化学毒物的一般毒性作用讲稿.ppt

关于化学毒物的一般毒性作用第一页，讲稿共七十九页哦中毒中毒有毒化学物与机体相交作用，导致机体的结有毒化学物与机体相交作用，导致机体的结构和功能产生不良改变构和功能产生不良改变机体本身的属性机体本身的属性化学物暴露的程度与途径化学物暴露的程度与途径第二页，讲稿共七十九页哦毒性机制研究的内容毒性机制研究的内容毒物进入机体的途径毒物进入机体的途径毒物与靶分子交互作用毒物与靶分子交互作用毒作用表现毒作用表现机体对损害作用的反应机体对损害作用的反应 第三页，讲稿共七十九页哦毒作用机制的复杂性毒作用机制的复杂性有毒化学物质数量宠多有毒化学物质数量宠多损害的生物化学过程复杂损害的生物化学过程复杂中毒的表现多种多样中毒的表现多种多样可能导致毒性的机制各不相同可能导致毒性的机制各不相同与靶器官直接作用与靶器官直接作用破坏微环境产生有害影响破坏微环境产生有害影响第四页，讲稿共七十九页哦几个基本概念几个基本概念毒效应强度毒效应强度取决于终毒物在其作用位点的浓度和持续时取决于终毒物在其作用位点的浓度和持续时间。间。第五页，讲稿共七十九页哦几个基本概念几个基本概念终毒物终毒物指与内源靶分子（如受体、酶、指与内源靶分子（如受体、酶、DNA、微、微丝蛋白、脂质）反应或严重地改变生物学丝蛋白、脂质）反应或严重地改变生物学（微）环境、启动结构与（或）功能改变（微）环境、启动结构与（或）功能改变而表现出毒性的物质。而表现出毒性的物质。第六页，讲稿共七十九页哦几个基本概念几个基本概念暴露的母体：强酸强碱、重金属、暴露的母体：强酸强碱、重金属、CO等等CH3CH3N-NOCH3+（亲电子基团）（亲电子基团）直接毒性作用直接毒性作用第七页，讲稿共七十九页哦几个基本概念几个基本概念代谢活化（代谢活化（metabolic activation）增毒（增毒（toxication）对硫磷对硫磷对氧磷（高活性胆碱酯酶抑制剂）对氧磷（高活性胆碱酯酶抑制剂）第八页，讲稿共七十九页哦常见的增毒作用常见的增毒作用最为常见的增毒作用是使外源化学物（如氧最为常见的增毒作用是使外源化学物（如氧和氧化氮）转变为：和氧化氮）转变为：亲电物（亲电物（electrophiles）自由基（自由基（free radicals）亲核物（亲核物（mucleophiles）还化还原性反应物（还化还原性反应物（redox-active reductants）第九页，讲稿共七十九页哦亲电物的形成亲电物的形成亲电物是指含有一个缺电子原子（亲电物是指含有一个缺电子原子（+）的分）的分子，使它能通过与亲核物中的富电子原子子，使它能通过与亲核物中的富电子原子（-）共享电子对而发生反应）共享电子对而发生反应乙醇乙醇乙醛乙醛黄曲霉素黄曲霉素B1B1-8，9-环氧化物环氧化物苯并（苯并（a）芘）芘BP-7，8-二醇二醇-环氧化物环氧化物对硫磷对硫磷对氧磷对氧磷第十页，讲稿共七十九页哦亲电物的形成亲电物的形成亲电物是指含有一个缺电子原子（亲电物是指含有一个缺电子原子（+）的分）的分子，使它能通过与亲核物中的富电子原子子，使它能通过与亲核物中的富电子原子（-）共享电子对而发生反应）共享电子对而发生反应乙醇乙醇乙醛乙醛黄曲霉素黄曲霉素B1B1-8，9-环氧化物环氧化物苯并（苯并（a）芘）芘BP-7，8-二醇二醇-环氧化物环氧化物对硫磷对硫磷对氧磷对氧磷Ag+、Cd2+、Hg2+，等，等第十一页，讲稿共七十九页哦自由基的形成自由基的形成独立游离存在的的带有不成对电子的分子、独立游离存在的的带有不成对电子的分子、原子或离子。原子或离子。特点特点产生 清除顺磁性顺磁性顺磁性顺磁性化学性质十分活泼化学性质十分活泼化学性质十分活泼化学性质十分活泼反应性极高，半减期极短反应性极高，半减期极短反应性极高，半减期极短反应性极高，半减期极短氧化应激（氧化应激（oxidative stress），进而造成机体损伤），进而造成机体损伤第十二页，讲稿共七十九页哦自由基对机体损害作用机制自由基对机体损害作用机制脂质过氧化损伤脂质过氧化损伤细胞器和细胞膜结构破坏细胞器和细胞膜结构破坏引起细胞毒性引起细胞毒性对对DNA的影响（氧化和加合）的影响（氧化和加合）LDL的氧化修饰的氧化修饰第十三页，讲稿共七十九页哦自由基对机体损害作用机制自由基对机体损害作用机制蛋白质氧化损伤蛋白质氧化损伤引起蛋白质凝集、交联、降解、断裂，出现引起蛋白质凝集、交联、降解、断裂，出现生理功能受损生理功能受损组织细胞毒性与坏死组织细胞毒性与坏死免疫反应免疫反应致癌作用（非突变机理）致癌作用（非突变机理）第十四页，讲稿共七十九页哦主要毒性作用机制主要毒性作用机制核酸的氧化损伤核酸的氧化损伤DNA断裂，缺失突变断裂，缺失突变启动修复系统，如修复功能受损，引起突变启动修复系统，如修复功能受损，引起突变活化癌基因活化癌基因细胞毒性细胞毒性改变蛋白质改变蛋白质DNA相互作用相互作用致突变作用致突变作用形成活化的癌基因形成活化的癌基因第十五页，讲稿共七十九页哦亲核物的形成亲核物的形成较少见较少见氰化物的形成氰化物的形成氰化物的形成氰化物的形成苦杏仁经肠道细菌苦杏仁经肠道细菌苦杏仁经肠道细菌苦杏仁经肠道细菌-糖苷酶催化形成糖苷酶催化形成糖苷酶催化形成糖苷酶催化形成氰化物氰化物氰化物氰化物丙烯腈环氧化后与欲胱甘肽结合后形成丙烯腈环氧化后与欲胱甘肽结合后形成丙烯腈环氧化后与欲胱甘肽结合后形成丙烯腈环氧化后与欲胱甘肽结合后形成氰化物氰化物氰化物氰化物硝普钠经巯基诱导降解后形成硝普钠经巯基诱导降解后形成硝普钠经巯基诱导降解后形成硝普钠经巯基诱导降解后形成氰化物氰化物氰化物氰化物二卤甲烷经氧化脱卤产生的二卤甲烷经氧化脱卤产生的二卤甲烷经氧化脱卤产生的二卤甲烷经氧化脱卤产生的COCO亚硒酸盐与谷胱甘肽的巯基反应形成的亚硒酸盐与谷胱甘肽的巯基反应形成的亚硒酸盐与谷胱甘肽的巯基反应形成的亚硒酸盐与谷胱甘肽的巯基反应形成的硒化氢硒化氢硒化氢硒化氢第十六页，讲稿共七十九页哦氧化还原活性还原剂的形成氧化还原活性还原剂的形成亦较少见亦较少见硝酸盐硝酸盐亚硝酸盐亚硝酸盐高铁血红蛋白高铁血红蛋白Cr6+Cr5+VitC 黄素酶黄素酶第十七页，讲稿共七十九页哦化学毒物产生毒性的可能途径化学毒物化学毒物吸收、分布、代谢、排汇吸收、分布、代谢、排汇与靶分子相互作用与靶分子相互作用细胞功能失调、损伤细胞功能失调、损伤细胞修复功能失调细胞修复功能失调毒毒性性（1）（2）（3）第十八页，讲稿共七十九页哦化学毒物产生毒性的可能途径化学毒物产生毒性的可能途径最直接途径最直接途径毒物在机体的重要部位出现，不毒物在机体的重要部位出现，不与靶分子作用与靶分子作用较为复杂途径较为复杂途径毒物毒物机体机体靶部位靶部位靶分子靶分子毒作用毒作用最为复杂的途径最为复杂的途径毒物毒物机体机体靶部位靶部位靶分子靶分子细胞功能结构细胞功能结构/功能紊乱功能紊乱启动分子、细胞或组织启动分子、细胞或组织水平的修复机制水平的修复机制毒性作用发生毒性作用发生第十九页，讲稿共七十九页哦主要毒性作用机制主要毒性作用机制化学毒物与细胞大分子的共价结合化学毒物与细胞大分子的共价结合与蛋白质共价结合：组织细胞毒性与坏死与蛋白质共价结合：组织细胞毒性与坏死 免疫反应免疫反应 致癌作用（非突变机理）致癌作用（非突变机理）与核酸分子共价结合：细胞毒性与核酸分子共价结合：细胞毒性 改变蛋白质改变蛋白质DNA相互作用相互作用 致突变作用致突变作用 形成活化的癌基因。形成活化的癌基因。第二十页，讲稿共七十九页哦化学毒物的一般毒性作用化学毒物的一般毒性作用第二十一页，讲稿共七十九页哦概述概述外源性化学物外源性化学物的毒性作用的毒性作用一般毒性作用一般毒性作用致突变作用致突变作用致癌作用致癌作用发育毒性与致畸作用发育毒性与致畸作用急性毒性作用急性毒性作用蓄积毒性作用蓄积毒性作用亚慢性和慢性毒性作用亚慢性和慢性毒性作用基因突变基因突变染色体突变染色体突变非整倍体和多倍体非整倍体和多倍体第二十二页，讲稿共七十九页哦概述概述靶器官靶器官 毒性毒性血液毒理学血液毒理学免疫毒理学免疫毒理学生殖毒理学生殖毒理学神经系统和行为毒理学神经系统和行为毒理学呼吸毒理学呼吸毒理学肝脏毒理学肝脏毒理学肾脏毒理学肾脏毒理学心血管毒理学心血管毒理学皮肤毒理学皮肤毒理学第二十三页，讲稿共七十九页哦概述概述按接触毒物时间的长短，将产生的一般毒性作用分为：按接触毒物时间的长短，将产生的一般毒性作用分为：急性毒性、亚慢性毒性和慢性毒性急性毒性、亚慢性毒性和慢性毒性相应地所观察和评价毒效应的试验即为急性毒性相应地所观察和评价毒效应的试验即为急性毒性试验、亚慢性毒性试验和慢性毒性试验试验、亚慢性毒性试验和慢性毒性试验对外来化学物（新食品、药品、农药、化妆品等）对外来化学物（新食品、药品、农药、化妆品等）一般毒性的观察是毒理学的经常生工作，对防治外一般毒性的观察是毒理学的经常生工作，对防治外源性化学物所致急慢性中毒、毒理学安全性评价和源性化学物所致急慢性中毒、毒理学安全性评价和危险度评定、卫生标准制定、管理毒理学的决策有危险度评定、卫生标准制定、管理毒理学的决策有重要意义。重要意义。第二十四页，讲稿共七十九页哦一般毒性作用一般毒性作用&1 急性毒性作用急性毒性作用&2 蓄积毒性蓄积毒性&3 亚慢性和慢性毒性作用亚慢性和慢性毒性作用&4 局部毒性作用局部毒性作用第二十五页，讲稿共七十九页哦急性毒性作用急性毒性作用Acute toxicity指机体（实验动物或人）一次或指机体（实验动物或人）一次或24h内多次内多次接触外源化学物后在短期内接触外源化学物后在短期内(最长到最长到1414天天)所产生的毒性效应。所产生的毒性效应。包括一般行为、外观改变、大体形态变化以包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应。及死亡效应。第二十六页，讲稿共七十九页哦急性毒性作用急性毒性作用急性接触次数：急性接触次数：一次或一次或24h多次多次“一次一次”：经口和经注射途径染毒是指瞬间给予：经口和经注射途径染毒是指瞬间给予实验动物染毒，经呼吸道与皮肤染毒时，则指实验动物染毒，经呼吸道与皮肤染毒时，则指在一段规定的时间内使持续接触毒物的过程在一段规定的时间内使持续接触毒物的过程“多次多次”：当一次最大染毒剂量不能达到以充分：当一次最大染毒剂量不能达到以充分了解该毒物急性毒性作用的目的，从而在了解该毒物急性毒性作用的目的，从而在24h内内分分次染毒。次染毒。第二十七页，讲稿共七十九页哦急性毒性作用急性毒性作用中毒效应出现时间中毒效应出现时间瞬间死亡：瞬间死亡：氰化钾、煤气等氰化钾、煤气等迟发毒效应和死亡：有机磷农药迟发毒效应和死亡：有机磷农药快速和剧烈的毒效应后恢复快速和剧烈的毒效应后恢复轻微症状轻微症状恢复恢复严重中毒严重中毒死亡（毒菇）死亡（毒菇）714d中毒效应的强度：一般行为、外观、大体形中毒效应的强度：一般行为、外观、大体形态、中毒症状一般较严重、死亡态、中毒症状一般较严重、死亡第二十八页，讲稿共七十九页哦急性毒性试验目的急性毒性试验目的求出致死剂量以及求出致死剂量以及LD50，通过，通过LD50进行毒进行毒性分级性分级评价外源性化学物的毒效应特征、靶器官、评价外源性化学物的毒效应特征、靶器官、剂量剂量-反应（效应）关系和对人体产生损害反应（效应）关系和对人体产生损害的危险性。的危险性。为其它毒理试验研究提供接触剂量和观察指为其它毒理试验研究提供接触剂量和观察指标选择的依据标选择的依据为毒理学机制研究提供线索为毒理学机制研究提供线索第二十九页，讲稿共七十九页哦急性毒性试验的方法要点急性毒性试验的方法要点实验动物的选择和要求实验动物的选择和要求毒性反应与人近似毒性反应与人近似易于饲养、操作方便易于饲养、操作方便繁殖和生育能力强，能保障供给繁殖和生育能力强，能保障供给价格低易于获得价格低易于获得第三十页，讲稿共七十九页哦急性毒性试验的方法要点急性毒性试验的方法要点实验动物的物种和品系实验动物的物种和品系最好用两种种属的最好用两种种属的哺乳类动物哺乳类动物啮齿类啮齿类:小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非啮齿类：非啮齿类：狗或猴狗或猴。大、小鼠符合选择的原则，最常用大、小鼠符合选择的原则，最常用 SD、Wistar大鼠；昆明种和大鼠；昆明种和NIH种小鼠种小鼠急性经口和毒性吸入试验选择大、小鼠，但经急性经口和毒性吸入试验选择大、小鼠，但经皮试验选择豚鼠、大鼠和家兔皮试验选择豚鼠、大鼠和家兔第三十一页，讲稿共七十九页哦急性毒性试验的方法要点急性毒性试验的方法要点实验动物的年龄和体重实验动物的年龄和体重急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年动物进行试验，而且须是未曾交配和受刚成年动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。例如：大鼠孕的动物。例如：大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家兔、家兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠、豚鼠200200250g250g、狗、狗101015kg15kg。同一批试验动物体重变异范围不应超过同一批试验动物体重变异范围不应超过该批动物平均体重的该批动物平均体重的2020。第三十二页，讲稿共七十九页哦急性毒性试验的方法要点急性毒性试验的方法要点性别性别急性毒性试验的主要内容是求急性毒性试验的主要内容是求LDLD5050，除特殊要求外，一，除特殊要求外，一般急性毒性试验对动物性别要求为般急性毒性试验对动物性别要求为雌雄各半雌雄各半。如果在预。如果在预试验时发现化学毒物试验时发现化学毒物(如农药如农药)对雌、雄动物毒效应的敏感对雌、雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分别求出雌性与雄性动物各自的性有明显差异，则应单独分别求出雌性与雄性动物各自的LDLD5050。如果试验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性。如果试验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的动物的LDLD5050测试。测试。第三十三页，讲稿共七十九页哦急性毒性试验的方法要点急性毒性试验的方法要点动物数量与随机分组动物数量与随机分组大、小鼠等小动物大、小鼠等小动物 每组每组10只只狗等大动物狗等大动物 每组每组6只只分组原则分组原则随机化原则随机化原则第三十四页，讲稿共七十九页哦急性毒性试验的方法要点急性毒性试验的方法要点预检预检适应环境，减少环境和生理的变化对实验结果适应环境，减少环境和生理的变化对实验结果的影响的影响筛选健康动物，发现异常者应放弃筛选健康动物，发现异常者应放弃雌雄分笼饲养，防止交配和受孕雌雄分笼饲养，防止交配和受孕第三十五页，讲稿共七十九页哦急性毒性试验的方法要点急性毒性试验的方法要点 试验动物的饲养环境试验动物的饲养环境恒定的温度：恒定的温度：223湿度：湿度：3070%照度：昼夜各半照度：昼夜各半饲料合格、饮水合格、垫料合格饲料合格、饮水合格、垫料合格第三十六页，讲稿共七十九页哦急性毒性试验的方法要点急性毒性试验的方法要点禁食禁食经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜禁食；或染毒前禁食隔夜禁食；或染毒前禁食4h大动物大动物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒染毒后继续禁食染毒后继续禁食24h，但在禁食时要保障饮水。，但在禁食时要保障饮水。第三十七页，讲稿共七十九页哦受试物处理受试物处理受试前了解受试物的理化性质和毒性资料受试前了解受试物的理化性质和毒性资料受试物配制受试物配制水溶液水溶液经口用蒸馏水或去离子水，注射用生理盐经口用蒸馏水或去离子水，注射用生理盐水；水；混悬液混悬液0.5%羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钠、10%阿拉伯乳糖、阿拉伯乳糖、植物油，临用前配制。植物油，临用前配制。第三十八页，讲稿共七十九页哦受试物处理受试物处理给予动物的染毒量给予动物的染毒量不应超出最大给药量容积，减少非特异性因素对毒性的不应超出最大给药量容积，减少非特异性因素对毒性的影响影响经口：经口：20ml/kg.bw 经皮：经皮：2ml/kg静脉：静脉：1ml/kg（5min以上）以上）肌肉注射：肌肉注射：0.5ml/kg（一个部位）（一个部位）吸入：吸入：2mg/L第三十九页，讲稿共七十九页哦染毒方法染毒方法模拟人在生活和生产环境中实际接触该受试物的途径模拟人在生活和生产环境中实际接触该受试物的途径和方法和方法有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较受试物的性质和途径受试物的性质和途径评价程序的要求评价程序的要求常见：经口、经呼吸道、经皮及经注射途径。常见：经口、经呼吸道、经皮及经注射途径。第四十页，讲稿共七十九页哦染毒方法染毒方法经口染毒经口染毒灌胃灌胃、喂饲、吞咽胶囊等、喂饲、吞咽胶囊等不同浓度不同浓度，相同体积，相同体积准确准确工作量大工作量大误入气管和伤及食管误入气管和伤及食管第四十一页，讲稿共七十九页哦染毒方法染毒方法经呼吸道染毒经呼吸道染毒以气体、蒸气、粉尘、雾等形式存在于车间以气体、蒸气、粉尘、雾等形式存在于车间空气中的工业毒物以及以吸入为给药途径空气中的工业毒物以及以吸入为给药途径的药物的染毒方式。的药物的染毒方式。气管内注入和吸入气管内注入和吸入静式吸入静式吸入动式吸入动式吸入第四十二页，讲稿共七十九页哦染毒方法染毒方法经皮吸收经皮吸收脱毛脱毛局部涂敷受试物局部涂敷受试物玻璃纸覆盖固定一玻璃纸覆盖固定一定时间接触染毒定时间接触染毒观察观察浸尾法：将动物固定，鼠尾浸入受试物中持浸尾法：将动物固定，鼠尾浸入受试物中持续一段时间，观察。续一段时间，观察。第四十三页，讲稿共七十九页哦染毒方法染毒方法经注射途径染毒经注射途径染毒对注射用药品的急性毒性试验、毒性机制研对注射用药品的急性毒性试验、毒性机制研究时了解毒物代谢动力究时了解毒物代谢动力静脉、腹腔、肌内、皮下等静脉、腹腔、肌内、皮下等第四十四页，讲稿共七十九页哦剂量选择剂量选择化学结构及理化特性化学结构及理化特性查阅文献查阅文献用少量动物，以较大的剂量间隔（几何级数）用少量动物，以较大的剂量间隔（几何级数）染毒，找出染毒，找出1090%（0100%）的致死剂）的致死剂量范围，然后可设计正式试验的剂量和分量范围，然后可设计正式试验的剂量和分组。组。i=(lgLD90-lgLD10)/(n-1)i=(lgLD100-lgLD0)/(n-1)根据其它化学物根据其它化学物LD50i 为组矩为组矩n 剂量组数剂量组数第四十五页，讲稿共七十九页哦剂量选择剂量选择i=(lgLD90-lgLD10)/(n-1)i=(lgLD100-lgLD0)/(n-1)求得求得i值后，以低剂量组的对数剂量加上一值后，以低剂量组的对数剂量加上一个个i值，即是高一个剂量组的对数剂量。其值，即是高一个剂量组的对数剂量。其反对数即得出相应的剂量值。反对数即得出相应的剂量值。i 为组矩为组矩n 剂量组数剂量组数第四十六页，讲稿共七十九页哦剂量选择剂量选择化学毒物预试验中化学毒物预试验中5g/kg.bw时，未发现死时，未发现死亡，表示低毒或毒性不大，则一般不需要亡，表示低毒或毒性不大，则一般不需要求出求出LD50食品或功能食品的食品或功能食品的LD50的剂量选择的剂量选择以最大的（即无毒剂量以最大的（即无毒剂量LD50为为15g/kg.bw）一般要设立对照组。一般要设立对照组。第四十七页，讲稿共七十九页哦毒性作用观察毒性作用观察中毒体征及发生过程：不同系统的毒物，急中毒体征及发生过程：不同系统的毒物，急性毒性作用出现的体征不一样，可初步确性毒性作用出现的体征不一样，可初步确定受试物的急性毒性的靶器官。定受试物的急性毒性的靶器官。死亡情况和时间死亡情况和时间体重：反映动物中毒后综合性整体变化，是体重：反映动物中毒后综合性整体变化，是一个客观和简便的量化指标。每周一个客观和简便的量化指标。每周12次次病理检查：大体解剖病理检查：大体解剖第四十八页，讲稿共七十九页哦观察时间和周期观察时间和周期每天每天2次或多次观察次或多次观察总观察时间一般为总观察时间一般为14天（天（2周）周）速发型死亡：氰化物速发型死亡：氰化物迟发型死亡：羰基镍、毒菇迟发型死亡：羰基镍、毒菇第四十九页，讲稿共七十九页哦急性毒性分级和评价急性毒性分级和评价WHO五级标准五级标准毒性分级毒性分级大鼠大鼠LD50（mg/kg）6只大鼠吸入只大鼠吸入4h，死亡，死亡2-4只的浓度只的浓度（ppm）兔经皮兔经皮LD50（mg/kg）对人可能致死的剂量对人可能致死的剂量g/kg g/60kg剧毒剧毒1105151000第五十页，讲稿共七十九页哦急性毒性分级和评价急性毒性分级和评价我国农药急性毒性分级我国农药急性毒性分级分级分级经口经口LD50（mg/kg）经皮经皮LD50（mg/kg）4h吸入吸入LC50（mg/m2）2h剧毒剧毒52050020002000第五十一页，讲稿共七十九页哦急性毒性分级和评价急性毒性分级和评价化学物质性毒性分级化学物质性毒性分级级别级别大鼠口服大鼠口服LD50（mg/kg）相当于人的致死剂量相当于人的致死剂量 mg/kg g/人人极毒极毒150005000005000第五十二页，讲稿共七十九页哦蓄积毒性作用第五十三页，讲稿共七十九页哦基本概念基本概念化学毒物进入机体后，经过生物转化以代谢化学毒物进入机体后，经过生物转化以代谢产物或化学物原型排出体外。但是，当化产物或化学物原型排出体外。但是，当化学毒物反复多次给动物染毒，化学毒物进学毒物反复多次给动物染毒，化学毒物进入机体的速度入机体的速度(或总量或总量)超过代谢转化的速超过代谢转化的速度和排泄的速度度和排泄的速度(或总量或总量)时，化学毒物或时，化学毒物或其代谢产物就有可能在机体内逐渐增加并其代谢产物就有可能在机体内逐渐增加并贮留，这种现象称为化学毒物的贮留，这种现象称为化学毒物的蓄积作用蓄积作用(accumulation)(accumulation)。第五十四页，讲稿共七十九页哦蓄积毒性作用的基本概念蓄积毒性作用的基本概念蓄积作用蓄积作用（accumulation）外源性化学物外源性化学物排出体外排出体外机体机体直接直接代谢物代谢物储存库储存库血浆蛋白血浆蛋白脂肪组织脂肪组织肝脏肝脏肾脏肾脏骨骼骨骼物物质质蓄蓄积积功功能能蓄蓄积积第五十五页，讲稿共七十九页哦蓄积作用的研究方法蓄积作用的研究方法化化学学毒毒物物的的蓄蓄积积作作用用是是发发生生慢慢性性中中毒毒的的物物质质基基础础，因因此此研研究究化化学学毒毒物物在在机机体体内内的的蓄蓄积积性性是是评评价价化化学学毒毒物物能能否否引引起起潜潜在在慢慢性性毒毒性性的的依依据据之之一一，也也是是卫卫生生标标准准制制订订过程选择安全系数的主要依据。过程选择安全系数的主要依据。蓄蓄积积毒毒性性试试验验是是研研究究化化学学毒毒物物基基础础毒毒性性的的重重要要内内容容之之一一，目目的的是是通通过过试试验验求求出出蓄蓄积积系系数数K K，了了解解化化学学毒毒物物蓄蓄积积毒毒性性的的强强弱弱，并并为为慢慢性性毒毒性性试试验验及及其其他他有有关关毒毒性试验的剂量选择提供参考。性试验的剂量选择提供参考。第五十六页，讲稿共七十九页哦蓄积系数法蓄积系数法将多次染毒使半数动物出现效应（死亡）的蓄积剂量将多次染毒使半数动物出现效应（死亡）的蓄积剂量与一次染毒使半数动物出现相同效应（或死亡）的剂与一次染毒使半数动物出现相同效应（或死亡）的剂量的比值量的比值 K=ED50（n）ED 50（1）K蓄积毒性分级蓄积毒性分级1高度蓄积高度蓄积1明显蓄积明显蓄积3中等蓄积中等蓄积5轻度蓄积轻度蓄积LD50（n）LD 50（1）第五十七页，讲稿共七十九页哦蓄积系数法蓄积系数法K值越小，表示化学毒物的蓄积性越大值越小，表示化学毒物的蓄积性越大K=1：化学毒在动物体内全部蓄积或每次染：化学毒在动物体内全部蓄积或每次染毒后毒效应是叠加的。毒后毒效应是叠加的。K5：蓄积毒性极弱：蓄积毒性极弱第五十八页，讲稿共七十九页哦蓄积系数蓄积系数-固定剂量法固定剂量法一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染毒一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染毒,先先求出求出LDLD5050，然后选取相同条件的，然后选取相同条件的40只动物随机分为两组，只动物随机分为两组，一为染毒组，一为对照组，一为染毒组，一为对照组，雌雄各半。试验组在雌雄各半。试验组在1 12020l l50LD50LD5050的范围内选定一个剂量，每日以固定剂量、的范围内选定一个剂量，每日以固定剂量、定时和相同途径进行染毒定时和相同途径进行染毒,试验期间观察记录每组动物死试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，计算累积总接触剂量时，计算累积总接触剂量LDLD5050(n)(n)，根据公式计算，根据公式计算K K值，值，然后进行评价。但若接触剂量已累积达到然后进行评价。但若接触剂量已累积达到5 5个个LDLD5050剂量，剂量，也可终止试验。也可终止试验。第五十九页，讲稿共七十九页哦蓄积系数蓄积系数-剂量递增法剂量递增法0.1LD50开始，开始，4天为一期递增天为一期递增1.5倍。倍。在试验期间，当化学毒物在试验期间，当化学毒物在试验期间，当化学毒物在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试验，计算引起动物累积死亡一半时即可终止试验，计算引起动物累积死亡一半时即可终止试验，计算引起动物累积死亡一半时即可终止试验，计算KK值进行评价。值进行评价。值进行评价。值进行评价。一般来说，在试验第一般来说，在试验第一般来说，在试验第一般来说，在试验第2l2l天天天天也可结束试验，因为这之前如果也可结束试验，因为这之前如果也可结束试验，因为这之前如果也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积剂量已达动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积剂量已达动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积剂量已达动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积剂量已达5.26LD5.26LD5050，即，即，即，即KK5 5。使用本方法时要注意染毒期间定期。使用本方法时要注意染毒期间定期。使用本方法时要注意染毒期间定期。使用本方法时要注意染毒期间定期(每每每每4 4天一次天一次天一次天一次)给动物称重，按实测体重，调整化学毒物的给动物称重，按实测体重，调整化学毒物的给动物称重，按实测体重，调整化学毒物的给动物称重，按实测体重，调整化学毒物的染毒绝对量。染毒绝对量。染毒绝对量。染毒绝对量。第六十页，讲稿共七十九页哦蓄积系数蓄积系数-剂量固定的剂量固定的20天蓄积法天蓄积法分五组，分别是阴性对照，分五组，分别是阴性对照，1/20、1/10、1/5、1/2LD50各组均无死亡各组均无死亡-蓄积不明显蓄积不明显1/2组有死亡，其它组无死亡组有死亡，其它组无死亡-弱蓄积性弱蓄积性1/20组无死亡，其它各组有死亡且有剂量反应组无死亡，其它各组有死亡且有剂量反应关系关系-中等蓄积性中等蓄积性1/20组有死亡组有死亡-强蓄积性强蓄积性第六十一页，讲稿共七十九页哦生物半减期法生物半减期法生物半减期生物半减期(biological half-life(biological half-life，t t1/21/2)法是用毒物动力学原理描述化学毒物在机法是用毒物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用。体内的蓄积作用。第六十二页，讲稿共七十九页哦生物半减期法生物半减期法化学毒物在体内蓄积的速度和量与机体单位化学毒物在体内蓄积的速度和量与机体单位时间内吸收该物质的速度以及清除速度有时间内吸收该物质的速度以及清除速度有关。即使化学毒物以相等的时间间距恒速关。即使化学毒物以相等的时间间距恒速地吸收入血液，该物质在一定剂量范围内地吸收入血液，该物质在一定剂量范围内在机体的蓄积量也不呈直线无限地增加，在机体的蓄积量也不呈直线无限地增加，而是呈曲线形上升并有一定的极限。这是而是呈曲线形上升并有一定的极限。这是因为化学物质吸收进入机体的同时体内也因为化学物质吸收进入机体的同时体内也发生着代谢转化及清除的过程。当化学毒发生着代谢转化及清除的过程。当化学毒物的吸收过程与代谢转化物的吸收过程与代谢转化清除的过程达清除的过程达到平衡时，其蓄积量基本上不再增加。到平衡时，其蓄积量基本上不再增加。第六十三页，讲稿共七十九页哦生物半减期法生物半减期法T 一种化学物以一种化学物以T 相等的时间间矩染毒，其相等的时间间矩染毒，其在体内经过在体内经过6个个T 的接触就可以基本上达到的接触就可以基本上达到蓄积的上限。蓄积的上限。T 短，达到蓄积极限所需要的时间短短，达到蓄积极限所需要的时间短T 长，达到蓄积极限所需要的时间长长，达到蓄积极限所需要的时间长第六十四页，讲稿共七十九页哦亚慢性和慢性毒性作用亚慢性和慢性毒性作用第六十五页，讲稿共七十九页哦亚慢性毒性亚慢性毒性(subchronic toxicity)是指人是指人 或实验动物连续接触较长时间、较大剂量或实验动物连续接触较长时间、较大剂量的外源化合物所引起的毒性效应。的外源化合物所引起的毒性效应。慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或实验是指人或实验动物长期（甚至终生）反复接触低剂量动物长期（甚至终生）反复接触低剂量的化学毒物所产生的毒性效应。的化学毒物所产生的毒性效应。概念概念第六十六页，讲稿共七十九页哦目的目的研究受试物亚慢性毒性剂量研究受试物亚慢性毒性剂量-反应关系，确反应关系，确定未观察到有害作用的剂量和其观察到有定未观察到有害作用的剂量和其观察到有害作用的最低剂量，提出安全限量参考值。害作用的最低剂量，提出安全限量参考值。观察受试物亚慢性毒性效应谱、毒作用特点观察受试物亚慢性毒性效应谱、毒作用特点和毒作用靶器官和毒作用靶器官第六十七页，讲稿共七十九页哦目的目的观察受试物亚慢性毒性作用的可逆性观察受试物亚慢性毒性作用的可逆性为慢性毒理试验的剂量设计和观察指标选择为慢性毒理试验的剂量设计和观察指标选择提供依据提供依据为在其它试验中发现的或未发现的毒作用提为在其它试验中发现的或未发现的毒作用提供新的信息，比较不同动物物种毒效应的供新的信息，比较不同动物物种毒效应的差异，为受试物毒性机制和将研究结果外差异，为受试物毒性机制和将研究结果外推到人提供依据。推到人提供依据。第六十八页，讲稿共七十九页哦亚慢性毒性试验方法的要点亚慢性毒性试验方法的要点动物选择动物选择品种和品系品种和品系性别、年龄和动物数：两种性别的离乳动物性别、年龄和动物数：两种性别的离乳动物（大鼠（大鼠68w）SPF级动物级动物第六十九页，讲稿共七十九页哦二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计 （一）实验动物选择（一）实验动物选择亚亚慢慢性性和和慢慢性性毒毒性性试试验验 亚慢性毒性试验亚慢性毒性试验 年龄：年龄：大鼠大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g数量：数量：小动物小动物20 大动物大动物6性别：性别：雌雄各半雌雄各半 慢性毒性试验慢性毒性试验年龄：年龄：大鼠大鼠 5070g 狗狗 8月月 小鼠小鼠 初断乳初断乳数量：数量：小动物小动物40 大动物大动物8性别：性别：雌雄各半雌雄各半第七十页，讲稿共七十九页哦亚慢性毒性试验方法的要点亚慢性毒性试验方法的要点染毒方式染毒方式剂量选择和分组剂量选择和分组3个剂量组和一个阴性（溶剂）对照组，高个剂量组和一个阴性（溶剂）对照组，高-引起明引起明显毒性和少量动物死亡；低显毒性和少量动物死亡；低-无中毒反应，相当于未无中毒反应，相当于未观察到有害作用剂量（观察到有害作用剂量（NOAEL），设一个中间剂），设一个中间剂量组，最好是相当于观察到有害作用的最低剂量量组，最好是相当于观察到有害作用的最低剂量（LOAEL）人拟用剂量的人拟用剂量的10、30、100倍，组矩以倍，组矩以310倍为宜，不低倍为宜，不低于于2倍倍第七十一页，讲稿共七十九页哦亚慢性毒性试验方法的要点亚慢性毒性试验方法的要点观察指标观察指标外观外观生长发育生长发育行为功能行为功能毒性体征毒性体征最终体重最终体重脏器湿重脏器湿重脏脏/体比体比亚慢性、慢性亚慢性、慢性毒性试验过程毒性试验过程活杀解剖活杀解剖器官器官/组织组织大体尸解大体尸解固定固定/染色染色显微镜检查显微镜检查生物体液生物体液血液学血液学血清血清-化学化学-生化学生化学尿分析尿分析生物学标志生物学标志酶酶内源性成分内源性成分胆汁胆汁尿尿脏器系数脏器系数第七十二页，讲稿共七十九页哦亚性毒性作用概念和目的亚性毒性作用概念和目的概念：实验动物或人长期（甚至终身）反复接触外源化学概念：实验动物或人长期（甚至终身）反复接触外源化学物所产生的毒性效应，长期一般指物所产生的毒性效应，长期一般指2年年目的目的研究慢性毒性剂量研究慢性毒性剂量-反应关系。确定长期接触造成有反应关系。确定长期接触造成有害作用的最低剂量（害作用的最低剂量（LOAEL）或阈剂量和未造成）或阈剂量和未造成有害作用的剂量（有害作用的剂量（NOEAL），为制定人类接触时），为制定人类接触时的安全限量标准，如最高容许浓度（的安全限量标准，如最高容许浓度（MAC）和每日）和每日容许摄入量（容许摄入量（ADI）以及危险）以及危险度评价提供毒理学依据。度评价提供毒理学依据。第七十三页，讲稿共七十九页哦亚性毒性作用概念和目的亚性毒性作用概念和目的观察慢性毒性效应谱、毒作用特点和毒作用观察慢性毒性效应谱、毒作用特点和毒作用靶器官靶器官观察慢性毒作用的可逆性观察慢性毒作用的可逆性为毒性机制研究和将毒性结果外推到人提供为毒性机制研究和将毒性结果外推到人提供依据。依据。第七十四页，讲稿共七十九页哦慢性毒性试验方法的要点慢性毒性试验方法的要点实验动物：初断乳动物实验动物：初断乳动物染毒时限：工业毒物一般为染毒时限：工业毒物一般为6个月，食品和环境毒物个月，食品和环境毒物为为12年年分组和剂量：分组和剂量：4组，以亚慢性试验的组，以亚慢性试验的LOAELD确定，确定，1/51/2为高剂量组；为高剂量组；1/501/10为中剂量组；为中剂量组；1/100为低为低剂量。或以剂量。或以LD50设计：设计：1/10为高剂量组，为高剂量组，1/100为中剂为中剂量组，量组，1/1000为低剂量组。为低剂量组。观察指标：同亚慢性，组织病理学是非常重要的和必不观察指标：同亚慢性，组织病理学是非常重要的和必不可少的，最客观最有说服力的指标。可少的，最客观最有说服力的指标。第七十五页，讲稿共七十九页哦主要毒性作用机制主要毒性作用机制对生物膜的损害：膜通透性、流动性、和膜表面电荷对生物膜的损害：膜通透性、流动性、和膜表面电荷化学毒物对细胞钙稳态的影响：破坏正常生命活动化学毒物对细胞钙稳态的影响：破坏正常生命活动所需的由第一信使刺激而产生的短暂的钙瞬变，危所需的由第一信使刺激而产生的短暂的钙瞬变，危及细胞器和功能和骨架的结构，最终激活不可逆的及细胞器和功能和骨架的结构，最终激活不可逆的细胞分解代谢的过程细胞分解代谢的过程第七十六页，讲稿共七十九页哦主要毒性作用机制主要毒性作用机制机体内生物大分子的氧化损伤：化学毒物在机体内机体内生物大分子的氧化损伤：化学毒物在机体内代谢（主要是氧化还原反应）产生自由基代谢（主要是氧化还原反应）产生自由基脂质过氧化损伤脂质过氧化损伤：细胞器和细胞膜结构破坏：细胞器和细胞膜结构破坏 引起细胞毒性引起细胞毒性 对对DNA的影响（氧化和加合）的影响（氧化和加合）LDL的氧化修饰的氧化修饰蛋白质氧化损伤蛋白质氧化损伤：引起蛋白质凝集、交联、降解、：引起蛋白质凝集、交联、降解、断裂，出现生理功能受损断裂，出现生理功能受损第七十七页，讲稿共七十九页哦主要毒性作用机制主要毒性作用机制核酸的氧化损伤核酸的氧化损伤：DNA断裂，缺失突变断裂，缺失突变 启动修复系统，如修复功能受启动修复系统，如修复功能受 损，引起突变损，引起突变 活化癌基因活化癌基因第七十八页，讲稿共七十九页哦感感谢谢大大家家观观看看26.09.202226.09.2022第七十九页，讲稿共七十九页哦