柱色谱法分离幻灯片.ppt

柱色谱法分离1 1第1页，共10页，编辑于2022年，星期六 柱柱色色谱谱（柱柱上上层层析析）常常用用的的有有吸吸附附柱柱色色谱谱和和分分配配柱柱色色谱谱两两类类。吸吸附附柱柱色色谱谱常常用用氧氧化化铝铝和和硅硅胶胶作作固固定定相相。在在分分配配柱柱色色谱谱中中以以硅硅胶胶、硅硅藻藻土土和和纤纤维维素素作作为为支支持持剂剂，以以吸吸收收较较大大量量的的液液体体作作固固定定相相，而而支支持剂本身不起分离作用。持剂本身不起分离作用。吸吸附附柱柱色色谱谱通通常常在在玻玻璃璃管管中中填填入入表表面面积积很很大大，经经过过活活化化的的多多孔孔性性或或粉粉状状固固体体吸吸附附剂剂。当当待待分分离离的的混混合合物物溶溶液液流流过过吸吸附附柱柱时时，各各种种成成分分同同时时被被吸吸附附在在柱柱的的上上端端。当当洗洗脱脱剂剂流流下下时时，由由于于不不同同化化合合物物吸吸附附能能力力不不同同，往往下下洗洗脱脱的的速速度度也也不不同同，于于是是形形成成了了不不同同层层次次，即即溶溶质质在在柱柱中中自自上上而而下下按按对对吸吸附附剂剂亲亲和和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时第2页，共10页，编辑于2022年，星期六 常常用用的的吸吸附附剂剂有有氧氧化化铝铝、硅硅胶胶、氧氧化化镁镁、碳碳酸酸钙钙和和活活性性炭炭等等，一一般般要要经经过过纯纯化化和和活活性性处处理理。颗颗粒粒大大小小均均匀匀，粒粒小小，表表面面积积大大吸吸附附能能力力就就高高，但但过过小小，溶溶剂剂流流速速太太慢慢。氧氧化化铝铝有有：酸酸性性PHPH为为4 4，中中性性PH=7.5PH=7.5，碱碱性性PH=10PH=10，3 3种种，大大多多数数吸吸附附剂剂都都能能强强烈烈吸吸水水，使使活活性性降降低低，通通常常用用加加热热方方法法使使吸吸附附剂剂活活化化。活活性性等等级级可可用用勃勃劳劳克克曼曼标标准准测测定定法，分五级。法，分五级。I I级活性最高，级活性最高，V V级吸附力最弱。级吸附力最弱。已已经经分分开开的的溶溶质质可可以以从从柱柱上上分分别别洗洗出出收收集集；或或者者将将柱柱吸吸干干，挤挤出出后后按按色色带带分分割割开开，在在用用溶溶剂剂将将各各色色带带中中的的溶溶质质萃萃取取出出来来。对对于于柱柱上上不不显显色色的的化化合合物物分分离离时时，可可用用紫紫外外光光照照射射后后所所呈呈现现的的荧荧光光来来检检查查，或或在在用用溶溶剂剂洗洗脱脱时时，分分别别收收集集洗洗脱脱液液逐逐个个加加以鉴定。以鉴定。第3页，共10页，编辑于2022年，星期六色色层层的的展展开开首首先先使使用用极极性性较较小小的的溶溶剂剂，使使最最容容易易脱脱附附的的组组分分分分离离。然然后后加加入入不不同同比比例例的的极极性性溶溶剂剂配配成成的的洗洗脱脱剂剂，将将极极性性较较大大的的化化合合物物自自色色谱谱柱柱中中洗洗脱脱下下来来。所所用用溶溶剂剂必必须须纯纯粹粹、干干燥燥。吸吸附附剂剂用用量量为为被被分分离离样样品品量量的的30403040倍倍，需需要要时时可可增增至至100100倍倍。柱柱高高与与直直径径之比是之比是7575：1 1。（利用相似相溶原理）。（利用相似相溶原理）本实验采用干法装柱。本实验采用干法装柱。化合物的吸附性与它们的极性成正比。化合物的吸附性与它们的极性成正比。第4页，共10页，编辑于2022年，星期六一、一、实验目的实验目的1 1、了解掌握柱色谱原理和方法、了解掌握柱色谱原理和方法2 2、进一步掌握旋转蒸发仪的使用方法。、进一步掌握旋转蒸发仪的使用方法。二、试剂二、试剂 5g5g氧氧化化铝铝，自自制制乙乙酰酰二二茂茂铁铁（溶溶于于1.5ml1.5ml正正己己烷烷），石石英英砂砂。洗洗脱脱剂剂：正正己己烷烷，1 1：1=1=二二氯氯甲甲烷烷：正正己己烷烷，9 9：1=1=二二氯氯甲甲烷：正己烷，烷：正己烷，9 9：1=1=二氯甲烷：甲醇。二氯甲烷：甲醇。第5页，共10页，编辑于2022年，星期六三、装置图三、装置图溶剂石英砂氧化铝砂芯柱色谱装置柱色谱装置第6页，共10页，编辑于2022年，星期六四、操作规程四、操作规程收集黄色产物于一已知重量烧瓶中收集黄色产物于一已知重量烧瓶中第7页，共10页，编辑于2022年，星期六第8页，共10页，编辑于2022年，星期六五、操作要点五、操作要点1 1、色色谱谱柱柱一一定定要要干干燥燥，若若潮潮湿湿可可用用吹吹风风机机吹吹干干或或用用无无水水有有机机溶溶剂剂（甘油等）清洗。（甘油等）清洗。2 2、装装柱柱要要紧紧密密均均匀匀，无无裂裂缝缝，无无气气泡泡，是是分分离离效效果果好好坏坏的的关关键键。但装填时过分敲击，又会太紧密而流速太慢。但装填时过分敲击，又会太紧密而流速太慢。3 3、加加入入砂砂子子的的目目的的是是在在加加料料时时不不致致把把吸吸附附剂剂冲冲起起，而而影影响响分分离离效效果。果。第9页，共10页，编辑于2022年，星期六4、在在整整个个洗洗脱脱过过程程中中，为为了了保保持持色色谱谱柱柱的的均均一一性性，应应使使柱柱中中洗洗脱脱剂剂液液面面始始终终保保持持不不低低于于石石英英砂砂面面。否否则则柱柱中中溶溶剂剂流流干干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色的均一性。时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色的均一性。5 5、最好用移液管或滴管将分离溶液转移至柱中。最好用移液管或滴管将分离溶液转移至柱中。6 6、可以每次倒入可以每次倒入10ml10ml洗脱剂进行洗脱。洗脱剂进行洗脱。第10页，共10页，编辑于2022年，星期六