实验化脓性球菌的分离鉴定课件.ppt

关于实验化脓性球菌的分离鉴定现在学习的是第1页，共26页录像：录像：消毒灭菌消毒灭菌操作：操作：1.1.紫外线杀菌实验（普通平板紫外线杀菌实验（普通平板 1 1块块/3/3人）人）2.2.抗生素敏感试验（普通平板抗生素敏感试验（普通平板 1 1块块/3/3人）人）3.3.化脓性球菌分离鉴定（一）化脓性球菌分离鉴定（一）接种血平板接种血平板材料：材料：1.1.抗生素纸片抗生素纸片（青霉素、链霉素、庆大霉素、黄连素（青霉素、链霉素、庆大霉素、黄连素 1 1套套/6/6人）人）2.2.大肠杆菌、敏感金葡菌（大肠杆菌、敏感金葡菌（1 1支支/6/6人）人）3.3.脓汁标本（乙型链球菌、致病性金葡菌脓汁标本（乙型链球菌、致病性金葡菌 各各1 1支支/6/6人）人）4.4.普通平板、血平板、黑纸片等普通平板、血平板、黑纸片等实验内容实验内容现在学习的是第2页，共26页了解：各种消毒灭菌的方法及应用了解：各种消毒灭菌的方法及应用 无菌操作技术无菌操作技术掌握：掌握：1.1.化脓性球菌分离鉴定的方法和步骤化脓性球菌分离鉴定的方法和步骤 2.2.紫外线杀菌的原理紫外线杀菌的原理 3.3.抗生素敏感实验的方法抗生素敏感实验的方法 教学目标教学目标 重点难点重点难点 重点：化脓性球菌分离鉴定重点：化脓性球菌分离鉴定接种血平板接种血平板难点：化脓性球菌分离鉴定难点：化脓性球菌分离鉴定接种血平板接种血平板现在学习的是第3页，共26页消毒与灭菌消毒与灭菌概念：概念：v消毒消毒(disinfection):(disinfection):杀死物体上病原微生物，并杀死物体上病原微生物，并不一定能杀死含芽孢的细菌和非病原微生物。用以不一定能杀死含芽孢的细菌和非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂。消毒的药品称为消毒剂。v灭菌灭菌(sterilization):(sterilization):杀灭物体上所有微生物的方法。杀灭物体上所有微生物的方法。现在学习的是第4页，共26页防腐防腐(antisepsis):防止或抑制细菌生长繁殖的方法，细防止或抑制细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时称为消毒菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时称为消毒剂，低浓度时为防腐剂。剂，低浓度时为防腐剂。无菌无菌(asepsis):不含活菌的意思。防止细菌进入人体不含活菌的意思。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，称无菌操作。或其他物品的操作技术，称无菌操作。现在学习的是第5页，共26页热力灭菌法热力灭菌法湿热灭菌法：巴氏消毒法、流动蒸汽消毒法、湿热灭菌法：巴氏消毒法、流动蒸汽消毒法、煮沸法、间歇蒸汽灭菌法、高压蒸汽灭菌法煮沸法、间歇蒸汽灭菌法、高压蒸汽灭菌法干热灭菌法：焚烧、烧灼、干烤干热灭菌法：焚烧、烧灼、干烤（170/2h170/2h170/2h170/2h）电磁波辐射杀菌法电磁波辐射杀菌法紫外线紫外线电离辐射电离辐射滤过除菌法滤过除菌法超声波杀菌超声波杀菌干燥干燥物理消毒灭菌法：物理消毒灭菌法：现在学习的是第6页，共26页化学消毒灭菌法：化学消毒灭菌法：使用消毒剂使用消毒剂原理：原理：1.1.使菌体蛋白质变性或凝固：酚类、醇类、重金属使菌体蛋白质变性或凝固：酚类、醇类、重金属 盐等。如石炭酸、来苏、洗必泰盐等。如石炭酸、来苏、洗必泰2.2.干扰细菌的酶系统和代谢：氧化剂，如过氧化氢，干扰细菌的酶系统和代谢：氧化剂，如过氧化氢，高锰酸钾，过氧乙酸等高锰酸钾，过氧乙酸等3.3.损伤细菌细胞膜：表面活性剂，如新洁尔灭损伤细菌细胞膜：表面活性剂，如新洁尔灭现在学习的是第7页，共26页二、抗生素敏感试验二、抗生素敏感试验 随着抗生素的广泛应用，耐药变异菌株日益增加随着抗生素的广泛应用，耐药变异菌株日益增加（尤其是金葡、肠道杆菌），给医疗工作带来了不少的（尤其是金葡、肠道杆菌），给医疗工作带来了不少的困难。困难。现在学习的是第8页，共26页 为正确使用抗生素，临床上常在分离致病细菌的为正确使用抗生素，临床上常在分离致病细菌的同时做药物敏感试验，以了解该细菌对常用各种抗生同时做药物敏感试验，以了解该细菌对常用各种抗生素的敏感性。素的敏感性。药敏试验的常用方法：药敏试验的常用方法：纸片法纸片法现在学习的是第9页，共26页操作：操作：贴纸片贴纸片敏感金葡敏感金葡现在学习的是第10页，共26页现在学习的是第11页，共26页结果分析：结果分析：如果细菌对药物敏感，则在药片周围有抑菌圈形成，敏如果细菌对药物敏感，则在药片周围有抑菌圈形成，敏感度越高抑菌圈直径越大：感度越高抑菌圈直径越大：20mm20mm：极度极度敏感敏感15-20mm15-20mm：中度中度敏感敏感10-15mm10-15mm：轻度轻度敏感敏感10mm:10mm:不敏感不敏感无抑菌圈：耐药无抑菌圈：耐药抑菌圈直径抑菌圈直径现在学习的是第12页，共26页化脓性炎症是临床上常见病，除了病原性球菌外，化脓性炎症是临床上常见病，除了病原性球菌外，其他微生物也可以引起化脓性感染。其他微生物也可以引起化脓性感染。常见的标本有脓汁、咽拭子、痰、血液、脑脊常见的标本有脓汁、咽拭子、痰、血液、脑脊液等。液等。本次实验是以脓汁标本进行病原性球菌的分离鉴本次实验是以脓汁标本进行病原性球菌的分离鉴定定三、化脓性球菌分离鉴定（一）三、化脓性球菌分离鉴定（一）现在学习的是第13页，共26页化脓性球菌分离鉴定步骤化脓性球菌分离鉴定步骤 脓汁脓汁血平板血平板菌落菌落葡萄状排列葡萄状排列链状排列链状排列血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验血清肉汤管血清肉汤管接种接种划线法划线法373724h24h革兰染色革兰染色成对排列成对排列现在学习的是第14页，共26页操作：操作：1.1.接种血平板（接种血平板（1 1块块/人）人）三线法接种分离单个菌落三线法接种分离单个菌落现在学习的是第15页，共26页1.临床上耐药性菌株感染，如何确定其治疗用药？临床上耐药性菌株感染，如何确定其治疗用药？2.抗生素耐药性实验的结果是如何判定？抗生素耐药性实验的结果是如何判定？思考题思考题现在学习的是第16页，共26页现在学习的是第17页，共26页高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法的杀菌效果最好，运用广泛。高压蒸汽灭菌法的杀菌效果最好，运用广泛。压力为压力为1515磅磅/寸寸2 2，3030分钟可杀死一切芽胞，达到灭菌的目的。分钟可杀死一切芽胞，达到灭菌的目的。（温度可达（温度可达121)121)优点：优点：1.1.能够达到较高的温度。能够达到较高的温度。2.2.穿透力强。穿透力强。3.3.蒸气遇冷物凝成水时可放出汽化热，蒸气遇冷物凝成水时可放出汽化热，迅速提高冷物的温度。迅速提高冷物的温度。4.4.高压蒸气不会使物品过分潮湿，避高压蒸气不会使物品过分潮湿，避 免了水煮的缺点。免了水煮的缺点。现在学习的是第18页，共26页现在学习的是第19页，共26页1.1.高压的整个过程必须有专人守侯，并随时排气以防压高压的整个过程必须有专人守侯，并随时排气以防压力表显示错误及其它原因引起高压锅内压力剧增而导力表显示错误及其它原因引起高压锅内压力剧增而导致爆炸。致爆炸。2.2.高压完毕需等待高压锅内压力降低至零时方可打开取物。高压完毕需等待高压锅内压力降低至零时方可打开取物。注意事项：注意事项：现在学习的是第20页，共26页 波长波长200-300nm200-300nm的紫外线具有杀菌作用，其中以的紫外线具有杀菌作用，其中以265-266nm265-266nm最强，这与最强，这与DNADNA的吸收光谱范围一致。紫外线的吸收光谱范围一致。紫外线主要作用于主要作用于DNADNA，使一条，使一条DNADNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成双聚体，从而改变结合而形成双聚体，从而改变DNADNA的分子构型，干扰的分子构型，干扰DNADNA的的复制与转录，导致细菌的死亡或变异。复制与转录，导致细菌的死亡或变异。紫外线杀菌原理紫外线杀菌原理:现在学习的是第21页，共26页1.1.穿透力弱，一般玻璃、纸、布、尘埃、水蒸气均穿透力弱，一般玻璃、纸、布、尘埃、水蒸气均能阻挡。能阻挡。2.2.适用于空气、物体表面的消毒。适用于空气、物体表面的消毒。3.3.有效距离在有效距离在2 2米左右（米左右（紫外灯的安装紫外灯的安装）4.4.紫外线对人的眼睛、皮肤有损害作用。紫外线对人的眼睛、皮肤有损害作用。注意事项注意事项:现在学习的是第22页，共26页操作步骤操作步骤：1.1.取普通平板（取普通平板（1 1块块/3/3人）人）2.2.取大肠杆菌斜面培养物在平板上取大肠杆菌斜面培养物在平板上密集划线密集划线3.3.用灭菌镊子取无菌黑纸片夹放到平板正中用灭菌镊子取无菌黑纸片夹放到平板正中4.4.将平板放到紫外线下照射将平板放到紫外线下照射3030分钟分钟5.5.放放3737孵箱培养孵箱培养6.6.观察结果观察结果7.7.注意操作中始终保持无菌操作注意操作中始终保持无菌操作现在学习的是第23页，共26页划线、盖纸、照射划线、盖纸、照射紫外线杀菌实验操作紫外线杀菌实验操作现在学习的是第24页，共26页电离辐射电离辐射 射线和射线和射线；射线；产生自由基或毒性基团，干扰产生自由基或毒性基团，干扰DNADNA合成合成,导致导致酶系统功能紊乱等酶系统功能紊乱等;射线有较高穿透力；射线有较高穿透力；常用于一次性医用塑料制品的消毒；也用于常用于一次性医用塑料制品的消毒；也用于食品消毒，不破坏其营养成分。食品消毒，不破坏其营养成分。现在学习的是第25页，共26页感谢大家观看现在学习的是第26页，共26页