底底底底物物物物浓浓浓浓度度度度较较较较低低低低，而而而而且且且且酶酶酶酶的的的的浓浓浓浓度度度度足足足足够够够够高高高高时时时时，增加酶浓度，反应速度基本不变。增加酶浓度，反应速度基本不变。增加酶浓度，反应速度基本不变。增加酶浓度，反应速度基本不变。(四四)离子对酶活性的影响离子对酶活性的影响 就就就就唾唾唾唾液液液液淀淀淀淀粉粉粉粉酶酶酶酶而而而而言言言言，低低低低浓浓浓浓度度度度ClCl一一一一可可可可以以以以增增增增加加加加酶酶酶酶活活活活性性性性，高高高高浓浓浓浓度度度度的的的的Cl一一一一或或或或者者者者低低低低浓浓浓浓度度度度的的的的Cu2+2+则则则则会会会会抑抑抑抑制制制制酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性，而而而而低低低低浓浓浓浓度度度度的的的的NaNa+、SOSO4 42-等等等等对对对对酶酶酶酶活活活活性性性性没没没没有有有有影影影影响响响响。不不不不同同同同的的的的酶酶酶酶对对对对不不不不同同同同的的的的离子具有不同的效应。离子具有不同的效应。离子具有不同的效应。离子具有不同的效应。第3页，共11页，编辑于2022年，星期五 三、实验操作三、实验操作(一一)pH对酶活性的影响对酶活性的影响1缓冲溶液的配制缓冲溶液的配制取取6只洁净的三角烧瓶，按表只洁净的三角烧瓶，按表1编号和加试剂：编号和加试剂：表表1.磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液的配制磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液的配制 三角烧瓶编号三角烧瓶编号 123456pH值值 5.4 5.4 6.2 6.2 6.8 6.8 7.0 7.0 7.47.48.08.00.2 mol0.2 molL L磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸氢二钠(m1)(m1)11.15 11.15 13.2213.22 15.4515.45 16.4716.47 18.1718.17 19.4519.45 0.1 mol0.1 molL L柠檬酸柠檬酸柠檬酸柠檬酸(m1)(m1)8.858.858.858.85 6.786.78 4.554.55 3.533.53 1.831.83 0.550.55第4页，共11页，编辑于2022年，星期五2.2.pHpH对酶活性的影响对酶活性的影响对酶活性的影响对酶活性的影响 取取取取6 6 6 6支洁净试管，分别编号后，按表支洁净试管，分别编号后，按表支洁净试管，分别编号后，按表支洁净试管，分别编号后，按表2 2 2 2操作：操作：操作：操作：表表表表2 pH2 pH2 pH2 pH对酶活性的影响对酶活性的影响对酶活性的影响对酶活性的影响管管管管 号号号号 123456pHpH值值 5.46.26.87.0 7.48.0缓冲液量缓冲液量(m1)(m1)333333含含NaClNaCl的的0.50.5淀粉淀粉(m1)(m1)222222稀释稀释100100倍唾液倍唾液(m1)(m1)222222充分摇匀充分摇匀充分摇匀充分摇匀 37373737保温，保温，保温，保温，l minl minl minl min后，用滴管从后，用滴管从后，用滴管从后，用滴管从3 3 3 3#管中吸管中吸管中吸管中吸l l l l滴反应液，放白瓷板用碘液检验滴反应液，放白瓷板用碘液检验滴反应液，放白瓷板用碘液检验滴反应液，放白瓷板用碘液检验(1(1(1(1滴滴滴滴)。以后每隔。以后每隔。以后每隔。以后每隔1min1min1min1min检验一次。当检验一次。当检验一次。当检验一次。当3 3 3 3#管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向6 6 6 6支管中加碘液支管中加碘液支管中加碘液支管中加碘液 碘液碘液(滴滴)222222充分摇匀充分摇匀充分摇匀充分摇匀实验结果实验结果 第5页，共11页，编辑于2022年，星期五(二二)温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响 取取取取3 3 3 3支洁净试管，按表支洁净试管，按表支洁净试管，按表支洁净试管，按表3 3 3 3操作：操作：操作：操作：表表表表3 3 温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响管管管管 号号号号 1 12 23 3pH6.8pH6.8pH6.8pH6.8磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液(m1)(m1)(m1)(m1)2 22 22 2含含含含NaClNaClNaClNaCl的的的的O.5O.5O.5O.5淀粉液淀粉液淀粉液淀粉液(m1)(m1)(m1)(m1)2 22 22 2稀唾液稀唾液稀唾液稀唾液1 1 1 1：50(m1)50(m1)50(m1)50(m1)1 11 11 1立即处理温度立即处理温度立即处理温度立即处理温度0 010 010 0 37 37 放置放置放置放置15min15min分别从分别从分别从分别从l l l l、2 2 2 2、3 3 3 3支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果 改变处理温度至改变处理温度至改变处理温度至改变处理温度至 3737 3737 3737 作用时间作用时间作用时间作用时间 15min15min再分别从再分别从再分别从再分别从1 1 1 1、2 2 2 2、3 3 3 3管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果 第6页，共11页，编辑于2022年，星期五(三三)酶浓度对酶活性的影响酶浓度对酶活性的影响 1 1取取3 3支支洁洁净净试试管管，编编号号，按按表表4 4加加入入淀淀粉粉液液，缓冲液，加毕后放人缓冲液，加毕后放人3737恒温水浴中保温恒温水浴中保温5 min5 min。表表4 4 酶浓度对酶活性的影响酶浓度对酶活性的影响 管号管号 含含含含NaClNaClNaClNaCl的的的的O O O O5 5 5 5淀粉淀粉淀粉淀粉液液液液 pH6.8pH6.8的的缓冲液缓冲液 稀释唾液稀释唾液 褪色褪色时间时间 105010013 ml3 ml 2 ml2 ml 1 ml1 ml23 ml3 ml 2 ml2 ml1 ml1 ml33 ml3 ml 2 ml2 ml1 ml1 ml第7页，共11页，编辑于2022年，星期五 2 2保保温温后后，快快速速加加不不同同浓浓度度的的稀稀释释唾唾液液，摇摇匀匀，立立即即放放入入3737恒恒温温水水浴浴中中。计计时时，并并每每隔隔1 1 minmin从从各各管管中中取取出出1 1滴滴，用用碘碘液液检检验验，记记录录从从加加进酶液至碘液检验为橙黄色所需时间。进酶液至碘液检验为橙黄色所需时间。第8页，共11页，编辑于2022年，星期五(四四)离子对酶活性的影响离子对酶活性的影响 取取3 3支洁净试管，编号后按表支洁净试管，编号后按表5 5操作：操作：表表5 5 离子对酶活性的影响离子对酶活性的影响管管 号号 1231 1 1 1NaCl(m1)NaCl(m1)NaCl(m1)NaCl(m1)10.10.10.10.1CuSOCuSOCuSOCuSO4 4 4 4(m1)(m1)(m1)(m1)1蒸馏水蒸馏水(m1)(m1)1O O O O1 1 1 1淀粉液淀粉液淀粉液淀粉液(m1)(m1)(m1)(m1)333100100100100倍稀释唾液倍稀释唾液倍稀释唾液倍稀释唾液(m1)(m1)(m1)(m1)1113737恒温恒温15min15min，然后冷却，然后冷却 碘液碘液(滴滴)222结果结果 第9页，共11页，编辑于2022年，星期五五、实验建议五、实验建议(1)(1)因因各各人人的的唾唾液液淀淀粉粉酶酶活活性性有有所所差差异异，若若某某一一碘碘液液检检验验结结果果为为全全部部变变为为淡淡黄黄色色，或或无无一一变变为为淡淡黄黄色色，则则需需增增大大或或减减少少唾唾液液稀稀释释倍倍数数，或者改变酶作用时间。或者改变酶作用时间。(2)(2)配制缓冲液时，吸量要准确。配制缓冲液时，吸量要准确。(3)(3)检验离子对酶活性影响时，切勿吸错或污染检验离子对酶活性影响时，切勿吸错或污染了试剂。了试剂。第10页，共11页，编辑于2022年，星期五六六 实验报告及作业实验报告及作业1 1以以反反应应速速度度为为纵纵坐坐标标，pHpHpHpH值值值值、温温温温度度度度或或或或酶酶酶酶浓浓浓浓度度度度为为为为横横横横坐坐坐坐标标标标，作出反应速度和作出反应速度和作出反应速度和作出反应速度和pHpHpHpH，温度或酶浓度的关系图。，温度或酶浓度的关系图。2 2唾液淀粉酶的最适唾液淀粉酶的最适唾液淀粉酶的最适唾液淀粉酶的最适pHpH和最适温度是多少？如何进一步确定？和最适温度是多少？如何进一步确定？和最适温度是多少？如何进一步确定？和最适温度是多少？如何进一步确定？3.3.3.3.温温度度为为00和和和和100100100100两两支支试试管管中中反反应应液液遇遇碘碘呈呈蓝蓝色色，其其原原因有何不同？若恢复最适温度，其结果为什么有差异？因有何不同？若恢复最适温度，其结果为什么有差异？4.4.4.4.如如何何确确定定氯氯化化钠钠中中氯氯离离子子是是激激活活剂剂，硫硫酸酸铜铜中中铜铜离离子子是是抑制剂？抑制剂？5.5.什什什什么么么么是是是是酶酶酶酶的的的的最最最最适适适适温温温温度度度度、最最最最适适适适pHpHpHpH，有有何何实实践践意意义义？温温度度、pHpHpHpH的改变对酶活性有何影响？的改变对酶活性有何影响？的改变对酶活性有何影响？的改变对酶活性有何影响？6.6.为为什什么么最最适适温温度度不不是是一一个个物物理理常常数数？最最适适pHpHpHpH是是是是否否否否为为为为一一一一个个个个常数？常数？常数？常数？7.7.7.7.进行酶的实验必须注意控制哪些条件？为什么？进行酶的实验必须注意控制哪些条件？为什么？第11页，共11页，编辑于2022年，星期五