实验一培养基的配制讲稿.ppt

关于实验一培养基的配制第一页，讲稿共十八页哦一、实验目的一、实验目的1.了解植物外植体离体培养所需各种营养成了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类。分及激素种类。2.初步掌握培养基母液配制方法。初步掌握培养基母液配制方法。第二页，讲稿共十八页哦二、实验原理二、实验原理uu植物材料培养要获得成功，并正常生长，培植物材料培养要获得成功，并正常生长，培养基的成分是一个决定性因素，不同植物要养基的成分是一个决定性因素，不同植物要求不同的培养基。求不同的培养基。uu大多数植物组织培养所用的培养基由无机营大多数植物组织培养所用的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。附加物等五类物质组成。第三页，讲稿共十八页哦uu 在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。的浓缩母液，置于冰箱内保存。的浓缩母液，置于冰箱内保存。的浓缩母液，置于冰箱内保存。uu当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液稀释即可。液稀释即可。液稀释即可。液稀释即可。第四页，讲稿共十八页哦三、实验材料与器具三、实验材料与器具1、用具器材、用具器材灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、pHpH试纸。试纸。试纸。试纸。2、药品试剂、药品试剂蒸馏水、蒸馏水、蒸馏水、蒸馏水、1NHCl1NHCl、1NNaOH1NNaOH、95%95%酒精、蔗糖、琼酒精、蔗糖、琼酒精、蔗糖、琼酒精、蔗糖、琼脂、各种所需化学药品（分析纯）。脂、各种所需化学药品（分析纯）。脂、各种所需化学药品（分析纯）。脂、各种所需化学药品（分析纯）。第五页，讲稿共十八页哦四、实验步骤四、实验步骤 1、母液配制、母液配制（1）配制）配制10倍倍1 L MS大量元素母液大量元素母液NH4NO3 16.5 g KH2PO4 1.7 gKNO3 19 g CaCl22H2O 4.4 gMgSO47H2O 3.7 g第六页，讲稿共十八页哦 配制成配制成200倍倍1 L母液，依次称取母液，依次称取:KI 0.166 g Na2MoO42H2O 0.05 gH3BO3 1.24 g CuSO45H2O 0.005 gMnSO44H2O 4.46 g CoCl26H2O 0.005 gZnSO47H2O 1.72 g（2）配制）配制MS微量元素母液微量元素母液第七页，讲稿共十八页哦 配制成配制成200倍倍l L铁盐母液，依次称取铁盐母液，依次称取:EDTAEDTA二钠二钠（Na2EDTA7H2O）7.46 g FeSO47H2O 5.56 g（3）配制）配制MS铁盐母液铁盐母液第八页，讲稿共十八页哦 配制成配制成200倍倍1 L有机母液，依次称取：有机母液，依次称取：盐酸硫胺素盐酸硫胺素（VB1）0.02 g烟酸烟酸 0.1 g盐酸吡哆醇盐酸吡哆醇（VB6）0.1 g（4）配制）配制MS有机母液有机母液第九页，讲稿共十八页哦（5）配制）配制MS有机母液有机母液配制成配制成200倍倍1 L有机母液：有机母液：肌醇肌醇 20.0 g（6）配制）配制MS有机母液有机母液配制成配制成200倍倍1 L有机母液：有机母液：甘氨酸甘氨酸0.4 g第十页，讲稿共十八页哦 0.1mg/mL 的的6-BA溶溶液液：取取25mg的的6-BA，用用少少量量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250mL。0.1mg/mL NAA：取取25mg的的NAA可可溶溶于于热热水水中中或或用用少少量量95%乙乙醇醇或或少少量量1N的的NaOH溶溶解解后后，再再加加水水定定容容至至250mL。0.1mg/mL 2，4-D：取取20mg的的2，4-D溶溶于于少少量量95%乙醇中，再加水定容至乙醇中，再加水定容至200mL。（7）植物激素的配制）植物激素的配制第十一页，讲稿共十八页哦 2、培养基的配制、培养基的配制（以（以1L培养基为例）培养基为例）1 1、计量、计量、计量、计量根据配制培养基的量根据配制培养基的量根据配制培养基的量根据配制培养基的量（1L1L）和母液的浓度计算需要吸取和母液的浓度计算需要吸取和母液的浓度计算需要吸取和母液的浓度计算需要吸取母液的量，计算公式：吸取量母液的量，计算公式：吸取量母液的量，计算公式：吸取量母液的量，计算公式：吸取量 mL=mL=培养基中物质浓度培养基中物质浓度培养基中物质浓度培养基中物质浓度（mg/Lmg/L）1000mL/1000mL/母液浓度（母液浓度（母液浓度（母液浓度（mg/Lmg/L）。）。）。）。母液浓度母液浓度母液浓度母液浓度/培养基中物质浓度培养基中物质浓度培养基中物质浓度培养基中物质浓度=稀释倍数稀释倍数稀释倍数稀释倍数2 2、移液、移液、移液、移液取大烧杯（取大烧杯（取大烧杯（取大烧杯（1L1L）一只，按照计算吸取母液的量）一只，按照计算吸取母液的量）一只，按照计算吸取母液的量）一只，按照计算吸取母液的量依次吸依次吸依次吸依次吸取取取取各母液置于烧杯中备用。各母液置于烧杯中备用。各母液置于烧杯中备用。各母液置于烧杯中备用。3 3、称取、称取、称取、称取称取称取称取称取10g10g琼脂，琼脂，琼脂，琼脂，30g30g蔗糖备用。蔗糖备用。蔗糖备用。蔗糖备用。第十二页，讲稿共十八页哦4 4、融化、融化、融化、融化用搪瓷量杯量取用搪瓷量杯量取用搪瓷量杯量取用搪瓷量杯量取600600700mL700mL的蒸馏水放在电炉上，加的蒸馏水放在电炉上，加的蒸馏水放在电炉上，加的蒸馏水放在电炉上，加入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状将其取下，加入蔗糖，搅拌使之溶解。状将其取下，加入蔗糖，搅拌使之溶解。状将其取下，加入蔗糖，搅拌使之溶解。状将其取下，加入蔗糖，搅拌使之溶解。5 5、混合、混合、混合、混合将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中，充分将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中，充分将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中，充分将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中，充分混合，用蒸馏水定容到混合，用蒸馏水定容到混合，用蒸馏水定容到混合，用蒸馏水定容到1000mL1000mL。6 6、调、调、调、调pHpH用滴管吸取物质的量浓度为用滴管吸取物质的量浓度为用滴管吸取物质的量浓度为用滴管吸取物质的量浓度为1mol/L1mol/L的的的的NaOHNaOH或或或或HClHCl溶液溶液溶液溶液调调调调pHpH为为为为6.06.0。第十三页，讲稿共十八页哦编号编号编号编号6-BA6-BA（mg/lmg/l）NAANAA（mg/lmg/l）2,4-D2,4-D（mg/lmg/l）第一组第一组第一组第一组0.50.50.10.11.01.0第二组第二组第二组第二组0.50.50.50.52.02.0第三组第三组第三组第三组0.50.50.050.050 0第四组第四组第四组第四组1.01.00.10.10 0共分共分4组，每组配组，每组配750mL培养基，每瓶倒培养基，每瓶倒25-30mL，共接种，共接种28瓶左右瓶左右每瓶编号每瓶编号1（1/2/3/4）n号号分组情况分组情况第十四页，讲稿共十八页哦3、培养基的分装和灭菌、培养基的分装和灭菌l l溶化的培养基应该趁热分装。溶化的培养基应该趁热分装。溶化的培养基应该趁热分装。溶化的培养基应该趁热分装。l l分装时，将烧杯中的培养基倒入锥形瓶中，每瓶约分装时，将烧杯中的培养基倒入锥形瓶中，每瓶约分装时，将烧杯中的培养基倒入锥形瓶中，每瓶约分装时，将烧杯中的培养基倒入锥形瓶中，每瓶约25mL25mL-30mL-30mL。l l注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。l l用封口膜封口并编号。用封口膜封口并编号。用封口膜封口并编号。用封口膜封口并编号。l l灭菌：灭菌：灭菌：灭菌：121121，15-20min15-20min。第十五页，讲稿共十八页哦五、注意事项五、注意事项配制铁盐母液时，配制铁盐母液时，FeS04和和Na2EDTA应分别加应分别加热溶解后混合，热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色（约加热溶液呈金黄色（约加热20-30min），调），调pH值至值至5.5，防止，防止FeS04结晶析出。结晶析出。第十六页，讲稿共十八页哦六、作业与思考六、作业与思考1 1植物培养基为什么要分成母液分开配制。植物培养基为什么要分成母液分开配制。第十七页，讲稿共十八页哦感谢大家观看第十八页，讲稿共十八页哦