核苷酸和核酸.ppt

目目 录录关于核苷酸和核酸现在学习的是第1页，共33页一、核酸的化学反应核酸的化学反应 1.脱氨基作用（脱氨，脱氨基作用（脱氨，deamination）次黄嘌呤次黄嘌呤5-甲基胞嘧啶甲基胞嘧啶黄嘌呤黄嘌呤现在学习的是第2页，共33页2.脱氧核苷酸的水解脱氧核苷酸的水解 脱嘌呤脱嘌呤现在学习的是第3页，共33页3.紫外线和一些化学因子、烷化剂对紫外线和一些化学因子、烷化剂对DNA的损伤的损伤现在学习的是第4页，共33页亚硝酸亚硝酸现在学习的是第5页，共33页烷化剂：乙基甲烷磺酸（烷化剂：乙基甲烷磺酸（EMS）现在学习的是第6页，共33页紫外线诱导胸腺嘧啶二聚体紫外线诱导胸腺嘧啶二聚体现在学习的是第7页，共33页4.与嵌合剂的反应与嵌合剂的反应现在学习的是第8页，共33页现在学习的是第9页，共33页溴乙啶溴乙啶丫啶橙丫啶橙 放线菌素放线菌素D 现在学习的是第10页，共33页二、DNA的酶法甲基化（的酶法甲基化（methylation）甲基供体：甲基供体：S腺苷甲硫氨酸腺苷甲硫氨酸甲基受体：被修饰碱基（甲基受体：被修饰碱基（A、C多于多于G、T）碱基的甲基化修饰不是随机的，而是限于一定的顺序碱基的甲基化修饰不是随机的，而是限于一定的顺序或或DNA的某一区域，在甲基化酶的作用下进行，甲基化是的某一区域，在甲基化酶的作用下进行，甲基化是可逆的。可逆的。甲基化的意义：帮助细胞识别和区分自身甲基化的意义：帮助细胞识别和区分自身DNA和外来和外来DNA；调节基因表达；帮助；调节基因表达；帮助DNA修复等。修复等。现在学习的是第11页，共33页第八节第八节 核酸酶和核酸酶和DNA限制性限制性内切酶内切酶现在学习的是第12页，共33页一、核酸酶（一、核酸酶（nuclease）能水解核酸的酶为核酸酶能水解核酸的酶为核酸酶核酸酶都是磷酸二酯酶（核酸酶都是磷酸二酯酶（phosphodiesterases）现在学习的是第13页，共33页核酸酶的分类核酸酶的分类按底物专一性分类：核糖核酸酶按底物专一性分类：核糖核酸酶(RNase)和脱氧核糖和脱氧核糖核酸酶核酸酶(DNase)按作用方式分类：内切核酸酶和外切核酸酶按作用方式分类：内切核酸酶和外切核酸酶内切核酸酶：从核酸的内部切割核酸链，产生核酸链内切核酸酶：从核酸的内部切割核酸链，产生核酸链片段。片段。外切核酸酶：从核酸链的一端逐个切断磷酸二酯键，外切核酸酶：从核酸链的一端逐个切断磷酸二酯键，释放单核苷酸。按磷酸二酯键断裂方式：释放单核苷酸。按磷酸二酯键断裂方式：3-核酸酶核酸酶和和5-核酸酶核酸酶现在学习的是第14页，共33页现在学习的是第15页，共33页核酸酶对其底物的作用具有特异性核酸酶对其底物的作用具有特异性现在学习的是第16页，共33页现在学习的是第17页，共33页二、限制性内切酶（二、限制性内切酶（restriction endonuclease）限制性内切酶是从细菌中分离的一类专门识别和限制性内切酶是从细菌中分离的一类专门识别和水解特定核苷酸序列的内切酶类。这类酶在原核生物水解特定核苷酸序列的内切酶类。这类酶在原核生物体内，用于体内，用于“防御防御”外来外来DNA的入侵，将外来的入侵，将外来DNA以独特的方式切成无感染能力的片段，而自身不受以独特的方式切成无感染能力的片段，而自身不受损害（甲基化作用）损害（甲基化作用）。现在学习的是第18页，共33页1.限制性内切酶的分类限制性内切酶的分类、基因工程技术中常用基因工程技术中常用型型现在学习的是第19页，共33页不需要不需要ATP参加；参加；不对不对DNA进行甲基化或其它方式修饰。进行甲基化或其它方式修饰。专门识别和切割特定的核苷酸序列，这个序列专门识别和切割特定的核苷酸序列，这个序列一般含一般含46 个核苷酸残基，并具回文结构个核苷酸残基，并具回文结构“落落鹤岛上岛落鹤，垂柳岸边岸柳垂鹤岛上岛落鹤，垂柳岸边岸柳垂”。2.II型限制性内切酶型限制性内切酶 现在学习的是第20页，共33页类酶识别序列特点类酶识别序列特点回文结构回文结构palindrome现在学习的是第21页，共33页切口（切口（kerf）：粘端，平端）：粘端，平端现在学习的是第22页，共33页现在学习的是第23页，共33页现在学习的是第24页，共33页3.限制性内切酶的种类（约限制性内切酶的种类（约1000多种）多种）现在学习的是第25页，共33页Hin d 属属 系系 株株 序序Haemophilus influenzae d株株流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌d株的第三种酶株的第三种酶命名命名naming第一个字母取自产生该酶的细菌属（第一个字母取自产生该酶的细菌属（genus）名，用大写；）名，用大写；第二、第三个字母是该细菌的种（第二、第三个字母是该细菌的种（species）名，用小写；）名，用小写；第四个字母代表株（第四个字母代表株（strain）；）；用罗马数字表示发现的先后次序（用罗马数字表示发现的先后次序（sequence）。）。现在学习的是第26页，共33页4.限制性内切酶在限制性内切酶在基因重组中的应用基因重组中的应用 现在学习的是第27页，共33页现在学习的是第28页，共33页现在学习的是第29页，共33页三、限制片段的长度和限制图三、限制片段的长度和限制图1.限制片段的长度限制片段的长度识别识别4个核苷酸序列的限制酶产生个核苷酸序列的限制酶产生DNA片段的平均片段的平均长度：长度：256（44）识别识别6个核苷酸序列的限制酶产生个核苷酸序列的限制酶产生DNA片段的平均片段的平均长度：长度：4096（46）现在学习的是第30页，共33页2.制性内切酶图谱制性内切酶图谱 限制性图谱是各种限制性内切酶切点在某一限制性图谱是各种限制性内切酶切点在某一DNA分子或分子或DNA片段上的排列，由于各酶切点之片段上的排列，由于各酶切点之间的距离是以碱基对（间的距离是以碱基对（kbp mbp）表示的，所以）表示的，所以可计算出二切点间的绝对距离，因此限制图也称物可计算出二切点间的绝对距离，因此限制图也称物理图。理图。现在学习的是第31页，共33页质粒质粒pBR322的限制图的限制图现在学习的是第32页，共33页目目 录录感感谢谢大大家家观观看看现在学习的是第33页，共33页