同型半胱氨酸的检测及临床应用讲稿.pptx

同型半胱氨酸的检测及临同型半胱氨酸的检测及临床应用床应用2022/9/301第一页，讲稿共三十九页哦前前 言言同型半胱氨酸同型半胱氨酸（homocysteine,Hcyhomocysteine,Hcy）是一种人体内的）是一种人体内的含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物。中间产物。新热点新热点:许多学者认为血液许多学者认为血液HcyHcy升高已成为升高已成为动脉粥样硬动脉粥样硬化化发生的一个独立危险因子，也成为基础医学和临床发生的一个独立危险因子，也成为基础医学和临床医学研究的新热点。医学研究的新热点。新理念新理念:伴有血浆伴有血浆HcyHcy升高升高(10umol/L)10umol/L)的原发性高血压的原发性高血压定义为定义为H H型高血压型高血压。2022/9/3022第二页，讲稿共三十九页哦 同型半胱氨酸（同型半胱氨酸（HcyHcy）能够让四分之三的高血压患）能够让四分之三的高血压患者脑卒中死亡风险增加者脑卒中死亡风险增加1212倍。倍。2022/9/303 3第三页，讲稿共三十九页哦一、一、HcyHcy的的存在形式存在形式有研究发现在正常人和高有研究发现在正常人和高HcyHcy血症患者血浆中，血症患者血浆中，HcyHcy大部大部分（分（7070）是与蛋白质结合，血浆中与）是与蛋白质结合，血浆中与HcyHcy结合的是白结合的是白蛋白。蛋白。HcyHcy在血液中的存在方式在血液中的存在方式:部分以同型半胱氨酸部分以同型半胱氨酸-半胱氨半胱氨酸二硫化物存在，微量以还原型同型半胱氨酸存在，大酸二硫化物存在，微量以还原型同型半胱氨酸存在，大部分通过二硫键与白蛋白结合而存在。部分通过二硫键与白蛋白结合而存在。2022/9/3044第四页，讲稿共三十九页哦二、影响血液二、影响血液HcyHcy水平的因素水平的因素1、遗传因素：、遗传因素：C667T点突变可引起点突变可引起Hcy升高。升高。CBS基因多态性。基因多态性。蛋氨酸合成酶基因多态性。蛋氨酸合成酶基因多态性。2022/9/3055第五页，讲稿共三十九页哦2、性别与年龄：、性别与年龄：国内外不少研究发现，国内外不少研究发现，Hcy随年龄增长而升高，而随年龄增长而升高，而且男性且男性女性。女性在绝经前的水平较低，绝经后显女性。女性在绝经前的水平较低，绝经后显著升高，认为其机制可能与雌激素水平的变化有关。著升高，认为其机制可能与雌激素水平的变化有关。2022/9/3066第六页，讲稿共三十九页哦3、营养因素：、营养因素：VitB6、VitB12、叶酸是、叶酸是Hcy代谢辅酶，它们的代谢辅酶，它们的水平与水平与Hcy水平呈负相关，摄入不足时，上述三个酶活水平呈负相关，摄入不足时，上述三个酶活性下降，则性下降，则Hcy升高。升高。饮酒：长期饮酒可引起肝细胞蛋氨酸合成酶活性饮酒：长期饮酒可引起肝细胞蛋氨酸合成酶活性下降，从而造成下降，从而造成Hcy血症。血症。饮食中蛋氨酸含量过高：有报道认为高动物蛋白、饮食中蛋氨酸含量过高：有报道认为高动物蛋白、低植物蛋白饮食可能是低植物蛋白饮食可能是Hcy血症的危险因素之一。血症的危险因素之一。2022/9/3077第七页，讲稿共三十九页哦三、同型半胱氨酸致病机理三、同型半胱氨酸致病机理1 1、内皮毒性作用：、内皮毒性作用：HcyHcy可引起内皮细胞损伤，尤其合并高血压时更易可引起内皮细胞损伤，尤其合并高血压时更易受损，并且破坏血管壁弹力层和胶原纤维。受损，并且破坏血管壁弹力层和胶原纤维。2 2、刺激血管平滑肌细胞增生：、刺激血管平滑肌细胞增生：HcyHcy可直接诱导血管平滑肌细胞增殖。可直接诱导血管平滑肌细胞增殖。2022/9/3088第八页，讲稿共三十九页哦3 3、致血栓作用：、致血栓作用：HcyHcy可促进血栓调节因子的表达，激活蛋白可促进血栓调节因子的表达，激活蛋白C C和凝血和凝血因子因子、，血小板内前列腺素合成增加，从而促，血小板内前列腺素合成增加，从而促进血小板粘附和聚集。进血小板粘附和聚集。2022/9/3099第九页，讲稿共三十九页哦2022/9/3010 HcyHcy通过多种途径损伤血管，它损伤血管内皮细胞同时刺激血管平通过多种途径损伤血管，它损伤血管内皮细胞同时刺激血管平滑肌细胞生长，二者导致的损伤阻塞血流通路；滑肌细胞生长，二者导致的损伤阻塞血流通路；HcyHcy还破坏正常凝血还破坏正常凝血机制；增加血栓形成引起心脏病发作及中风机制；增加血栓形成引起心脏病发作及中风 。10第十页，讲稿共三十九页哦4 4、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱：、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱：HcyHcy可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。2022/9/301111第十一页，讲稿共三十九页哦5 5、干扰谷胱甘肽的合成、干扰谷胱甘肽的合成 ：谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞成分的氧化互相作用，对血管产生保护作用。成分的氧化互相作用，对血管产生保护作用。HcyHcy干扰干扰谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害 。2022/9/301212第十二页，讲稿共三十九页哦6 6、影响体内的转甲基化反应、影响体内的转甲基化反应 ：HcyHcy浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，如核酸（如核酸（DNADNA和和RNARNA）、蛋白质、髓磷脂、多糖、胆碱）、蛋白质、髓磷脂、多糖、胆碱和儿茶酚胺类的甲基化；甲基化能力的降低影响细胞和儿茶酚胺类的甲基化；甲基化能力的降低影响细胞的发育及分化，这可能是的发育及分化，这可能是HcyHcy致病的关键因素。致病的关键因素。2022/9/301313第十三页，讲稿共三十九页哦四、四、HcyHcy的测定方法的测定方法 同位素法：同位素法：该方法灵敏度高，特异性强，但操作繁琐该方法灵敏度高，特异性强，但操作繁琐且有放射污染，未能推广使用。且有放射污染，未能推广使用。色谱法：色谱法：灵敏度、特异性好，但仪器价格昂贵而不能灵敏度、特异性好，但仪器价格昂贵而不能推广。推广。荧光偏振免疫测定：荧光偏振免疫测定：此法需要专门的荧光偏光免疫检此法需要专门的荧光偏光免疫检测仪。测仪。2022/9/301414第十四页，讲稿共三十九页哦ELISAELISA：对仪器要求不高，易普及，但结果准确性相对对仪器要求不高，易普及，但结果准确性相对较差。较差。放射免疫法：放射免疫法：结果准确，但有放射性污染，很少使用。结果准确，但有放射性污染，很少使用。循环酶法：循环酶法：快速、简便、灵敏度高。可上全自动生化快速、简便、灵敏度高。可上全自动生化分析仪，适用大批标本，临床应用广泛。分析仪，适用大批标本，临床应用广泛。2022/9/301515第十五页，讲稿共三十九页哦HcyHcy循环酶法实验参数的设计循环酶法实验参数的设计 实验参数根据分析仪的不同有所差异，可要求试剂供应实验参数根据分析仪的不同有所差异，可要求试剂供应商提供相应的实验参数。商提供相应的实验参数。下面列举下面列举OLYMPUSOLYMPUS系列系列的实验参数：的实验参数：Sample VolumeSample Volume（样品体积）：（样品体积）：9ul9ul R1 Volume R1 Volume （试剂（试剂1 1体积）：体积）：167ul167ul R2 Volume R2 Volume （试剂（试剂2 2体积）：体积）：45ul45ul Measure Wave1 Measure Wave1（主波长）（主波长）：340nm340nm Measure Wave2 Measure Wave2（副波长）（副波长）：700nm700nm2022/9/301616第十六页，讲稿共三十九页哦METHOD METHOD （反应类型）（反应类型）：END END Method PointMethod Point（反应点）：（反应点）：20272027Reagent OD LimitReagent OD Limit（吸光度范围）：（吸光度范围）：-2.02.5-2.02.5Dynamic Range (Dynamic Range (反应范围反应范围)：350350Calibration Type Calibration Type（定标数）：（定标数）：1 1点点Unit Unit （单位）：（单位）：umol/Lumol/L2022/9/301717第十七页，讲稿共三十九页哦五、同型半胱氨酸的临床应用五、同型半胱氨酸的临床应用2022/9/301818第十八页，讲稿共三十九页哦1 1、心血管病防治、心血管病防治（1）HCY升高与动脉粥样硬化升高与动脉粥样硬化(AS)的关系：的关系：1969年就曾有人从尸检中发现年就曾有人从尸检中发现2例血浆例血浆Hcy浓浓度超过正常人几十倍的病儿存在广泛的动脉粥样硬化和度超过正常人几十倍的病儿存在广泛的动脉粥样硬化和动脉血栓。临床上发现高胱氨酸尿症病人早年多因全身动脉血栓。临床上发现高胱氨酸尿症病人早年多因全身动脉粥样硬化和血栓形成死于脑梗塞和心肌梗塞，这与动脉粥样硬化和血栓形成死于脑梗塞和心肌梗塞，这与血中血中Hcy升高有关。升高有关。2022/9/301919第十九页，讲稿共三十九页哦 有学者在动物实验中观察到注射有学者在动物实验中观察到注射HcyHcy后引起高后引起高HcyHcy血症，血症，2323个月后发生动脉粥样硬化个月后发生动脉粥样硬化 。认为高。认为高HcyHcy血症是发血症是发生动脉粥样硬化的独立危险因素。生动脉粥样硬化的独立危险因素。2022/9/302020第二十页，讲稿共三十九页哦（3 3）HcyHcy水平与心血管疾病的危险性水平与心血管疾病的危险性 通过血管内超声观察通过血管内超声观察AS斑块情况斑块情况 ，观察到血浆，观察到血浆HCY 浓度浓度 8umol/L时，斑块明显增大（时，斑块明显增大（0.27-1.04，p0.001）,表明与冠状动脉病变程度呈表明与冠状动脉病变程度呈正相关正相关。2022/9/3021*Mayer E L,Robinson K,Jacobsen D W.et al.Low plasm homocyseine levels predic reduced atheroma burden in patient undergoing coronary intervention:Evideence from intravascular ultrsund.J Am Coll Cardiol,1995,25(special issum):81 A.24第二十一页，讲稿共三十九页哦2022/9/3022冠动脉病变与血浆冠动脉病变与血浆HCYHCY浓度的关系浓度的关系冠动脉造影冠动脉造影例数例数年龄年龄血浆血浆HcyHcyP P值值正常正常202050.150.12.610.60.450.02单支病变单支病变3045.11.615.51.830.16双支病变双支病变3555.71.617.82.0515umolHcy15umolL L为高为高HcyHcy血血症，普通人群血浆症，普通人群血浆HeyHey水平升高者只有不到水平升高者只有不到5 5 ，而在，而在脑卒中患者中可达脑卒中患者中可达30403040 。2022/9/302528第二十五页，讲稿共三十九页哦 美国研究表明：美国研究表明：HcyHcy的升高是与中风有重要关联的危险因子。美国最的升高是与中风有重要关联的危险因子。美国最新的数据显示中年后期男性中风发病率，处于新的数据显示中年后期男性中风发病率，处于55-6455-64这这个年龄段的男性个年龄段的男性相对于相对于45-5445-54年龄段的男性而言，前者年龄段的男性而言，前者患中风的几率是后者的三倍。患中风的几率是后者的三倍。中风和脑血管疾病杂志2008；17；165-168“美国中年后期的男性发生中风的相关因子急剧增加”2022/9/302629第二十六页，讲稿共三十九页哦2022/9/3027脑中风与血浆脑中风与血浆HcyHcy浓度的关系浓度的关系例例 数数血浆血浆HcyHcy P P值值 危危 险险 对对 照照1832183212.812.8/中中 风风1823182314.714.70.001 7676岁）追踪调查岁）追踪调查8 8年年HcyHcy值值，结果：，结果：HcyHcy超出超出14mol/L14mol/L，患老年性痴呆的危，患老年性痴呆的危险性增加险性增加1.81.8倍，患多异古怪痴呆发生率增加倍，患多异古怪痴呆发生率增加1.61.6倍。倍。英国英国OPTIMAOPTIMA项目研究发现：项目研究发现：HcyHcy水平大于水平大于11.2mol/L11.2mol/L的病人，三年后随访，发现他们大脑颞叶（包括海马）的病人，三年后随访，发现他们大脑颞叶（包括海马）快速萎缩。快速萎缩。2022/9/302831第二十八页，讲稿共三十九页哦3 3、糖尿病及并发症防治、糖尿病及并发症防治国内外大量研究结果显示，血浆国内外大量研究结果显示，血浆HcyHcy水平可作为水平可作为2-2-型糖型糖尿病患者患大血管疾病的独立危险因素。尿病患者患大血管疾病的独立危险因素。监测糖尿病患者监测糖尿病患者HcyHcy水平有利于对其预后的评估。水平有利于对其预后的评估。HcyHcy升高在糖尿病伴肾脏、视网膜及血管并发症的患者更升高在糖尿病伴肾脏、视网膜及血管并发症的患者更为严重为严重高高HcyHcy血症也能促进糖尿病微血管并发症的发生与发展。血症也能促进糖尿病微血管并发症的发生与发展。2022/9/302932第二十九页，讲稿共三十九页哦4 4、CRFCRF并发症防治并发症防治慢性肾功能衰竭（慢性肾功能衰竭（CRFCRF）患者普遍有高）患者普遍有高HcyHcy血症，其发血症，其发生率是正常人生率是正常人3333倍。倍。尿毒症时一方面肝脏尿毒症时一方面肝脏蛋氨酸腺苷转移酶活性蛋氨酸腺苷转移酶活性升高，导升高，导致致S-S-腺苷蛋氨酸水平升高；另一方面肾功能下降使腺苷蛋氨酸水平升高；另一方面肾功能下降使HcyHcy代谢的必需产物代谢的必需产物丝氨酸合成减少，导致丝氨酸合成减少，导致HcyHcy代谢受代谢受抑制抑制引起引起HcyHcy的堆积。的堆积。2022/9/303033第三十页，讲稿共三十九页哦5 5、肺血栓栓塞症防治、肺血栓栓塞症防治研究表明，高研究表明，高HcyHcy血症（血症（20mol/L20mol/L）使得深静脉血栓）使得深静脉血栓的危险性明显增大，高的危险性明显增大，高HcyHcy血症可使深静脉血栓发生率血症可使深静脉血栓发生率增加增加4 4倍。倍。高高HcyHcy是我国汉族人群肺血栓栓塞症（是我国汉族人群肺血栓栓塞症（PTEPTE）发病的一）发病的一个独立的危险因子，降低个独立的危险因子，降低HcyHcy可降低国人静脉血栓栓塞可降低国人静脉血栓栓塞症（症（VTEVTE）的危险。）的危险。2022/9/303134第三十一页，讲稿共三十九页哦6 6、预测骨折风险、预测骨折风险美国和荷兰的流行病学研究结果显示：高美国和荷兰的流行病学研究结果显示：高HcyHcy的人容易的人容易骨折，高骨折，高HcyHcy组与低组与低HcyHcy组相比，男性的骨折风险为后组相比，男性的骨折风险为后者的者的4 4倍，女性为倍，女性为1.91.9倍。倍。研究还显示：老年人骨折中研究还显示：老年人骨折中19%19%是由高是由高HcyHcy引起的。引起的。HcyHcy阻碍骨胶原纤维状蛋白质形成网状结构的作用可能阻碍骨胶原纤维状蛋白质形成网状结构的作用可能就是高就是高HcyHcy者容易骨折的原因。者容易骨折的原因。2022/9/303235第三十二页，讲稿共三十九页哦7 7、诊断与监测肝损伤、诊断与监测肝损伤研究结果显示：血浆研究结果显示：血浆HcyHcy浓度在急性肝病和慢性肝病患浓度在急性肝病和慢性肝病患者间差异有显著性；者间差异有显著性；血浆血浆HcyHcy浓度对于慢性肝损伤的敏感性为浓度对于慢性肝损伤的敏感性为91%91%，特异性，特异性为为89%89%。以病理组织切片对照敏感性为。以病理组织切片对照敏感性为94%94%，特异性为，特异性为89%89%。血浆血浆HcyHcy浓度检测还可应用于对普通人群慢性肝病的筛浓度检测还可应用于对普通人群慢性肝病的筛选。选。2022/9/303336第三十三页，讲稿共三十九页哦8 8、优生优育与母婴健康、优生优育与母婴健康流行病流行病学学研究研究报导：报导：血中血中HcyHcy值高的值高的妇妇女容易女容易产产生妊娠生妊娠并发并发症症 (32%)(32%)；早早产产 (38%)(38%)；新生新生儿体儿体重重减减低低 (99%)99%)。孕妇检测孕妇检测HcyHcy对对防防治治妊娠妊娠并发并发症症与优生优育（预防与优生优育（预防早早产、产、流产、流产、新生新生儿体儿体重重减减低低、胎胎儿儿神神经经管畸型管畸型等）具有重等）具有重要意义。要意义。2022/9/303437第三十四页，讲稿共三十九页哦9 9、肿瘤防治、肿瘤防治有研究发现：未服抗叶酸药物的乳腺癌、卵巢癌和胰有研究发现：未服抗叶酸药物的乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌中有许多患者的血清腺癌中有许多患者的血清HcyHcy升高。升高。UelandUeland和和RefsumRefsum在白血病患者的研究认为在白血病患者的研究认为HcyHcy升高是因升高是因肿瘤细胞的快速增殖所致。肿瘤细胞的快速增殖所致。许多恶性肿瘤细胞有对蛋氨酸的依赖性，蛋氨酸的依许多恶性肿瘤细胞有对蛋氨酸的依赖性，蛋氨酸的依赖或高赖或高HcyHcy血症可能是恶性肿瘤一种表型的表达。血症可能是恶性肿瘤一种表型的表达。2022/9/303538第三十五页，讲稿共三十九页哦Lily LLily L等在一组未用药的肿瘤患者中将等在一组未用药的肿瘤患者中将HcyHcy浓度与主要浓度与主要的肿瘤标志物进行了比较，发现的肿瘤标志物进行了比较，发现HcyHcy血清浓度的变化与血清浓度的变化与血清肿瘤标志物血清肿瘤标志物CA125CA125、CA15-3CA15-3、CA19-9CA19-9及及CEACEA的变化的变化是平行的。这提示血清是平行的。这提示血清HcyHcy与肿瘤标记物一样反应肿瘤与肿瘤标记物一样反应肿瘤细胞的活性或肿瘤细胞的快速增生状况。细胞的活性或肿瘤细胞的快速增生状况。2022/9/303639第三十六页，讲稿共三十九页哦什么样的人需要做什么样的人需要做HCYHCY检查？检查？已有已有CHDCHD、脑血管病或周围、脑血管病或周围ASAS病者；病者；有高血压、糖尿病、肥胖、吸烟者；有高血压、糖尿病、肥胖、吸烟者；有有CHDCHD或或ASAS家族史者，尤其是直系亲属中有早发病或家族史者，尤其是直系亲属中有早发病或早病死者；早病死者；有黄瘤或黄疣者；有黄瘤或黄疣者；有家族性高脂血症者；有家族性高脂血症者；4040岁以上男性及绝经期后女性。岁以上男性及绝经期后女性。2022/9/303740第三十七页，讲稿共三十九页哦六、血标本采六、血标本采集注意事项项样品为血清或血浆，样品为血清或血浆，空腹空腹 8h8h以上以上，采采血血后后4h4h之內之內离离心心分分离离,置置干净试干净试管中保存管中保存。样本稳定性：样本稳定性：2-8 2-8：2-72-7天天；-20-20：几：几年年。样品不宜反复冻融。样品不宜反复冻融 。血血红红蛋白蛋白,胆红胆红素素,甘油三脂甘油三脂等对等对 Hcy Hcy 结结果果干扰小。干扰小。2022/9/303841第三十八页，讲稿共三十九页哦七、七、HcyHcy参考值参考值空腹血浆总空腹血浆总HcyHcy水平正常值为水平正常值为515umol/L515umol/L理想值理想值10umol/L 10umol/L 高于高于15umol/L15umol/L被认为是高被认为是高HcyHcy血症血症 将高将高HcyHcy分为轻、中、重度，其空腹血浆浓度分别为分为轻、中、重度，其空腹血浆浓度分别为15301530、3110031100及大于及大于100umol/L 100umol/L 2022/9/303942第三十九页，讲稿共三十九页哦