分子生物学实验室仪器操作简介课件.ppt

分分子子生生物物学学2010实实验验关于分子生物学实验室仪器操作简介现在学习的是第1页，共33页1.微量移液器微量移液器现在学习的是第2页，共33页 微量移液器有数字可调式和固定式两种型号，是计量和转移微量移液器有数字可调式和固定式两种型号，是计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读数。微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读数。现在学习的是第3页，共33页量液的操作步骤：量液的操作步骤：第一停点第二停点A A 保持微量移液器垂直，将按钮压至第一停点；保持微量移液器垂直，将按钮压至第一停点；B B 微量移液器头尖端浸入溶液，缓慢释放按钮；微量移液器头尖端浸入溶液，缓慢释放按钮；C C 保持微量移液器垂直，将微量移液器头与容器壁接触，慢保持微量移液器垂直，将微量移液器头与容器壁接触，慢 慢压下按钮至第一停点；慢压下按钮至第一停点；D D 压至第二停点把溶液完全释放出；压至第二停点把溶液完全释放出；E E 释放按钮回原状。释放按钮回原状。现在学习的是第4页，共33页 1 1 1 1 未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。2 2 2 2 一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读 数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。3 3 3 3 不要横放或倒拿带有残余液体吸嘴的移液器。不要横放或倒拿带有残余液体吸嘴的移液器。不要横放或倒拿带有残余液体吸嘴的移液器。不要横放或倒拿带有残余液体吸嘴的移液器。4 4 4 4 不要用大量程的移液器移取小体积样品。不要用大量程的移液器移取小体积样品。不要用大量程的移液器移取小体积样品。不要用大量程的移液器移取小体积样品。5.5.5.5.移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。量液操作注意问题：量液操作注意问题：量液操作注意问题：量液操作注意问题：现在学习的是第5页，共33页2.台式高速离心机台式高速离心机离心机的分类离心机的分类低速：每分钟几千转低速：每分钟几千转高速：每分钟高速：每分钟13万转万转超速：每分钟超速：每分钟3万转以上万转以上现在学习的是第6页，共33页低速：细胞等大分子低速：细胞等大分子 高速：高速：DNADNA，蛋白等，蛋白等 超速超速:病毒，蛋白，细胞器等病毒，蛋白，细胞器等基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术制备实验中都离不开低温离心技术 离心机的功能：分离离心机的功能：分离纯化纯化现在学习的是第7页，共33页1 1 1 1、把离心机放置于平面桌或平面台上，检查离心机是否、把离心机放置于平面桌或平面台上，检查离心机是否、把离心机放置于平面桌或平面台上，检查离心机是否、把离心机放置于平面桌或平面台上，检查离心机是否 放置平稳。放置平稳。放置平稳。放置平稳。2 2 2 2、将离心管对称放入转子内，且要事先平衡。、将离心管对称放入转子内，且要事先平衡。、将离心管对称放入转子内，且要事先平衡。、将离心管对称放入转子内，且要事先平衡。3 3 3 3、锁紧门盖。、锁紧门盖。、锁紧门盖。、锁紧门盖。4 4 4 4、插上电源插座，按下电源开关。、插上电源插座，按下电源开关。、插上电源插座，按下电源开关。、插上电源插座，按下电源开关。5 5 5 5、设置转子号、转速、时间、设置转子号、转速、时间、设置转子号、转速、时间、设置转子号、转速、时间.注意：对应的转子不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。注意：对应的转子不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。注意：对应的转子不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。注意：对应的转子不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。6 6 6 6、当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。、当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。、当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。、当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。台式高速离心机使用步骤台式高速离心机使用步骤现在学习的是第8页，共33页注意事项注意事项注意事项注意事项：1 1 1 1、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。2 2 2 2、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和均匀受力，以免产生振动。均匀受力，以免产生振动。均匀受力，以免产生振动。均匀受力，以免产生振动。3 3 3 3、离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，、离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，、离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，、离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须对称放入。此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须对称放入。此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须对称放入。此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须对称放入。4 4 4 4、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。5 5 5 5、离心机彻底停止后，才可开盖，取样。、离心机彻底停止后，才可开盖，取样。、离心机彻底停止后，才可开盖，取样。、离心机彻底停止后，才可开盖，取样。现在学习的是第9页，共33页低温冷冻离心机1.1.1.1.把离心机水平安放于地面把离心机水平安放于地面把离心机水平安放于地面把离心机水平安放于地面2.2.2.2.使用前开机预冷使用前开机预冷使用前开机预冷使用前开机预冷3.3.3.3.对应转子重量要平衡对应转子重量要平衡对应转子重量要平衡对应转子重量要平衡4.4.4.4.按操作规程操作按操作规程操作按操作规程操作按操作规程操作现在学习的是第10页，共33页3.PCR仪仪现在学习的是第11页，共33页 PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，如基仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等。因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等。PCR仪，也称仪，也称DNA热循环仪、基因扩增仪，能使一对寡热循环仪、基因扩增仪，能使一对寡核苷酸引物结合到正负核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段，它的每一循环包括片段，它的每一循环包括DNA变性、复性、延伸三个反应。变性、复性、延伸三个反应。现在学习的是第12页，共33页操作程序操作程序:1 1）开机：打开电源，显示主界面；）开机：打开电源，显示主界面；2 2）创建程序：使用）创建程序：使用”createcreate”输入新程序（包括输入新程序（包括PCRPCR循循 环数，预变性、变性、复性、延伸的时间和温环数，预变性、变性、复性、延伸的时间和温 度），保存程序（包括用户名和方法名）度），保存程序（包括用户名和方法名）;3 3）放入样品，盖上盖子）放入样品，盖上盖子;4 4）在所建用户名下按）在所建用户名下按“run”run”键，找到设定的程序，键，找到设定的程序，按按“startstart”键键启动程序启动程序;5 5）运行结束后按）运行结束后按“stopstop”键停止运行，取出样品，关闭电源。键停止运行，取出样品，关闭电源。现在学习的是第13页，共33页1 1、预变性：可用、预变性：可用、预变性：可用、预变性：可用94949595，2 210min,10min,一般用一般用一般用一般用 5min5min。2 2、变性：一般用、变性：一般用、变性：一般用、变性：一般用9494，30s2min,30s2min,一般一般一般一般45s1min45s1min。3 3、退火：温度自定，、退火：温度自定，、退火：温度自定，、退火：温度自定，30s2min30s2min。4 4、延伸：、延伸：、延伸：、延伸：7272，对于，对于，对于，对于(1kb=1min,(1kb=1min,每增加每增加每增加每增加1kb1kb加加加加1min)1min)。5 5、循环数：一般、循环数：一般、循环数：一般、循环数：一般25253535个循环个循环个循环个循环(2,3,4(2,3,4步循环）。步循环）。步循环）。步循环）。6 6、最终延伸：、最终延伸：、最终延伸：、最终延伸：7272，5 515min15min。7 7、保存：、保存：、保存：、保存：44，时间设为，时间设为，时间设为，时间设为0-60min0-60min。8 8、ENDEND。如何设置如何设置如何设置如何设置PCRPCR程序：程序：程序：程序：现在学习的是第14页，共33页4.电电泳泳图图像分析系像分析系统统现在学习的是第15页，共33页现在学习的是第16页，共33页系统简介：系统简介：系统可以通过紫外系统可以通过紫外/可见光分析装置及透光扫描仪直接获可见光分析装置及透光扫描仪直接获得核酸、蛋白质凝胶电泳图像。系统配置有得核酸、蛋白质凝胶电泳图像。系统配置有SmartViewSmartView生物生物电泳图像分析软件，可以进行密度扫描、密度定量、分子电泳图像分析软件，可以进行密度扫描、密度定量、分子量计算等电泳分析。此外，该系统含有多种图像滤波器，量计算等电泳分析。此外，该系统含有多种图像滤波器，可降低图像的噪音，从而获得较清晰的图像。可降低图像的噪音，从而获得较清晰的图像。现在学习的是第17页，共33页操作步骤：操作步骤：1）将电泳样品放入分析装置中将电泳样品放入分析装置中2）打开电脑，运行打开电脑，运行Smart View 软件，单击软件，单击“Import”键进入键进入 图像获取项目栏，图像获取项目栏，选择选择“获取视频图像获取视频图像”键，进键，进行图像采集行图像采集3）选选 择紫外或可见光源，在图像采集窗口中调节好图像大择紫外或可见光源，在图像采集窗口中调节好图像大 小、亮度及焦距小、亮度及焦距4）单击单击“采集图像采集图像”键，根据图像质量选择好优化摄影时间键，根据图像质量选择好优化摄影时间 （一般情况下在（一般情况下在12秒左右秒左右），即开始采集。，即开始采集。1 1、图像采集、图像采集现在学习的是第18页，共33页现在学习的是第19页，共33页2、图像保存、图像保存 单击单击“System 键键”选择选择“另保存图像为另保存图像为”键，出现一个键，出现一个“图像文件登记图像文件登记”窗口，窗口，输入标题，实验人，实验日期，实验摘要等信息，输入标题，实验人，实验日期，实验摘要等信息，按按“保存保存”键完成图像文件登记键完成图像文件登记，同时出现，同时出现“另保存图像为另保存图像为”窗口，输入窗口，输入图像名，保存图像至桌面。图像名，保存图像至桌面。3、关闭操作系统、关闭操作系统（1）关闭紫外）关闭紫外/可见光。可见光。（2）退出软件界面。）退出软件界面。（3）关闭紫外与可见分析装置的电源。）关闭紫外与可见分析装置的电源。现在学习的是第20页，共33页注意事项：注意事项：1、不要戴不要戴“脏脏”手套触摸电脑鼠标、键盘及其它位置；手套触摸电脑鼠标、键盘及其它位置；2、不要戴不要戴“脏脏”手套触摸仓门和灯箱电源开关；手套触摸仓门和灯箱电源开关；3、不要戴不要戴“脏脏”手套触摸外接电源开关；手套触摸外接电源开关；4、在图像获取过程中，若通过软件打开紫外、在图像获取过程中，若通过软件打开紫外/可见光，则可见光，则 必须再通过软件关闭，必须再通过软件关闭，若通过紫外与可见分析装置上若通过紫外与可见分析装置上 打开紫外打开紫外/可见光，则从分析装置上关闭，可见光，则从分析装置上关闭，严禁互用，严禁互用，导致紫外灯长亮。导致紫外灯长亮。现在学习的是第21页，共33页5.电泳仪电泳仪DYY-12型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂）型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂）现在学习的是第22页，共33页操作程序：操作程序：1）电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接（极）电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接（极 性不要接反）；性不要接反）；2）打开电源，设置参数（选择稳压稳流方式及电压电）打开电源，设置参数（选择稳压稳流方式及电压电 流范围）；流范围）；3）按）按“启动启动”启动程序（输出为高电压，注意安全）；启动程序（输出为高电压，注意安全）；4）电泳结束，按）电泳结束，按“停止停止”键终止程序。键终止程序。现在学习的是第23页，共33页注意事项注意事项注意事项注意事项1 1 1 1、电泳仪工作时，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也、电泳仪工作时，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也、电泳仪工作时，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也、电泳仪工作时，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，以免触电，同时要求仪器有良好接地端，不能到电泳槽内取放东西，以免触电，同时要求仪器有良好接地端，不能到电泳槽内取放东西，以免触电，同时要求仪器有良好接地端，不能到电泳槽内取放东西，以免触电，同时要求仪器有良好接地端，以防漏电。以防漏电。以防漏电。以防漏电。2 2 2 2、仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路。、仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路。、仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路。、仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路。3 3 3 3、由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳所通过的电流量也、由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳所通过的电流量也、由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳所通过的电流量也、由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。4 4 4 4、使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，、使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，、使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，、使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外。须立即切断电源，进行检修，以免发生意外。须立即切断电源，进行检修，以免发生意外。须立即切断电源，进行检修，以免发生意外。现在学习的是第24页，共33页使用及性能使用及性能：摇床（振荡器）广泛用于对温摇床（振荡器）广泛用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌度和振荡频率有较高要求的细菌培养、发酵、杂交、生物化学反培养、发酵、杂交、生物化学反应以及酶和组织研究等。实验室应以及酶和组织研究等。实验室常用的液体摇匀，微生物、细菌常用的液体摇匀，微生物、细菌和细胞培养。和细胞培养。6.恒温气浴摇床恒温气浴摇床SHK-99-SHK-99-型台式空气恒温摇床型台式空气恒温摇床现在学习的是第25页，共33页1 1 1 1）样品瓶牢固放入弹簧夹中；）样品瓶牢固放入弹簧夹中；）样品瓶牢固放入弹簧夹中；）样品瓶牢固放入弹簧夹中；2 2 2 2）接通电源开关，设定参数（温度、时间、转速等）；）接通电源开关，设定参数（温度、时间、转速等）；）接通电源开关，设定参数（温度、时间、转速等）；）接通电源开关，设定参数（温度、时间、转速等）；3 3 3 3）按启动键启动仪器，按暂停键可暂停托盘的旋转；）按启动键启动仪器，按暂停键可暂停托盘的旋转；）按启动键启动仪器，按暂停键可暂停托盘的旋转；）按启动键启动仪器，按暂停键可暂停托盘的旋转；4 4 4 4）按下控制面板的电源键两秒，显示屏显示消失，关闭电源总开关。）按下控制面板的电源键两秒，显示屏显示消失，关闭电源总开关。）按下控制面板的电源键两秒，显示屏显示消失，关闭电源总开关。）按下控制面板的电源键两秒，显示屏显示消失，关闭电源总开关。操作程序：操作程序：现在学习的是第26页，共33页7.超净工作台超净工作台使用及性能：使用及性能：超净工作台为分子生物学超净工作台为分子生物学无菌操作提供可能，分为无菌操作提供可能，分为垂直送风和水平送风两种。垂直送风和水平送风两种。现在学习的是第27页，共33页 超净台由三相电机作鼓风动力，空气通过由特制超净台由三相电机作鼓风动力，空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清器超级滤清器”后吹后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓即所谓“高效的特殊空气高效的特殊空气”，能够防止附近空气可能，能够防止附近空气可能袭扰而引起的污染，同时也不会妨碍采用酒精灯或本袭扰而引起的污染，同时也不会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌条件下操作，可以保持无菌材料在转移接种过程中不条件下操作，可以保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。受污染。现在学习的是第28页，共33页台面清洁消毒台面清洁消毒紫外灯灭菌紫外灯灭菌紫外灯灭菌紫外灯灭菌30303030分钟分钟分钟分钟进行无菌操作进行无菌操作清理工作台面清理工作台面紫外消毒紫外消毒3030分钟分钟关闭紫外灯、电源关闭紫外灯、电源操作程序：操作程序：1 1）工作台面上，不要存）工作台面上，不要存 放不必要的物品，以放不必要的物品，以 保持工作区内的洁净保持工作区内的洁净 气流不受干扰。气流不受干扰。2 2 2 2）操作时一定注意关掉操作时一定注意关掉 紫外灯，防止对实验紫外灯，防止对实验 人员造成伤害。人员造成伤害。注意事项：注意事项：现在学习的是第29页，共33页8.灭菌锅灭菌锅使用及性能：使用及性能：细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用的试剂、细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用的试剂、器皿及实验用具，应严格灭菌；器皿及实验用具，应严格灭菌；对于经过导入对于经过导入DNADNA重组分子的菌株，操作后必重组分子的菌株，操作后必须进行严格的高压消毒灭活处理须进行严格的高压消毒灭活处理 。现在学习的是第30页，共33页1 1）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没至）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没至板上；板上；2 2）通电：打开控制面板上电源开关，若水位低则红灯亮；）通电：打开控制面板上电源开关，若水位低则红灯亮；3 3）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不宜过大，各包装之间留有间）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不宜过大，各包装之间留有间隙，利于蒸汽穿透，提高灭菌效果；隙，利于蒸汽穿透，提高灭菌效果；3 3）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，压紧锅盖；）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，压紧锅盖；4 4）灭菌：）灭菌：121121，20min20min；如为液体，液体必须装在可耐高温的；如为液体，液体必须装在可耐高温的玻璃器皿中，不宜超过玻璃器皿中，不宜超过2/32/3；5 5）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气。）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气。操作程序：操作程序：现在学习的是第31页，共33页1 1）如是手动的灭菌锅，灭菌过程中，应注意排）如是手动的灭菌锅，灭菌过程中，应注意排 净锅内冷空气，否则会影响灭菌效果。净锅内冷空气，否则会影响灭菌效果。2 2）灭菌结束后，要等温度降为）灭菌结束后，要等温度降为“0 0”，才可打开灭，才可打开灭 菌锅锅盖；菌锅锅盖；3 3）高压蒸汽灭菌时，须保持高温高压，因此必）高压蒸汽灭菌时，须保持高温高压，因此必 须严格按照操作规程操作，否则易发生意外须严格按照操作规程操作，否则易发生意外 事故。事故。注意事项：注意事项：现在学习的是第32页，共33页分分子子生生物物学学2010实实验验感谢大家观看9/26/20229/26/2022现在学习的是第33页，共33页