病毒感染的检查方法与防治原则.ppt

关于病毒感染的检查方法与防治原则现在学习的是第1页，共44页第一节第一节 病毒感染的检查病毒感染的检查现在学习的是第2页，共44页病毒感染的检查病毒感染的检查检测内容检测内容查病毒查病毒查特异性查特异性抗体抗体 病毒颗粒病毒颗粒 病毒抗原病毒抗原 病毒核酸病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察电镜直接观察 光镜检查包含体光镜检查包含体 分离培养分离培养现在学习的是第3页，共44页一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似原则基本与细菌相似，但，但应注意：应注意：1.1.标本用标本用“双抗双抗”或两性霉素或两性霉素B B处理处理 2.2.低温保存低温保存，尽快送检尽快送检 3.3.血清学诊断采双份血清血清学诊断采双份血清现在学习的是第4页，共44页二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养 细胞培养细胞培养（cell culture）鸡胚接种鸡胚接种（egg inoculation）动物接种动物接种（animal inoculation）现在学习的是第5页，共44页二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定一般程序：一般程序：标本标本标本标本无菌处理无菌处理无菌处理无菌处理动物接种动物接种动物接种动物接种鸡胚培养鸡胚培养细胞培养细胞培养指标指标阳性阳性指标指标阴性阴性阴性阴性 病毒鉴定病毒鉴定病毒鉴定病毒鉴定 盲传盲传盲传盲传2 2 2 23 3代代指标阴性指标阴性病毒阴性病毒阴性现在学习的是第6页，共44页（一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养 1.1.细胞培养细胞培养 单层细胞培养单层细胞培养单层细胞培养单层细胞培养（monolayer cell culturemonolayer cell culture）分类分类 悬浮细胞培养悬浮细胞培养（suspended cell culture）原代细胞原代细胞（primary cell）细胞种类细胞种类 二倍体细胞（二倍体细胞（diploid cell）传代细胞系传代细胞系传代细胞系传代细胞系（continuous cell line）现在学习的是第7页，共44页病毒的细胞培养病毒的细胞培养细胞培养瓶细胞培养瓶单层细胞单层细胞现在学习的是第8页，共44页1.1.细胞培养细胞培养(1)(1)原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养组织组织 组织块组织块 分散的单个细胞分散的单个细胞 单层细胞单层细胞 剪碎剪碎 培养基培养基(原代细胞原代细胞原代细胞原代细胞)单层细胞单层细胞单层细胞单层细胞(次代细胞次代细胞次代细胞次代细胞)传代培养传代培养传代培养传代培养蛋白酶蛋白酶 现在学习的是第9页，共44页特点特点：对多种病毒敏感对多种病毒敏感 生长能力有限生长能力有限,获取成本高获取成本高 可携带潜伏病毒可携带潜伏病毒1.1.细胞培养细胞培养(1)(1)原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养现在学习的是第10页，共44页(2)(2)二倍体细胞培养二倍体细胞培养 体外分裂体外分裂体外分裂体外分裂50505050100100100100代仍保持二倍体染色体数目代仍保持二倍体染色体数目代仍保持二倍体染色体数目代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产可用于病毒分离和疫苗生产可用于病毒分离和疫苗生产可用于病毒分离和疫苗生产。特点特点：对多种病毒敏感对多种病毒敏感 不带异种蛋白不带异种蛋白(人源性人源性)不带病毒不带病毒，无致瘤潜能无致瘤潜能 可传可传5050代左右代左右1.1.细胞培养细胞培养现在学习的是第11页，共44页(3)(3)传代细胞培养传代细胞培养特点特点：对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高 繁殖能力高繁殖能力高繁殖能力高繁殖能力高，传代时间长传代时间长传代时间长传代时间长 有致癌危险，不能用于疫苗生产有致癌危险，不能用于疫苗生产有致癌危险，不能用于疫苗生产有致癌危险，不能用于疫苗生产1.1.细胞培养细胞培养现在学习的是第12页，共44页2.2.鸡胚培养鸡胚培养 采用孵化采用孵化914天的鸡胚天的鸡胚 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔尿囊腔（allantoic cavity）接种部位接种部位接种部位接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔羊膜腔（amniotic cavityamniotic cavity）流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离 卵黄囊卵黄囊（yolk sac）嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒 现在学习的是第13页，共44页现在学习的是第14页，共44页2 2、鸡胚培养、鸡胚培养优点：优点：易管理易管理，不带微生物不带微生物，成本较低成本较低缺点：缺点：操作程序复杂操作程序复杂现在学习的是第15页，共44页现在学习的是第16页，共44页3.3.动物接种动物接种 应用：应用：应用：应用：尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养 动物：动物：动物：动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：优点：优点：优点：结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型 缺点：缺点：有饲养条件要求，费用高有饲养条件要求，费用高有饲养条件要求，费用高有饲养条件要求，费用高，动物动物动物动物 体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒现在学习的是第17页，共44页1 1病毒增殖鉴定病毒增殖鉴定 (1)(1)细细细细 胞胞胞胞 病病病病 变变变变 效效效效 应应应应（cytopathcytopathic effect,effect,CPE CPE）细细细细胞胞胞胞变变变变圆圆圆圆、聚聚聚聚集集集集、坏坏坏坏死死死死、溶溶溶溶解解解解或或或或脱脱脱脱落落落落等（多数病毒）等（多数病毒）等（多数病毒）等（多数病毒）；形形成成多多核核巨巨细细胞胞或或称称融融合合细细胞胞（麻麻疹疹病病毒毒、巨巨巨巨细细细细胞胞胞胞病病病病毒毒毒毒、呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道合合合合胞胞胞胞病病病病毒毒毒毒等等）；在在培培养养细细胞胞中中形形成成包包涵涵体体（狂狂狂狂犬犬犬犬病病毒、麻疹病毒等病病毒、麻疹病毒等病病毒、麻疹病毒等病病毒、麻疹病毒等）。）。）。）。（二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定 现在学习的是第18页，共44页现在学习的是第19页，共44页细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)现在学习的是第20页，共44页麻疹病毒感麻疹病毒感染细胞染细胞呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒感染细胞感染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)现在学习的是第21页，共44页形成包涵体形成包涵体形成包涵体形成包涵体(inclusion bodyinclusion body)(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)现在学习的是第22页，共44页腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞(2 2)红细胞吸附红细胞吸附（hemadsorption）病毒病毒病毒病毒囊囊囊囊膜表面血凝素膜表面血凝素(HAHAHAHA)红细胞红细胞红细胞红细胞表面表面表面表面HAHAHAHA受体受体受体受体现在学习的是第23页，共44页(3 3)干扰现象干扰现象（interference）风疹病毒风疹病毒人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，CPECPECPECPE()埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，CPECPE()人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒？埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒CPE(-)CPE(-)CPE(-)CPE(-)风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒(+)+)+)+)埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒(-)(-)(-)(-)CPE(+)CPE(+)CPE(+)CPE(+)风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒(-)(-)(-)(-)埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒(+)(+)(+)(+)现在学习的是第24页，共44页(4 4)细胞代谢改变细胞代谢改变 细胞代谢变慢细胞代谢变慢 pH变化减慢变化减慢现在学习的是第25页，共44页2 2.病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定电子显微镜电子显微镜：设备、操作复杂，：设备、操作复杂，：设备、操作复杂，：设备、操作复杂，应用受限应用受限应用受限应用受限光学显微镜光学显微镜光学显微镜光学显微镜：可见：可见：可见：可见大病毒大病毒大病毒大病毒（痘类病毒），痘类病毒），对一般病毒检测对一般病毒检测对一般病毒检测对一般病毒检测意义不大意义不大意义不大意义不大现在学习的是第26页，共44页3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型 (1 1)血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验（hemagglutinatihemagglutination on inhibition test）正粘正粘病毒型与亚型鉴定病毒型与亚型鉴定病毒型与亚型鉴定病毒型与亚型鉴定 病毒病毒鸡鸡红细胞红细胞凝集凝集凝集凝集（血凝试验）（血凝试验）（血凝试验）（血凝试验）病毒病毒病毒病毒特异性抗体特异性抗体特异性抗体特异性抗体鸡鸡红细胞红细胞不凝集不凝集 （血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验）现在学习的是第27页，共44页(2)(2)免疫标记法免疫标记法免疫标记法免疫标记法（FIAFIA、EIAEIA、RIARIA）多种病毒鉴定多种病毒鉴定多种病毒鉴定多种病毒鉴定(3 3 3 3)凝胶免疫扩散试验凝胶免疫扩散试验凝胶免疫扩散试验凝胶免疫扩散试验(gel immuno-diffusion test)多种病毒鉴定多种病毒鉴定多种病毒鉴定多种病毒鉴定3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定现在学习的是第28页，共44页4 4.病毒分子生物学鉴定病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增核酸扩增 核酸杂交核酸杂交 基因芯片基因芯片 基因测序基因测序现在学习的是第29页，共44页（三）病毒数量与感染性测定（三）病毒数量与感染性测定1 1.血凝试验：病毒总量（活病毒血凝试验：病毒总量（活病毒血凝试验：病毒总量（活病毒血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）死病毒）死病毒）死病毒）2.2.蚀斑形成试验蚀斑形成试验 （plaque formation test）3 3 3 3.5050组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量 （5050 tissue culture infectious dose,infectious dose,TCIDTCID50）感染性病毒量感染性病毒量现在学习的是第30页，共44页(四四)新病毒的鉴定新病毒的鉴定核酸类型的测定核酸类型的测定 理化性状的检测理化性状的检测 形态学鉴定形态学鉴定 血清学鉴定血清学鉴定 基因测序和生物对比基因测序和生物对比现在学习的是第31页，共44页三、病毒感染的血清学诊断三、病毒感染的血清学诊断应用应用：采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚目目目目前前前前尚尚尚尚无无无无分分分分离离离离此此此此病病病病毒毒毒毒的的的的方方方方法法法法或或或或难难难难以以以以分分分分离离离离的的的的病毒病毒病毒病毒为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等现在学习的是第32页，共44页1 1.中和试验中和试验（neutralizing test）病毒病毒中和抗体中和抗体中和抗体中和抗体 病毒失去感染性病毒失去感染性病毒失去感染性病毒失去感染性 特点：特点：特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体维持时间长应用：应用：人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查 临床诊断少用临床诊断少用临床诊断少用临床诊断少用现在学习的是第33页，共44页2.2.补体结合试验补体结合试验 （complement fixation test）用用用用已已已已知知知知病病病病毒毒毒毒可可可可溶溶溶溶性性性性补补补补体体体体抗抗抗抗原原原原检检检检测测测测病病病病人人人人血血血血清清清清中中中中相相相相应的补体抗体应的补体抗体应的补体抗体应的补体抗体 特点：特点：特异性低，抗体出现早，消失快特异性低，抗体出现早，消失快特异性低，抗体出现早，消失快特异性低，抗体出现早，消失快 应用：应用：应用：应用：近期感染指标。近期感染指标。现在学习的是第34页，共44页四、病毒感染的快速诊断四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果数小时内出结果数小时内出结果数小时内出结果病毒颗粒病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测早期抗体检测早期抗体检测早期抗体检测（IgMgM）现在学习的是第35页，共44页（一）（一）形态学检查形态学检查电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查普通光学显微镜检查 包涵体包涵体现在学习的是第36页，共44页（二）（二）病毒成分检测病毒成分检测1 1.病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术2 2 2 2.病毒核酸检测病毒核酸检测 核酸扩增技术核酸扩增技术核酸扩增技术核酸扩增技术 核酸杂交技术核酸杂交技术核酸杂交技术核酸杂交技术 基因芯片技术基因芯片技术基因芯片技术基因芯片技术 基因测序基因测序现在学习的是第37页，共44页（三三）早期抗体检测早期抗体检测 可诊断急性感染可诊断急性感染 特异性特异性IgM抗体抗体：孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒 EBV早期抗原早期抗原早期抗原早期抗原抗体抗体抗体抗体 EAV核心抗原核心抗原抗体抗体抗体抗体 早期抗原的抗体早期抗原的抗体早期抗原的抗体早期抗原的抗体 EAVEAV衣壳抗原衣壳抗原衣壳抗原衣壳抗原抗体抗体抗体抗体现在学习的是第38页，共44页第二节第二节 病毒感染的特异性预防病毒感染的特异性预防 微生物及其代谢产物微生物及其代谢产物 生物制品生物制品 动物免疫血清动物免疫血清（biological productsbiological products）免疫细胞免疫细胞 细胞因子细胞因子 防治和诊断感染性疾病防治和诊断感染性疾病现在学习的是第39页，共44页灭活疫苗灭活疫苗（inactivated vaccine）活疫苗活疫苗活疫苗活疫苗（living vaccineliving vaccine）重组载体疫苗重组载体疫苗重组载体疫苗重组载体疫苗（recombinant carrier vaccinerecombinant carrier vaccine）亚单位疫苗亚单位疫苗（subunit vaccinesubunit vaccine）化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗重组疫苗（recombinant vaccine）核酸疫苗核酸疫苗核酸疫苗核酸疫苗（nucleic acid vaccine）一、人工主动免疫常用生物制品一、人工主动免疫常用生物制品现在学习的是第40页，共44页二、人工被动免疫常用生物制品二、人工被动免疫常用生物制品 免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白 血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂细胞免疫制剂细胞免疫制剂细胞免疫制剂 IFN-、细胞因子细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞 LAKLAK细胞细胞 现在学习的是第41页，共44页第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗 核苷类药物核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂干扰素和干扰素诱生剂 中草药中草药 基因治疗剂基因治疗剂 治疗性疫苗治疗性疫苗 抗病化学制剂抗病化学制剂抗病化学制剂抗病化学制剂反义寡核苷酸反义寡核苷酸反义寡核苷酸反义寡核苷酸干扰干扰RNA核核核核 酶酶酶酶（ribozymeribozyme）现在学习的是第42页，共44页核苷类药物作用机制 HSV/VZV 无环鸟苷无环鸟苷（NA）病毒胸苷激酶病毒胸苷激酶 NA一磷酸宿主细胞激酶 NA三磷酸 （缺乏糖环3-OH基）病毒DNA聚合酶 核酸链延伸被迫终止核酸链延伸被迫终止现在学习的是第43页，共44页感谢大家观看现在学习的是第44页，共44页