微生物学实验 (2).ppt

微生物学实验现在学习的是第1页，共73页2基本原理：基本原理：环境中的微生物在营养丰富的培养基环境中的微生物在营养丰富的培养基平板中经过培养即可长成肉眼可见的菌平板中经过培养即可长成肉眼可见的菌落，从而可检测到环境中存在的微生物落，从而可检测到环境中存在的微生物的类型和数量。的类型和数量。3实验材料：实验材料：营养琼脂平板、营养琼脂平板、灭菌棉签、灭菌棉签、恒温培养箱等恒温培养箱等现在学习的是第2页，共73页4实验方法和步骤：（实验方法和步骤：（P6-7）每四个同学为一组，每个同学一个营养琼脂平板，每人各选取以下其中一种处理方法每四个同学为一组，每个同学一个营养琼脂平板，每人各选取以下其中一种处理方法（或你感兴趣的其他方法或你感兴趣的其他方法），写好标签：），写好标签：1.实验室空气中的微生物：比较培养基暴露于空气不同时间的区别：实验室空气中的微生物：比较培养基暴露于空气不同时间的区别：v打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中10min，盖好皿盖；，盖好皿盖；v打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中30min，盖好皿盖；，盖好皿盖；2.比较洗手前后手指上微生物的区别：在培养皿底部用记号笔分四个区（比较洗手前后手指上微生物的区别：在培养皿底部用记号笔分四个区（A、B、C、D区），洗手前区），洗手前后分别用手指在培养基表面轻按。（注意不要按碎培养基。）盖好皿盖。后分别用手指在培养基表面轻按。（注意不要按碎培养基。）盖好皿盖。3.口气中的微生物：打开皿盖，对着培养基吹气。口气中的微生物：打开皿盖，对着培养基吹气。4.实验台面的微生物：用灭菌棉签揩拭实验台面，再用此棉签在培养基表面滚动一下，实验台面的微生物：用灭菌棉签揩拭实验台面，再用此棉签在培养基表面滚动一下，也可用同样方法检测你所感兴趣的其他地方或物品。也可用同样方法检测你所感兴趣的其他地方或物品。处理完成后，盖好皿盖，处理完成后，盖好皿盖，倒置培养皿倒置培养皿，置于置于37温箱培养温箱培养1-2天观察，记录实验结果。天观察，记录实验结果。现在学习的是第3页，共73页5实验结果：实验结果：将实验结果记录于下表（将实验结果记录于下表（P8）：）：表表1：微生物检测的结果记录表：微生物检测的结果记录表处理方法处理方法（1）（2）（3）（4）菌落数量菌落数量菌落特征菌落特征（大小、形状、透明度、（大小、形状、透明度、颜色等）颜色等）简要说明简要说明菌落数量可用菌落数量可用“+”和和“-”来表示，从多到少依次表示为来表示，从多到少依次表示为+，+，+，+，-现在学习的是第4页，共73页6分析及讨论：分析及讨论：7思考题：思考题：通过本次实验，在防止微生物污染通过本次实验，在防止微生物污染与扩散方面，你学到了些什么？有何体与扩散方面，你学到了些什么？有何体会？会？现在学习的是第5页，共73页实验二实验二 显微镜的使用和细菌基本形态的观察显微镜的使用和细菌基本形态的观察（P40-47）1.学习并掌握显微镜，特别是油镜的工作原学习并掌握显微镜，特别是油镜的工作原理和使用方法理和使用方法；2.熟练使用显微镜观察细菌的个体形态熟练使用显微镜观察细菌的个体形态。实验项目号：实验项目号：80000039101实验类型：实验类型：验证性验证性1实验目的实验目的：现在学习的是第6页，共73页 1.光学部分光学部分:接目镜接目镜、接接物镜物镜、照明装置照明装置(聚光镜、聚光镜、虹彩光圈、虹彩光圈、反光镜等反光镜等).它使它使检视物放大检视物放大,造成物象造成物象.2.机械部分机械部分:镜座、镜臂、镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件调节器等部件.它起着支持它起着支持 调节调节 固定等作用固定等作用.显微镜的构造显微镜的构造2基本原理：基本原理：微生物的个体很小，必须要借助显微镜才能看清其形态。微生物的个体很小，必须要借助显微镜才能看清其形态。现在学习的是第7页，共73页 1.放大倍数放大倍数=接物镜放大倍数接物镜放大倍数接目接目镜放大倍数镜放大倍数 2.显微镜的分辨率显微镜的分辨率 是表示显微镜辨是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为：可用公式表示为：D=/2nsin(/2)式中式中D D：物镜分辨出物体两点间的最短物镜分辨出物体两点间的最短距离。距离。：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均0.550.55 m)m)n:n:物镜和被检标本间介质的折射物镜和被检标本间介质的折射率。率。：镜口角（即入射角）。镜口角（即入射角）。显微镜的放大倍数和分辨率显微镜的放大倍数和分辨率现在学习的是第8页，共73页 1.香柏油的折射率与玻香柏油的折射率与玻璃接近，提高了视野的璃接近，提高了视野的照明度。照明度。2.提高了显微镜的分提高了显微镜的分辨率辨率油镜使用的原理油镜使用的原理现在学习的是第9页，共73页3实验材料：实验材料：v玻片标本：玻片标本：球状：四联球菌（球状：四联球菌（Micrococcus tetragenus）杆状：枯草杆菌（杆状：枯草杆菌（Bacillus subtilis）螺旋状：水弧菌（螺旋状：水弧菌（Vibrio aquatilis）v示范片：溶血链球菌（示范片：溶血链球菌（Streptococcus hemolyticus）v其他器材：显微镜、香柏油、清洁剂、擦镜纸其他器材：显微镜、香柏油、清洁剂、擦镜纸等等 现在学习的是第10页，共73页1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。2.调节光亮度调节光亮度 3.低倍镜观察：粗调、细调低倍镜观察：粗调、细调 4.高倍观察高倍观察：细调：细调 5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，旋开高倍镜，在标本中油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，旋开高倍镜，在标本中央滴一滴香柏油，转过油镜，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至央滴一滴香柏油，转过油镜，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。看清物象为止。6.换片：另换新片，必须从换片：另换新片，必须从“3”开始操作。开始操作。7.标本片的清洁：标本片的清洁：8.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量清洁剂擦去残留的油，最后用油，然后再用擦镜纸沾取少量清洁剂擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的清洁剂，后将镜体全部复原。擦镜纸擦去残留的清洁剂，后将镜体全部复原。4实验方法和步骤：实验方法和步骤：（P44-45）主要是油镜的使用主要是油镜的使用现在学习的是第11页，共73页 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。以免损坏。2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目视接观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面玻片或损伤镜面。4.观察观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。拿，更不可倾斜拿。6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片片。显微镜保养和使用中的注意事项：显微镜保养和使用中的注意事项：现在学习的是第12页，共73页四联球菌四联球菌链球菌链球菌水弧菌水弧菌枯草杆菌枯草杆菌细菌基本形态的观察细菌基本形态的观察 利用油镜，观察细菌的基本形态（球状、杆状和螺旋状），边观察边绘图。利用油镜，观察细菌的基本形态（球状、杆状和螺旋状），边观察边绘图。现在学习的是第13页，共73页5观察结果（绘图）观察结果（绘图）P466分析及讨论：分析及讨论：菌名菌名拉丁学名拉丁学名放大倍数放大倍数绘出在油镜下观察到的形态图，注意菌体的绘出在油镜下观察到的形态图，注意菌体的形态、大小比例、排列，形态、大小比例、排列，同时标明同时标明菌名菌名(包括拉丁学名包括拉丁学名)和和放大倍数（物镜的放大倍数放大倍数（物镜的放大倍数目镜的放大倍数）目镜的放大倍数）现在学习的是第14页，共73页1.用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加香柏油有什么作用？之间滴加香柏油有什么作用？2.镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？接用高倍镜或油镜观察？3.影响显微镜分辨率的因素有哪些？影响显微镜分辨率的因素有哪些？7思考题：（思考题：（P47）现在学习的是第15页，共73页实验三实验三 细菌简单染色及革兰氏染色细菌简单染色及革兰氏染色1.学习微生物制片、染色的基本技术；学习微生物制片、染色的基本技术；2.了解革兰氏染色的原理，掌握革兰氏染了解革兰氏染色的原理，掌握革兰氏染色的方法；色的方法；3.巩固油镜的使用方法，熟练观察细菌的巩固油镜的使用方法，熟练观察细菌的个体形态。个体形态。实验项目号：实验项目号：80000039102实验类型实验类型：验证性验证性1实验目的：实验目的：现在学习的是第16页，共73页2基本原理：基本原理：简单染色：简单染色：简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态。染料主要有碱性染料、酸性染料和示其形态。染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类，通常采用中性染料三大类，通常采用碱性染料碱性染料进行染色。进行染色。因细菌在中性、碱性或弱酸性的溶液中时常因细菌在中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，而染料电离后的染色部分带正电带负电荷，而染料电离后的染色部分带正电荷，易与细胞结合使其着色。荷，易与细胞结合使其着色。现在学习的是第17页，共73页根据细胞壁结构和成分的不同根据细胞壁结构和成分的不同 革兰氏染色法革兰氏染色法（细菌学上最常用的鉴别染色法）（细菌学上最常用的鉴别染色法）：现在学习的是第18页，共73页3实验材料：实验材料：v菌种：菌种：枯草杆菌枯草杆菌（Bacillus subtilis）大肠杆菌大肠杆菌（Escherichia coli）v染色液和试剂：染色液和试剂：革兰氏染色液、简单染色液等革兰氏染色液、简单染色液等v芽胞、鞭毛、荚膜的示范片芽胞、鞭毛、荚膜的示范片v其他器材：显微镜、香柏油、清洁剂、擦镜其他器材：显微镜、香柏油、清洁剂、擦镜纸等纸等 现在学习的是第19页，共73页v简单染色：简单染色：（材料：牙垢材料：牙垢）涂片涂片 干燥干燥 固定固定 染色染色（1-2min）水洗水洗干燥干燥油镜检油镜检绘图绘图v革兰氏染色：革兰氏染色：（材料：大肠杆菌、枯草杆菌材料：大肠杆菌、枯草杆菌）涂片涂片干燥干燥固定固定结晶紫初染结晶紫初染（1-2min）水洗水洗 碘液媒染碘液媒染（1min）水洗水洗 酒精酒精脱色脱色（30s内）内）水洗水洗 番红复染番红复染（2min）水洗水洗 干燥干燥油镜检油镜检，判断菌体的革兰氏，判断菌体的革兰氏染色结果染色结果绘图绘图4实验方法和步骤：实验方法和步骤：现在学习的是第20页，共73页v观察标本片观察标本片细胞结构细胞结构菌名菌名染色方法染色方法图例图例芽胞芽胞枯草杆菌枯草杆菌（Bacillus subtilis）芽胞染色法芽胞染色法鞭毛鞭毛变形杆菌变形杆菌(Proteus vulgaris)鞭毛染色法鞭毛染色法荚膜荚膜圆圆褐固氮菌褐固氮菌（褐球固氮菌）（褐球固氮菌）（Azotobacter chroococcum）负染色法负染色法现在学习的是第21页，共73页5实验结果实验结果:v绘图绘图v革兰氏染色的结果革兰氏染色的结果牙垢中的细菌牙垢中的细菌10010枯草杆菌（示芽胞）枯草杆菌（示芽胞）拉丁学名拉丁学名放大倍数放大倍数变形杆菌（示鞭毛）变形杆菌（示鞭毛）拉丁学名拉丁学名放大倍数放大倍数圆褐固氮菌（示荚膜）圆褐固氮菌（示荚膜）拉丁学名拉丁学名放大倍数放大倍数菌名菌名形状形状简图简图颜色颜色革兰氏染色结果革兰氏染色结果大肠杆菌大肠杆菌枯草杆菌枯草杆菌现在学习的是第22页，共73页1.在进行细菌涂片时应注意哪些环节？在进行细菌涂片时应注意哪些环节？P75(1)2.进行细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固进行细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固定时应注意什么？定时应注意什么？P76(2)3.你的革兰氏染色是否成功？有哪些问题需要注意，你的革兰氏染色是否成功？有哪些问题需要注意，为什么？为什么？P84(1)4.现有一株未知杆菌，个体明显大于大肠杆菌，请现有一株未知杆菌，个体明显大于大肠杆菌，请你鉴定杆菌是你鉴定杆菌是G+还是还是G-，如何确定你的染色结，如何确定你的染色结果的正确性？果的正确性？P84(2)7思考题：（思考题：（P47）6分析及讨论：分析及讨论：现在学习的是第23页，共73页实验四实验四 放线菌、酵母菌、霉菌个体形态的观察放线菌、酵母菌、霉菌个体形态的观察四大类微生物菌落形态的观察四大类微生物菌落形态的观察1.学习放线菌、酵母菌、霉菌的制片方法，学习放线菌、酵母菌、霉菌的制片方法，观察其个体形态观察其个体形态2.了解四大类微生物的菌落特点，学会从了解四大类微生物的菌落特点，学会从菌落形态区分四大类微生物。菌落形态区分四大类微生物。实验项目号：实验项目号：80000039103实验类型实验类型：验证性验证性1实验目的实验目的：现在学习的是第24页，共73页2基本原理：基本原理：1.放线菌（放线菌（P72-73）：）：印片法：印片法：用于观察气生菌丝、孢子丝的形态、孢子的排用于观察气生菌丝、孢子丝的形态、孢子的排列方式及形态。列方式及形态。2.酵母菌（酵母菌（P73）：）：用吕氏碱性美兰染色做用吕氏碱性美兰染色做水浸片水浸片，可区分死活细胞：，可区分死活细胞：死细胞死细胞 蓝色蓝色 活细胞活细胞 无色无色3.霉菌（根霉）（霉菌（根霉）（P74）：）：挑菌做水浸片直接观察。挑菌做水浸片直接观察。现在学习的是第25页，共73页青霉青霉根霉根霉曲霉曲霉细黄链霉菌（放线菌）细黄链霉菌（放线菌）酵母菌酵母菌现在学习的是第26页，共73页3实验材料：实验材料：v菌种：菌种：细黄链霉菌（平板）、酿酒酵母（试管斜面）、细黄链霉菌（平板）、酿酒酵母（试管斜面）、黑根霉（平板）黑根霉（平板）v玻片标本：玻片标本：青霉、黑曲霉青霉、黑曲霉v菌落标本：菌落标本：细菌（大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌）细菌（大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌）放线菌（细黄链霉菌）放线菌（细黄链霉菌）酵母菌（酿酒酵母）酵母菌（酿酒酵母）霉菌（黑曲霉、黑根霉）霉菌（黑曲霉、黑根霉）v染料：染料：石碳酸复红、吕氏碱性美兰、乳酸酚石碳酸复红、吕氏碱性美兰、乳酸酚v其他器材：其他器材：现在学习的是第27页，共73页1.放线菌（菌种：放线菌（菌种：细黄链霉菌平板细黄链霉菌平板）印片法：印片法：用接种铲取一小块菌苔（连同培用接种铲取一小块菌苔（连同培养基）放在一块载玻片上养基）放在一块载玻片上取另一块载玻片取另一块载玻片稍加热并在其上轻压稍加热并在其上轻压固定固定用石碳酸复红用石碳酸复红做简单染色片做简单染色片油镜检油镜检绘图绘图4实验方法和步骤：实验方法和步骤：现在学习的是第28页，共73页2.酵母菌（菌种：酿酒酵母）酵母菌（菌种：酿酒酵母）在载玻片上滴一滴美兰在载玻片上滴一滴美兰用接种环取少量酵母菌与染料混用接种环取少量酵母菌与染料混匀匀盖上盖玻片（注意防止气泡的产生）盖上盖玻片（注意防止气泡的产生）镜检镜检（高（高（高（高倍镜）倍镜）倍镜）倍镜）绘图绘图3.霉菌（菌种：根霉）霉菌（菌种：根霉）在载玻片上滴一滴乳酸酚在载玻片上滴一滴乳酸酚用解剖针小心挑取少许根用解剖针小心挑取少许根霉的菌丝放在染料中霉的菌丝放在染料中盖上盖玻片（注意防止气泡的产生）盖上盖玻片（注意防止气泡的产生）镜检镜检（低倍镜或高倍镜）（低倍镜或高倍镜）（低倍镜或高倍镜）（低倍镜或高倍镜）绘图绘图4.标本片的观察：（青霉、曲霉）标本片的观察：（青霉、曲霉）5.菌落形态的观察：菌落形态的观察：现在学习的是第29页，共73页现在学习的是第30页，共73页5实验结果实验结果:1.绘出所观察微生物的个体形态图绘出所观察微生物的个体形态图（细黄链霉菌、酿酒酵母、（细黄链霉菌、酿酒酵母、根霉、青霉、曲霉根霉、青霉、曲霉，注意标注清楚各部分结构的名称），注意标注清楚各部分结构的名称）菌名菌名拉丁学名拉丁学名放大倍数放大倍数现在学习的是第31页，共73页2.列表比较四大类微生物的菌落特征列表比较四大类微生物的菌落特征类类群群菌名菌名菌落大小菌落大小干湿干湿颜色颜色表面表面边缘边缘厚薄厚薄致密度致密度气味气味细菌细菌放线菌放线菌酵母菌酵母菌霉菌霉菌四大类微生物的菌落特征四大类微生物的菌落特征现在学习的是第32页，共73页1.根据你的观察结果，吕氏碱性美兰染色的作用时间与根据你的观察结果，吕氏碱性美兰染色的作用时间与酵母菌死活细胞的比例的变化是否有关系？试分析原酵母菌死活细胞的比例的变化是否有关系？试分析原因。因。P76-（10）2.黑曲霉和黑根霉在个体形态和菌落形态上有何区黑曲霉和黑根霉在个体形态和菌落形态上有何区别？别？P76-（12）7思考题：思考题：6分析及讨论：分析及讨论：现在学习的是第33页，共73页实验五实验五 显微镜直接计数法显微镜直接计数法及微生物大小的测定及微生物大小的测定（P47-56)1.了解血球计数板的构造和使用方法，学会用血球计数了解血球计数板的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌悬液进行计数。板对酵母菌悬液进行计数。2.学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。实验项目号：实验项目号：80000039104实验类型实验类型：验证性验证性1实验目的实验目的：现在学习的是第34页，共73页2基本原理：基本原理：每一个大方格边长为每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为则每一大方格的面积为1mm2，盖，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为之间的高度为0.1mm，所以计，所以计数室的容积为数室的容积为0.1mm3。设五个中方格中总菌数为设五个中方格中总菌数为A，菌，菌液稀释倍数为液稀释倍数为B，1.1.显微镜直接计数法显微镜直接计数法:(P52):(P52)现在学习的是第35页，共73页 采用目镜测微尺和采用目镜测微尺和镜台测微尺测量微生物镜台测微尺测量微生物细胞的大小。镜台测微细胞的大小。镜台测微尺一般是将尺一般是将1mm等分为等分为100格，因此每格长格，因此每格长10m，而目镜测微尺，而目镜测微尺在不同放大倍数下的每在不同放大倍数下的每格所代表的长度是不同格所代表的长度是不同的，使用前须用镜台测的，使用前须用镜台测微尺校正，以求得在一微尺校正，以求得在一定放大倍数下的实际长定放大倍数下的实际长度。度。2.微生物大小的测定：微生物大小的测定：(P48)现在学习的是第36页，共73页3实验材料：实验材料：v菌种：菌种：酿酒酵母菌悬液，枯草杆菌斜面酿酒酵母菌悬液，枯草杆菌斜面v其他器材：其他器材：血球计数板，目镜测微尺，镜台血球计数板，目镜测微尺，镜台测微尺，显微镜，盖玻片，载玻片，染色液测微尺，显微镜，盖玻片，载玻片，染色液等等现在学习的是第37页，共73页1.显微镜直接计数法：显微镜直接计数法：（菌种：酿酒酵母）（菌种：酿酒酵母）镜检计数室镜检计数室加样品加样品静止静止5分钟分钟显微镜计数（每个计数显微镜计数（每个计数室选室选5个中格）个中格）记录结果记录结果清洗血球计数板清洗血球计数板2.微生物大小的测定：微生物大小的测定：（菌种：枯草杆菌）（菌种：枯草杆菌）v做枯草杆菌的简单染色片做枯草杆菌的简单染色片v安装目镜测微尺安装目镜测微尺（已安装好）（已安装好）并用镜台测微尺在各并用镜台测微尺在各物镜下校正目镜测微尺物镜下校正目镜测微尺v在油镜下测定菌体大小：分别测在油镜下测定菌体大小：分别测10个菌的宽和长，个菌的宽和长，求平均值，再将所测格数乘以目镜测微尺（油镜）求平均值，再将所测格数乘以目镜测微尺（油镜）下每格代表的长度，即得该菌的实际大小。下每格代表的长度，即得该菌的实际大小。4实验方法和步骤：实验方法和步骤：现在学习的是第38页，共73页5实验结果实验结果:1.显微镜直接计数：显微镜直接计数：计算并报告该菌悬液的浓度：计算并报告该菌悬液的浓度：（写成科学记数法，保留（写成科学记数法，保留2位有效数字）位有效数字）表表1：显显微微镜镜直接直接计计数的数的结结果果A表示五个中方格中的表示五个中方格中的总总菌数；菌数；B表示菌液稀表示菌液稀释释倍数。倍数。各中格菌数各中格菌数A 两室平均两室平均A值值 B 菌液浓度菌液浓度（菌数（菌数/ml）12345第一室第一室第二室第二室现在学习的是第39页，共73页2.微生物大小的测定：微生物大小的测定：接物接物镜镜物物镜镜放大倍数放大倍数目目镜测镜测微尺格数微尺格数物物镜测镜测微尺格数微尺格数目尺每格的目尺每格的长长度（度（m）低倍镜低倍镜高倍镜高倍镜油镜油镜表表2：用：用镜镜台台测测微尺校正目微尺校正目镜测镜测微尺的微尺的结结果果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均平均宽（格）宽（格）长（格）长（格）表表3：枯草杆菌：枯草杆菌细细胞大小胞大小测测定的定的结结果果计算出枯草杆菌的大小：宽计算出枯草杆菌的大小：宽=m 长长=m 表示为：宽表示为：宽长长（保留小数点后保留小数点后1位）位）现在学习的是第40页，共73页1.根据你实验的体会，说明用血球计数板计数的误根据你实验的体会，说明用血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？求准确？2.为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？7思考题：思考题：6分析及讨论：分析及讨论：现在学习的是第41页，共73页实验六实验六 微生物的分离纯化及生理生化试验微生物的分离纯化及生理生化试验1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程；过程；2.了解干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的原理，了解干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的原理，掌握其灭菌方法。掌握其灭菌方法。实验项目号：实验项目号：80000039105实验类型实验类型：综合性综合性 1实验目的实验目的：、培养基的配制及灭菌、培养基的配制及灭菌（P15-28）现在学习的是第42页，共73页2基本原理：基本原理：培养基培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖和积累代谢产是人工配制的适合微生物生长繁殖和积累代谢产物的营养基质，包括物的营养基质，包括碳源、氮源、能源、矿物元素、碳源、氮源、能源、矿物元素、生长因子和水生长因子和水等生长要素。不同微生物对营养物质和等生长要素。不同微生物对营养物质和pH的要求是不同的。培养基在使用之前必须要的要求是不同的。培养基在使用之前必须要处于无菌状态，故要先灭菌。处于无菌状态，故要先灭菌。灭菌方法：高压蒸汽灭菌法（灭菌方法：高压蒸汽灭菌法（121/20min）烘箱干热灭菌法烘箱干热灭菌法（160-170/1-2h）原理及适用物品？原理及适用物品？现在学习的是第43页，共73页根据来源可分为根据来源可分为:天然培养基天然培养基(complex/undefined medium):合成培养基合成培养基(defined medium):半合成培养基半合成培养基(semi-defined medium)：根据使用目的可分为根据使用目的可分为:（生物生物）鉴别培养基鉴别培养基(differential medium)选择培养基选择培养基(selected medium)：根据形状可分为根据形状可分为:固体培养基（固体培养基（solid medium）：）：半固体培养基（半固体培养基（semi-solid medium）：）：液体培养基（液体培养基（liquid medium）：培养基的类型和用途培养基的类型和用途 现在学习的是第44页，共73页3实验材料：实验材料：药品试剂：药品试剂：营养琼脂培养基、马铃薯培营养琼脂培养基、马铃薯培养基养基设备材料：设备材料：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、天平、药匙、电炉、烧杯、量筒、灭菌箱、天平、药匙、电炉、烧杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、试管、棉塞、培漏斗、漏斗架、玻璃棒、试管、棉塞、培养基、吸管、线绳、标签等。养基、吸管、线绳、标签等。现在学习的是第45页，共73页配制培养基的一般程序：配制培养基的一般程序：按使用目的选择培养基按使用目的选择培养基-按培养基配方称量各种药品按培养基配方称量各种药品-加热溶加热溶化化-调调pH（用（用1mol/L的的HCl或或NaOH)-趁热分装趁热分装-加棉塞加棉塞-包扎、标注包扎、标注-灭菌灭菌-试管摆斜面试管摆斜面4实验方法和步骤：实验方法和步骤：现在学习的是第46页，共73页每组配制的量：每组配制的量：项目项目培养基名称培养基名称配制量及分装配制量及分装做法做法灭灭菌菌培养基的配制培养基的配制（每一实验桌分成三组，每4人一组，分别配制培养基）1.营营养养琼琼脂脂：（牛肉膏蛋白胨培养基、细菌培养基）(2人）三角瓶：三角瓶：2瓶（150ml/瓶）/2人一组试试管斜面：管斜面：16支（约5ml/支）/2人一组三角瓶：三角瓶：直接称取相应的干粉培养基置于三角瓶内，另加0.5%的琼脂，加水加塞、灭菌试试管斜面：管斜面：每2人一组，称取100ml量的干粉培养基置于烧杯内，另加0.5%的琼脂，加水煮溶，分装高压蒸汽灭菌法（121/20min）2.马铃马铃薯培养基（薯培养基（2 2人）人）无菌水无菌水试试管：管：10支/4人（4.5ml/支）大三角瓶：大三角瓶：1瓶（100ml）/4人自来水分装、加塞、灭菌即得无菌培养皿无菌培养皿每人10套皿（5套/包）包扎灭菌高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法（160-170/1-2小时）无菌吸管无菌吸管每人5支1ml的吸管加过滤棉花、包扎灭菌即得现在学习的是第47页，共73页1.P20-（2）2.P20-（8）3.P27-（2）4.P27-（3）六六.思考题：思考题：五五.分析及讨论：分析及讨论：现在学习的是第48页，共73页实验六实验六 微生物的分离纯化及生理生化试验微生物的分离纯化及生理生化试验1.掌握稀释平板法、平板划线法分离纯化微生掌握稀释平板法、平板划线法分离纯化微生物的原理及方法；物的原理及方法；2.学习平板菌落计数法的基本原理和方法，并掌握学习平板菌落计数法的基本原理和方法，并掌握其基本技能。其基本技能。实验项目号：实验项目号：80000039105实验类型实验类型：综合性综合性 1实验目的实验目的：、微生物的分离纯化及活菌计数（、微生物的分离纯化及活菌计数（P28-34）现在学习的是第49页，共73页2基本原理：基本原理：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为的过程称为微生物分离与纯化微生物分离与纯化。微生物在固体培养基上。微生物在固体培养基上生长形成单个菌落，通过挑取单菌落而获得一种纯生长形成单个菌落，通过挑取单菌落而获得一种纯培养。培养。常用方法：常用方法：稀释平板法、平板划线法稀释平板法、平板划线法基本原理：基本原理：1.选择合适的培养基配方；选择合适的培养基配方；2.提供合适的生长环境，如酸碱度、温度和氧气；提供合适的生长环境，如酸碱度、温度和氧气；3.加入某种抑制剂，从而淘汰一些不需要的微生物。加入某种抑制剂，从而淘汰一些不需要的微生物。现在学习的是第50页，共73页3实验材料：实验材料：v培养基：培养基：营养琼脂（牛肉膏蛋白胨培养基、细菌营养琼脂（牛肉膏蛋白胨培养基、细菌培养基）、马铃薯培养基培养基）、马铃薯培养基v土壤样品：土壤样品：从校园采集从校园采集v溶液和试剂：溶液和试剂：盛盛4.5ml无菌水试管、盛无菌水试管、盛99ml无菌水三无菌水三角瓶等。角瓶等。v其他用品：其他用品：无菌培养皿、无菌吸管、接种环、酒无菌培养皿、无菌吸管、接种环、酒精灯等精灯等现在学习的是第51页，共73页 制备土壤稀释液制备土壤稀释液-加样加样-倒平板倒平板-倒置培倒置培养养-挑菌划线纯化挑菌划线纯化-镜检镜检-得到纯种得到纯种-接种到试管培养接种到试管培养-保藏保藏4实验方法和步骤：实验方法和步骤：流程：流程：现在学习的是第52页，共73页1.制备土壤稀释液：制备土壤稀释液：每管各每管各4.5ml无菌水无菌水吸取吸取1ml吸取吸取1ml15-20ml融化并冷却至融化并冷却至45的培养基的培养基现在学习的是第53页，共73页2.按下表，根据所要分离的微生物种类，选择适当的稀释液按下表，根据所要分离的微生物种类，选择适当的稀释液浓度，吸取浓度，吸取1ml稀释液加到灭菌培养皿中，每个稀释度稀释液加到灭菌培养皿中，每个稀释度3个重个重复；复；分离的微生物分离的微生物所用培养基所用培养基稀释液的浓度稀释液的浓度培养温度培养温度培养时间培养时间细菌细菌营养琼脂营养琼脂10-5、10-6、10-7371-2天天霉菌霉菌马铃薯培养基马铃薯培养基10-2、10-3、10-4282-3天天现在学习的是第54页，共73页 3.倒入溶化并冷却到倒入溶化并冷却到45的相应的培养基，迅速混匀，待的相应的培养基，迅速混匀，待冷凝后倒置于相应温度的培养箱中培养；冷凝后倒置于相应温度的培养箱中培养；4.培养相应时间后观察平板上菌落的生长情况，区分细培养相应时间后观察平板上菌落的生长情况，区分细菌、霉菌的菌落，记录相应的菌落数；菌、霉菌的菌落，记录相应的菌落数；5.挑取单菌落挑取单菌落划线划线（霉菌的要求点接霉菌的要求点接）纯化）纯化(每个纯种一个每个纯种一个编号，编号原则：菌别编号，编号原则：菌别-班别班别-座位号座位号-菌号菌号），镜检，纯种移），镜检，纯种移接到试管培养。接到试管培养。几种划线方法几种划线方法现在学习的是第55页，共73页5实验结果实验结果:1.记录培养后平板上相应微生物的的菌落记录培养后平板上相应微生物的的菌落 注：注：CFU/g土样土样=每个平板上的菌落平均数每个平板上的菌落平均数稀释倍数稀释倍数稀释度稀释度10-510-610-7每个平板上细菌每个平板上细菌的菌落数的菌落数1 2 3 平均平均1 2 3 平均平均1 2 3 平均平均细细菌菌CFU/g土土样样稀稀释释度度10-210-310-4每个平板上霉菌每个平板上霉菌的菌落数的菌落数1 2 3 平均平均1 2 3 平均平均1 2 3 平均平均霉菌霉菌CFU/g土土样样现在学习的是第56页，共73页2.按照按照P33和和P207-208的方法，分析上面的实的方法，分析上面的实验数据，报告每克土样中所含的细菌、霉验数据，报告每克土样中所含的细菌、霉菌的菌的CFU数。数。3.描述你所纯化得到的菌种的菌落形态和个描述你所纯化得到的菌种的菌落形态和个体形态。体形态。现在学习的是第57页，共73页1.怎样判断稀释平板计数数据是否可靠？需要掌握哪几个关怎样判断稀释平板计数数据是否可靠？需要掌握哪几个关键？键？P34-（3）2.当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的，而是集中当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的，而是集中在一起时，你认为问题出现在哪里？在一起时，你认为问题出现在哪里？P34-（6）3.一个酵母菌的悬液样品，分别用血球计数板直接计数一个酵母菌的悬液样品，分别用血球计数板直接计数法和平板菌落计数法进行计数，其结果会有什么不同法和平板菌落计数法进行计数，其结果会有什么不同？原因是什么。试比较这两种计数法的优缺点。？原因是什么。试比较这两种计数法的优缺点。七七.思考题：思考题：六六.分析及讨论：分析及讨论：现在学习的是第58页，共73页实验项目号：实验项目号：80000039105实验类型实验类型：综合性综合性（一）、实验目的（一）、实验目的：、微生物的生理生化试验、微生物的生理生化试验1.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法；掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法；2.掌握进行抗生素的抗菌试验的原理和方法。掌握进行抗生素的抗菌试验的原理和方法。实验六实验六 微生物的分离纯化及生理生化试验微生物的分离纯化及生理生化试验1大分子物质的水解试验及抗生素的抗菌试验大分子物质的水解试验及抗生素的抗菌试验（P111）现在学习的是第59页，共73页（二）、基本原理：（二）、基本原理：1.大分子物质的水解试验：大分子物质的水解试验：微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶靠产生的胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输到细胞内。如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精、双糖、单糖。蛋白酶到细胞内。如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精、双糖、单糖。蛋白酶水解蛋白质为小肽、氨基酸等，这些过程均可通过观察微生物菌落周围水解蛋白质为小肽、氨基酸等，这些过程均可通过观察微生物菌落周围的物质变化来证实，如在淀粉平板上淀粉被水解后滴加碘液时会出现不的物质变化来证实，如在淀粉平板上淀粉被水解后滴加碘液时会出现不呈蓝色的透明圈，在呈蓝色的透明圈，在酪蛋白平板（牛奶平板）上蛋白质被分解会出现酪蛋白平板（牛奶平板）上蛋白质被分解会出现透明圈。透明圈。2.抗生素的抗菌试验：抗生素的抗菌试验：抗生素为某些微生物的次生代谢产物，会积累在培养基质中。抗生素为某些微生物的次生代谢产物，会积累在培养基质中。把待试验的微生物连同培养基块置于加有供试菌株的平板表面，经把待试验的微生物连同培养基块置于加有供试菌株的平板表面，经培养，观察菌块周围是否有抑菌圈出现，就可知道该菌株是否产生培养，观察菌块周围是否有抑菌圈出现，就可知道该菌株是否产生相应的抗生素。相应的抗生素。现在学习的是第60页，共73页（三）、实验材料：（三）、实验材料：培养基：培养基：酪蛋白平板（牛奶平板）、淀粉平板、营养酪蛋白平板（牛奶平板）、淀粉平板、营养琼脂平板琼脂平板菌株：菌株：前个实验分离到的各种菌株（前个实验分离到的各种菌株（写明编号写明编号）、大肠）、大肠杆菌杆菌（Escherichia coli）、青霉、青霉(Penicillium sp.)、细黄链、细黄链霉菌（霉菌（Stretomyces griseus）、枯草杆菌）、枯草杆菌溶液和试剂：溶液和试剂：路哥氏碘液路哥氏碘液其他用品：其他用品：无菌培养皿、无菌吸管、接种环、酒精灯无菌培养皿、无菌吸管、接种环、酒精灯等等现在学习的是第61页，共73页点接微生物菌种点接微生物菌种30培养培养2天天观察透明圈大小观察透明圈大小酪蛋白平板酪蛋白平板1.蛋白质水解试验：蛋白质水解试验：（自己分离的细菌、霉菌和枯草杆菌对照自己分离的细菌、霉菌和枯草杆菌对照）2.淀粉水解试验：淀粉水解试验：（自己分离的细菌、霉菌和枯草杆菌对照自己分离的细菌、霉菌和枯草杆菌对照）30培养培养2天天加碘液，加碘液，观察透明圈大小观察透明圈大小（四）、实验方法和步骤：（四）、实验方法和步骤：点接微生物菌种点接微生物菌种现在学习的是第62页