中药化学实验指导书hwmv.docx

中药化学学实验指指导书中药教学学部 重庆邮电电学院生生物信息息学院20055年022月前言中药化学学是一门门运用现现代化学学理论和和方法研研究中药药化学成成分的学学科，近近年来发发展迅速速，逐步步渗透到到中药鉴鉴定、中中药制剂剂、中药药炮制等等学科中中，在药药物的研研制、中中药资源源的开发发、药品品检验、中中药生产产过程中中有广泛泛的应用用。另一一方面，中药化学是中药的基础研究，是中药现代化工作中十分重要的组成部分。同时，中药化学是中药专业的专业课程，其基本实验技能的培养是本课程的重要组成部分，通过中药化学实验，培养学生的动手操作能力，为学生在中药鉴定、中药分析、制剂分析等专业课上打下坚实的专业基础。为此，我们根据本课程教学大纲的要求，组织编写了本实验讲义。生物信息息学院中中药学教教学部高运玲 潘正编编著二OO五五年二月月目录第一节实验注注意事项项01第二节试剂的的使用04第三节实验部部分06实验一层析练习习06实验二大黄中游游离蒽醌醌的提取取、分离离与检识识100实验三秦皮中七七叶苷、七七叶内酯酯的提取取、分离离和鉴定定13实验四芦丁的提提取和鉴鉴定15实验五葛根中黄黄酮类化化合物的的提取、分分离及鉴鉴定20实验六茴香醚的的提取分分离和检检识23实验七三七总皂皂甙的提提取和精精制25实验八薯蓣皂甙甙元的提提取分离离与鉴定定27实验九盐酸小檗檗碱的提提取、精精制及检检识300实验十掌叶防已已碱的提提取分离离及延胡胡索乙素素的制备备34 实验十一一苦参生物物碱的提提取、分分离与鉴鉴定399实验十二二中药化学学成分的的系统预预试验43附录53第一节实实验注意意事项一、教学学目的通过中中药化学学的实实验教学学，要求求学生能能够：1、掌握握化学实实验中常常用的煎煎煮法、渗渗漉法、回回流法、液液液萃萃取法等等中药提提取法的的操作技技术。2、掌握握薄层层层析、纸纸层析的的基本操操作，熟熟悉它们们在中药药化学成成分鉴定定、提取取、分离离和检识识中的应应用。3、训练练常量、半半微量成成分的分分离，精精制及检检识方法法，并了了解有关关中药成成分研究究中的文文献检索索和工具具书查阅阅的基本本方法。4、初步步形成方方法自我我设计中中药中主主要有效效成分提提取的能能力，培培养独立立分析问问题、解解决问题题的能力力。二、中药药化学实实验的特特点1、实验验周期长长。一般般一个提提取实验验需要用用去35次课课的时间间，其间间相隔数数天。因因此，在在实验过过程中，应应该注意意仪器、试试剂尤其其是提取取物的妥妥善保管管或者保保存。2、所用用溶剂和和试剂品品种多，而而且用量量较大。3、许多多有机溶溶剂易燃燃、有毒毒，或有有腐蚀性性。个别别甚至容容易发生生爆炸。4、也有有不少实实验需要要电炉加加热或者者抽气机机减压，学学生用到到的热源源和电器器较多，安安全教育育要跟上上。严防防产生中中毒、触触电、烫烫伤等意意外，谨谨防火灾灾、爆炸炸等重大大事故的的发生。三、实验验室规则则1、必须须遵守实实验室的的各项制制度，听听从教师师指导，尊重实实验室工工作人员员的职权权，实验前应认认真预习习，明确目目的、要要求，弄清操操作步骤骤、方法法和基本本原理。作作好计划划，做到心心中有数数。在未未弄清实实验目的的及每一一实验步步骤之前前，切勿开开始作任任何实验验。2、实验验时要做做到整齐齐、清洁。保保持桌面面、仪器、水水槽、地地面四洁洁。任何何固体物物质不能能投入水水槽中，废纸、废屑应应投入废废纸箱内内，废溶液液应倒入入废液缸缸内，勿倒可可燃或易易挥发性性溶媒，于水槽槽或缸内内。3、对公公用仪器器和试剂剂（如打孔孔机、显显色剂等等）要在指指定地点点使用，并保持持整洁，不能任任意挪动动。4、实验验进行时时不能擅擅自离开开，要认真真做好实实验记录录。实验验室内严严禁吸烟烟。5、实验验完毕离离开实验验室时，应打扫扫实验室室，检查水水、电，关好窗窗门。四、实验验室安全全守则在中药化化学实验验中，常使用用甲醇、乙乙醇、乙乙醚、石油油醚等易挥挥发、易易燃烧，有毒的有机溶溶剂及易易碎的玻玻璃仪器器，若操作作不慎，很容易易发生事事故，常见事事故有“火灾”、“爆炸”、“外伤”、“中毒”等，为防止止事故的的发生，必须随随时注意意以下几几点：1、实验验开始应应检查仪仪器是否否完整无无损，装置是是否正规规。回流流、蒸馏馏时，冷凝水水是否通通畅，干燥管管是否阻阻塞不通通。若在常常压下选选行蒸馏馏或回流流，仪器装装置必须须与大气气相遇，不能密密闭。（如密闭闭加热而而导致的的容器内内压力增增加，会引起起装置爆爆裂，特别是是使用明明火时，装置置中的可可燃液体体就会着着火）2、回流流或蒸馏馏低沸点点易燃液液体时，瓶内的的液重只能能装三分分之二，不能使使用明火火加热，最好使使用水浴浴或电热热套。液液内要放放几颗沸石石或素烧烧瓷片，防止过过热冲瓶瓶或暴沸沸。若在在加热后后发现未未加入沸沸石，绝不能能立即揭揭开瓶盖盖补放，而应停停止加热热，液体冷冷却后才才能加入入，加热途途中也不不得加入入活性炭炭脱色，否则也也会发生生暴沸。减减压蒸馏馏使用玻玻璃仪器器，质量要要好，最好用用圆底烧烧瓶，防止因因机械强强度不够够，引起爆爆炸。3、蒸馏馏、回流流易燃，易挥发发，有毒液液体时，仪器装装置切勿勿漏气，冷冷凝管流流出液应应用弯接接管导至至接受瓶瓶中，余气应应用橡皮皮管通往往室外或或水槽里里。4、加压压柱层析析时, 层析柱及储液液瓶机械械性能要要高、连接接处要牢牢，并注意意控制压压力，以防炸炸裂装置置。5、使用用电气设设备（如电烘烘箱、电冰冰箱、真真空泵、离心机机等）及各种种分析仪仪器时一一定要弄清电电路及操操作规程程，不懂就就问，切勿自自作主张张。实验室一一旦发生生火灾事事故时，应保持持镇静，切勿惊惊慌失措措，应立即即采取各各种相应应措施，以减少少事故损损失。首先，要立即即断绝火源（如电源源、煤油炉炉、煤气气等）,并移开开附近的的易燃物物质。少少量溶剂剂（几个mll）着火火，可任其其烧完。三三角瓶内内溶剂着火火可用石棉网网或湿布布盖熄。小小火可用用湿布或或黄沙盖盖熄。火较较大时应应根据具具体情况况采用下下列灭火火器材。泡沫灭火火器：内部分分别装有有碳酸氢氢钠溶液和和硫酸铝铝溶液，使用时时将筒颠颠倒，两种溶溶液立即即反应生生成硫酸酸氢钠、氢氧氧化铝及及大量的的二氧化化碳。灭灭火器筒筒内压力力突然增增大，大量二氧化化碳泡沫沫喷出，即可灭火。四氯化碳碳灭火器器：用以扑扑灭电器器或电器附近近之火，但不能能在狭小小和通风风不良的的实验室室中应用用，因为四四氯化碳碳在高温温时要生生成剧毒毒的光气气，此外外，四氯氯化碳和和金属钠钠接触也也要发生爆爆炸。使使用时须须连续抽抽动唧筒，四氯氯化碳即即会由喷喷咀喷出出，遇热热变为气气体，此气体体比重比比空气大大，能沉下下来把火火焰包围围住，将火火扑灭。二氧化碳碳灭火器器：是实验验室中最最常用的的一种灭灭火器，它的钢钢筋内装装有压缩的的液态二二氧化碳，使用时打开开开关，二氧化化碳气体体即会喷喷出，用以扑灭有有机物及及电器设设备的着着火使用时时应注意意，一手提提灭火器器，一手应应握在喷喷二氧化化碳嗽叭叭筒的把把手上。因因喷出的的二氧化化碳压力力骤然降降低，温度也也骤降，手若把把在嗽叭叭筒上易易被冻伤伤。无论用何何种灭火火器，皆应从从火的四四周开始始向中心心扑灭。油浴，和有机溶剂着火时绝不能用水浇，因为这样反而会使火焰蔓延开来。若衣服着着火，切勿奔奔跑，赶快脱脱下衣服服或用厚厚的外衣衣包裹致致熄。较较严重者者应躺在在地上（以免火火焰烧向向头部）用防火火毯紧紧紧包住，直至火火熄，或打开开附近的的自来水水开关用用水冲淋淋熄灭。五、急救救常识1、玻璃璃割伤玻璃割伤伤是常见见的事故故，如为一一般轻伤伤，应及时时挤出污污血，用消毒毒过的镊镊子取出出玻璃碎碎片，用蒸馏水洗涤涤伤口，涂上红红药水和和碘酒后包包扎好。如为大大伤口，应立即用绷绷带扎紧紧伤口上上部，使伤口停止出出血，急送医医院。2、火伤伤轻伤涂甘甘油或硼酸凡士士林，重伤送送医院。3、试剂剂灼伤酸液或碱碱液灼伤伤皮肤时，伤处处首先用大大量水冲冲洗。若为酸酸液灼伤伤，再用5%碳酸氢钠钠溶液洗洗涤；若为碱碱液灼伤伤，再用1%醋酸洗洗，最后用用水洗，再涂上上油膏凡士士林。酸液或碱碱液溅入入眼睛中中时，抹去溅溅在眼睛睛外面的的酸液或或碱液，立即用用大量水水冲洗。若若为酸液液，再用1%碳酸氢氢钠溶液冲洗；若为碱碱液，再再用1%硼酸溶液液冲洗，最后用用水冲洗，滴入蓖麻油。酸液或碱碱液洒在在衣服上，先用用水冲洗洗。若为为酸液再再用稀氨水洗。若若为碱液液，再用用1%醋酸溶液液洗涤，然后用氢氢氧化铵铵中和多多余的醋酸酸，最后用用水洗涤涤。酸液洒在在地板上上，先撒石灰灰粉，再再用水冲冲洗。上述各种种急救法法，仅为暂暂时减轻轻疼痛的的措施。若若伤势过过重，在急救救之后应应速送医院。第二节试试剂的使使用化学试剂剂分为无无机化学学试剂和和有机化化学试剂剂两大类。根根据用途途不同又又分通用用试剂和和专用试试剂。我我国生产产的有机机化学试试剂已有有百万余余种。无机化化学试剂剂有数十十万种，并且正正与日俱增。我我国关于于试剂的的标准有有国家标标准（GB），化学学工业部部标准（HG）,化学工工业部暂暂行标准准（HGBB）以及地地方企业业标准和和厂订标标准。根据我们们国家的的标准，按试剂剂所含杂杂质的多多少，将试试剂分成成优级纯纯、分析析纯、化化学纯、实实验试剂剂四级。优优级纯杂杂质含量量最少，又称保保证试剂剂（符号 GGR）为一级级品，适用于于精密的的分析工工作和科科研工作作。分析析纯的杂杂质比优优级纯稍稍多，又称分分析试剂剂（符号 AAR）为二级级品，适用一一般的分分析工作作、分离离鉴定工工作和科科研工作作。化学学纯（符号 CCP）杂质较较多，为三级级品，适用一般的提提取、分分离工作作及学生生实验的的一般工工作。实实验试剂剂（符号 LLR）杂质多多，为四级级品，用作粗粗提工作作和实验验中的辅辅助试剂剂。除这这四个等等级之外外，对于于专用试试剂还有有光谱纯纯试剂，基准试试剂、色色谱纯试试剂等。光光谱试剂剂（符号 SSP）的杂质质的含量量用光谱谱法已测测不出或或者杂质质的含量量低于某某一限度度，这种试试剂主要要用来作作为光谱谱分析中中的标准准物质。基基准试剂剂的纯度度相当于于或高于于保证试试剂，用来配配制标准准溶液，作为容容量分析析中基准准物。色谱纯纯试剂用用来作为为色谱分祈中中展开剂剂。按照我我国化工工部标准准规定，我国优优级纯试试剂用绿绿色标签签作为标标记；分析纯纯用红色色标签；化学纯纯用蓝色色标签。在中药化化学提取取、分离离、鉴定定实验中中，要注意意选择纯纯度相当当的试剂剂，能用用低纯度度的试剂剂，绝不不要用高高纯度试试剂，高高纯度试试剂的制制备是复复杂的，它它们的价价格昂贵贵，要克克服任何何情况下下都采用用高纯度度试剂的的不良习习惯。另另外如用用高纯度度试剂，实实验用的的水、操操作器皿皿也要配配合。若若选用 GR 级试剂剂要用重重蒸溜水水，所用用器皿不不能有任任何杂质质自器皿皿上溶解解到溶液液中。在使用化化学试剂剂时除了了解它的的纯度外外，必须须了解它它的物理理性能，试试剂的物物理性能能主要指指熔点、沸沸点、比比重、折折光率、溶溶解度、易易燃性、毒毒性及外外形等数数据。这这些特性性一般在在试剂的的标签上上都有注注明。使使用试剂剂的注意意事项如如下。1、使用用易燃、易易爆、有有毒的试试剂时，要要特别注注意安全全，每次次按需要要量从原原包装容容器中取取出（固固体试剂剂）或倾倾出（液液体试剂剂）。试试剂称量量必须在在清洁而而干燥的的器皿内内进行。所所取的试试剂若有有剩余，不不得倒回回原包装装容器内内，可放放适当带带盖的小小容器中中，并用用标签注注明。2、取固固体试剂剂应使用用玻璃、瓷瓷或铂制制药铲，严严禁用刀刀子或钢钢铲取强强碱性或或酸性试试剂。取取液体试试剂用清清洁干燥燥的移液液管，需需要长时时期使用用若干液液体试剂剂，最好好每种试试剂有专专用移液液管。取取有毒液液体或浓浓酸、浓浓碱时，绝绝不许用用移液管管以口吸吸的方式式取出，应应利用真真空吸取取或带有有橡皮气气球的移移液管吸吸取或利利用量筒筒取。在在开启试试剂的瓶瓶塞之后后，应将将塞子放放于清洁洁的地方方或倒放放。3、使使用有毒毒物质、易易挥发的的有毒液液体，以以及易挥挥发的强强酸、氨氨，应在在排气通通风橱内内进行，应应戴有护护目镜及及橡皮手手套。存存放这类类试剂时时，应远远离火源源，并封封闭于铁铁柜中。4、易吸吸水的试试剂，不不得开口口存放，取取出试剂剂后，应应立即盖盖好塞子子，必要要时用石石蜡熔封封。见光光发生变变化的试试剂应放放棕色瓶瓶内，置置于暗处处。在空空气中能能自燃的的试剂应应保存在在盛有适适当液体体的密闭闭器中（如如金属钠钠、钾放放煤油中中，黄磷磷放水中中）。第三节实实验部分分实验一层层析练习习层析法又又称色谱谱法，色层法或层离法。它它是近几几十年迅迅速发展展起来的的一种分分离方法法，具有有设备简简单、分离效效果好、快快速等优优点，在许多多领域中中都得到到广泛应应用。我我们在对对中草药药进行分分析研究究时，层层析法越越来越成成为必不不可少的的、基本本的研究究手段，因此我我们必须须熟练地地掌握层层析法。层析法按按操作形形式的不不同可分分为：薄层层层析（TLCC），纸层析（PC）和柱层析析（CCC）。一、常用用薄层板板的制备备（一）实实验原理理羧甲基纤纤维素钠钠( CMMCNa)和石膏膏(Gyppsumm,简称称 G )均为制制备层析析板常用用之粘合合剂，前者为为一大分分子有机机化合物物，可溶于于水，借助其其分子间间的作用用力而起起到粘结结作用，使吸附附剂在一一玻璃片片上成一一坚固的的薄层。后后者则是是利用熟熟石膏吸吸水后凝凝固的性性质而使使吸附剂剂粘结为为一均匀匀、结实实的薄层层。（二）实实验内容容1、硅胶胶羧甲甲基纤维维素钠（CCMC-Na）粘合合板的制制备：称取 CCMCNa 0.8 克克,溶于 1100 毫升蒸蒸馏水中中,加热并并充分搅搅拌至全全溶。取取上述溶溶液 337 毫毫升置研研钵中,加入薄薄层层析析用硅胶胶（2000 目以以上）115 克克，研磨成成匀浆，用药勺勺取一定定量倒在在薄板上上并涂布布均匀，然后轻轻轻振动动，使薄层层面平整整均匀，平放，待待阴干后后，于烘箱箱中 1110烘半小小时，进行活活化，活化后后的薄层层置干燥燥器中备备用。2、硅胶胶 G 粘合板板的制备备：称取硅硅胶G5 克，加蒸馏馏水 115 毫毫升，研磨均均匀后，取三分分之一倾倾注在予予先洗净净晾干的的玻璃板板上，迅速振振动玻璃璃板，使吸附附剂薄层层均匀平平整，阴干后后同上活活化备用用。注意意：操作要要迅速，以免因因石膏吸吸水凝固固而影响响薄层的的均匀性性。3、硅胶胶的活度度测定：3.1硅硅胶活度度的测定定：一般般选用三三种染料料以薄层层层析法法进行。染染料试样样配方：二甲基基黄、苏苏丹红、靛靛酚蓝各各取400mg混溶溶于1000mll苯中即即可。操作：将上述述混合液液点于待待测的硅硅胶G或或硅胶CCMCN薄薄层上，以以苯为展展开剂，展展开100cm（约约20mminss），三三种染料料应明显显分离。如如果靛酚酚蓝的色色斑接近近于起始始线，二二甲基黄黄的色斑斑位于薄薄层的中中间，苏苏丹红的的色斑在在靛酚蓝蓝与二甲甲基黄的的色斑之之间，则则可认为为薄层板板的活性性符合通通常使用用的薄层层要求。3.2 硅胶活活度的毛毛细管测测定法：操作：取1.0×75cmm毛细管管一支，将将毛细管管一端灼灼烧加热热封闭。取取1个用用于试剂剂瓶的滴滴帽，使使吸附剂剂进入毛毛细管内内，除去去滴帽即即可，（或或采用测测熔点法法加入吸吸附剂）。再再用吸管管吸1滴滴苯在毛毛细管开开口端（其其目的是是为了防防止吸附附剂从毛毛细管中中掉下），切切去毛细细管的封封闭端，从从已被苯苯浸润的的一端蘸蘸取微量量的0.5%的的染料苯苯溶液。然然后将毛毛细管放放入盛有有几毫升升苯的容容器中，展展开，计计算R值，从从下表中中查出吸吸附剂的的活度级级别。硅胶活度度与Rff值的关关系吸附剂含水量%Rf值级别硅胶00.155I30.22260.33390.444120.555I150.655II二、纸层层析练习习（）实实验原理理纸层祈又又叫分配配纸层析析（PCC），是是利用滤滤纸本身身吸附的的水分作作固定相相，所选选用的展展开剂作作为流动动相，根据不不同极性性化合物物在该两两相中的的分配系系数不同同，随着展展开剂的的不断移移动，而将各各化合物物分离开开。（二）实实验内容容1、点点样：取 155×3 厘米米中速新新华滤纸纸一张，在距一一端 22 厘米米处用铅铅笔轻轻轻划一横横线，作为起起始线，在在间隔 1 厘厘米处分分别点上上以下样样品： 1%D葡葡萄糖水水液 1%L鼠鼠李糖水水液。展开剂：正丁醇醇醋酸水（4:1:55，上层层）显色剂：苯胺邻苯二二甲酸试试剂喷后后于10051100烤100分钟，糖糖显深浅浅不同的的棕色斑斑点。支持剂：新华层层析滤纸纸（中速速,200×7cm）2、样品：板板蓝根注注射液或或10%的板蓝蓝根配成成5%乙乙醇溶液液对照品：精氨酸酸、亮氨氨酸、脯脯氨酸11%的水水溶液展开剂：正丁醇醇：冰醋醋酸：水水（4：1：11或者44：1：5的上上层液）显色剂：0.22%茚三三酮乙醇醇溶液操作：取新华华层析滤滤纸条，在在距底边边233cm处用用铅笔画画一条直直线。并并做四个个等分点点分别用用毛细管管点上适适量样品品或对照照品溶液液，待溶溶剂挥干干后（可可用电吹吹风吹干干），将将滤纸用用细棉线线悬吊在在盛有展展开剂的的层析缸缸中，使使滤纸下下端与展展开剂接接触，上上行法展展开，至至展开剂剂前沿离离起始线线15ccm左右右时取出出，并用用铅笔画画下前沿沿位置。热热风吹去去其上展展开剂后后，喷显显色剂，再再加热至至1000左右显显色。如如需长期期保存，此此时可再再喷2%硫酸镍镍水溶液液固色。计计算精氨氨酸、脯脯氨酸和和亮氨酸酸的R值。三、硅胶胶柱层析析练习（）实实验原理理柱层析是是中草药药有效成成分研究究中的一一种常用用分离方方法。许许多结构构相似而而不能用用一般的的萃取，重结晶晶等方法法分离的的中草药药成分，通过选选择一定定的吸附附剂和洗洗脱剂，采用柱柱层析法法均可得得到满意意的分离离效果。常常用的吸吸附剂有有氧化铝铝、硅胶胶、聚酰酰胺、活活性炭、淀淀粉硅藻藻土等，根据不不同的化化合物而而选用不不同的吸吸附剂。本本实验利利用叶色色素在硅硅胶柱上上有不同同的保留留值，故故其在柱柱上的迁迁移速率率不同，选用层析用硅胶（100-140目）作吸附剂，利用干柱层析，对叶绿素等色素类成分进行分离，效果良好。叶色素中中含有-胡萝萝卜素、脱脱镁叶绿绿色素、叶叶黄素、叶叶绿素AA、叶绿绿素B等等化合物物。利用用硅胶干干柱，选用适适宜的洗洗脱剂，可使各各组分分分次流出出。通过过对各流流出组分分进行层层析，合并并，回收溶溶剂，而得到到不同的的叶色素素部分。（二）实实验内容容1、装装置与条条件：层析柱：玻璃柱柱样品：植植物叶吸附剂：层析硅硅胶 1100-1400目洗脱剂：环己烷烷-乙酸酸乙酯检识：硅硅胶 GG-CMMC 板板，展开剂剂同洗脱脱剂。显色：紫紫外光下下观察2、装柱柱：常用装装柱方法法有两种种，即干法法和湿法法，可根据据不同情情况选用用。本实实验采用用干法装装柱。（1）柱柱的选择择和予处处理：根据被被分离样样品的量量及吸附附剂的种种类，选取一一定大小小的层析析柱，用常水水、去污污粉、常常水、蒸蒸馏水依依次洗刷刷干净，使管壁壁不挂水水珠，晾干备备用。检检查磨口口号码是是否对号号，而后在在转动活活塞处涂涂少许凡凡士林，底部塞塞入松紧紧适宜的的棉花，顶部装装上 1100毫毫升分液液漏斗。（2）装装柱：称取 ll001400目层析析硅胶220克，通过玻玻璃漏斗斗倒入柱柱中，用两个个橡皮塞塞轻轻对对称敲击击层析柱柱或将下下口接抽抽气泵抽抽气，使吸附附剂实而而匀，上部平平整。（3）加加样：称取植物物叶 55克，溶于 110毫升升石油醚醚或乙酸酸乙酯中中，碾磨磨至色素素溶解。加加入柱的的上端，压上少量量脱脂棉棉。将装装有流脱脱剂的分分液漏斗斗通过橡橡皮塞固固定在柱柱的顶端端，柱的出出口处放放一三角角烧瓶进进行收集集。3、洗洗脱与收收集：先打开开柱的下下端活塞塞，再开启启分液漏漏斗活塞塞，使洗脱脱剂流入入柱中，向下浸浸润。在在整个浸浸润和洗洗脱过程程中，栓顶液液面必须须高于吸吸附剂顶顶端 11 厘米米以上。从从开始洗洗脱到洗洗脱液流流出，约需 00.5小小时。用试管收集集，每份 110 毫毫升，共收集集 155 份，标明序序号，薄层检检识。流流速控制制 12 毫升升分。4、检识识与合并并：在 100×10 厘米硅硅胶 GG 板的的端 1.5厘米米处用铅铅笔轻轻轻划一横横线，每间隔隔 1 厘米处处作一标标记，下面标标明序号号。将收收集的各各流分和和标准品品按序在在薄板上上点祥。若若洗脱液液浓度太太稀，可反复复点样（每次次点样后后必须使使溶剂挥挥干，才能再再重复点点）。直至能能在紫外外灯下观观察到明明显荧光光斑点即即可。然然后放入入盛有展展开剂的的标本缸缸内进行行展开至至一定距距离，将其取取出，挥干溶溶剂，首先在在紫外灯灯下观察察荧光，标出荧荧光位置置与颜色色，记录结结果，合并相相同流分分。四、氧化化铝柱层层析练习习1、装置置与条件件：层析柱：玻璃柱柱样品：00.5MM FeeCl33、CuuCl22、Coo(NOO3)2混合液液0.55ml吸附剂：层析用用中性氧氧化铝洗脱剂：水2、装柱柱：本实验验采用干干法装柱柱。（1）柱柱的选择择和予处处理：（2）装装柱：（3）加加样：3、洗洗脱与收收集： 4、结结果：FFe3+棕棕色层、CCu2+浅浅蓝色层层、Coo2+淡紫色色层实验二 大黄中中游离蒽蒽醌的提提取、分分离与检检识大黄为泻泻下、健健胃、清清热、解解毒的常常用中药药，品种繁繁多，质优者者为寥科科植物掌掌叶大黄黄（Rheeum PallmattumLL.），药药用大黄黄（R.offfIccinaale Beiill）和唐古古特大黄黄（R.tanngutticuum MMaxiim.eex BBalff）的根根及根茎茎。大黄中含含有多种种羟基蒽蒽醌类化化合物，它们在在植物中中主要以以甙的形形式存在在，总含量量为 22 5%，大大黄中主主要的羟羟基蒽醌醌类化合合物有大大黄酚(1)、大大黄素(2)、大大黄酸(3)、大大黄素甲甲醚(44)、芦芦荟大黄黄素(55)及其甙甙类。大黄酚（Chrrysoophaanoll）为金黄黄色片状状结晶（乙醇或或苯），mp.1966-1997 ，能升华华，可溶于于丙酮、乙乙醚、氯氯仿、甲甲醇、乙醇、热热苯和氢氢氧化钠钠水溶液液，微溶于于石油醚醚、乙醚醚，不溶溶于水、碳碳酸钠和和碳酸氢氢钠水溶溶液。大黄素（Emoodinn）为橙黄黄色针状状结晶（乙乙醇或冰冰醋酸），mpp.25562577，能升升华，易易溶于稀稀氨水、碳碳酸钠和和氢氧化化钠水溶溶液，可溶于于乙醇、丙丙酮，在乙醚醚、氯仿仿、苯、四四氯化碳碳、二硫硫化碳等等溶剂中中溶解度度较小，几乎不不溶于水水。大黄酸（Rheeinee）为黄色色针状结结晶（升华法法），mpp.32213222，3330分解，易溶于于碱水液液、吡啶啶，微溶溶于乙醇醇、丙酮酮、乙醚醚、氯仿仿、苯、石石油醚。几几乎不溶溶于水。大黄素甲甲醚（Phyysciion）砖红色色针状结结晶（苯），mpp.2003-2207 ，能升华华，溶解性性质与大大黄酚相相似。芦荟大黄黄素（Aioeeemoodinn）为橙黄黄色针状状结晶（甲苯），mpp.2223-2224 ，能升华华，可溶于于乙醚、热热乙醇、苯、稀稀氨水、碳碳酸钠和和氢氧化化钠水溶溶液。羟基蒽醌醌甙有大大黄素甲甲醚葡萄萄糖甙，大黄素素葡萄甙甙，大黄酸酸葡萄糖糖甙, 大黄酚酚葡萄糖糖甙，大大黄素-1-O-B-DD-葡萄糖糖甙，芦荟大大黄素-O-BB-D-葡萄糖糖甙。一、实验验目的1. 掌掌握PH 梯度度萃取法法分离酸酸性成分分的原理理及操作作技术。2.掌握握羟基蒽蒽醌类成成分的主主要检识识反应及及薄层层层析检识识方法。3. 学学习从大大黄中提提取分离离羟基蒽蒽醌类成成分的方方法。二、实验验原理根据大黄黄中羟基基蒽醌类类成分可可溶于热热乙醇中中，故用乙乙醇为溶溶剂加热热回流提提取总蒽蒽醌类成成分，再利用用羟基蒽蒽醌类化化合物酸酸性强弱弱不同，采用 ppH 梯梯度萃取取法分离离，可得到到各单一一成分。三、实验验内容1. 乙乙醇总提提取物的的制备取大黄粗粗粉 1150gg, 置置于 110000ml 的园底底烧瓶中中，加乙醇醇回流提提取三次次，第一次次加 995% 乙醇 5500m1,回流一一小时，第二次次加 995% 乙醇 3300 ml，加流半半小时，第三次次加 995% 乙醇2550 mml，回流半半小时，趁热过过滤，合并三三次乙醇醇提取液液，放置后后，如有沉沉淀可再再过滤一一次；滤滤液减压压回收乙乙醇至糖糖浆状，即为乙乙醇总提提取物；趁热转转移至 2500ml 的三角角烧瓶中中备用。2. 总总游离蒽蒽醌的提提取在盛有乙乙醇总提提取物的的三角烧烧瓶中，加入乙乙醚 1100mml，冷浸半半小时，不断振振摇，然后静静置，将上层层乙醚液液倾出，置另一一500ml 三角烧烧瓶中，瓶内糖糖浆状物物再同法法提取 455 次，每次加加乙醚 50mml 及及丙酮22ml, 至乙乙自醚液液颜色较较浅为止止，合并乙乙醚速提提取液（注意把把水层分分离干净净），即为为含总游游离蒽醌醌的部分分，剩余物物中则含含有蒽醌醌甙类成成分。3. 游游离蒽醌醌的分离离(1) 强酸性性部分的的分离：将上述乙乙醚提取取液转移移至 5500mml 的的分液漏漏斗中，加5%碳酸酸氢钠水水溶液（先用 ppH 试试纸测定定其 ppH 值值）萃取三三次，每次加加5%碳酸酸氢钠水水溶液440m11（注意萃萃取时放放置分层层的时间间应稍长长些，以免萃萃取效果果不好）。合并并三次碳碳酸氢钠钠萃取液液，在搅拌拌下小心心滴加浓浓盐酸调调至pHH2（观察萃萃取，酸化时时溶液的的颜色变变化），放置置沉淀，过滤，沉淀用用水洗至至近中性性，干燥，称重_gg，即为强强酸性部部分，主要含含大黄酸酸，留作鉴鉴定用。(2) 中等酸酸性部分分的分离离：将上述述经碳酸酸氢钠萃取过过的乙醚醚液用 55% 碳碳酸钠水溶液液（先用 ppH 试试纸测定定其 ppH 值值）萃取 556 次，每次加加 5% 碳酸酸钠水溶液液 400 mll，至萃取取碱液层层颜色较较浅为止止。合并碳碳酸钠萃取液液，在搅拌拌下小心心滴加浓浓盐酸调调至 ppH2，放置沉沉淀，过滤，沉淀用用水洗至至近中性性，干燥，称重_gg，即为中中等酸性性部分，主要含含大黄素素，留作鉴鉴定用。(3) 弱酸性性部分的的分离：将上述述经碳酸酸钠萃取取过的乙乙醚液用用 2% 氢氧氧化钠水水溶液（先用 ppH试纸测测定其 pH 值）萃取 334 次，每次加加 2% 氢氧氧化钠水水溶液 20mm1. 合并氢氢氧化钠钠萃取液液，在搅拌拌下小心心滴加浓浓盐酸调调至 ppH2, 放置置沉淀，过滤，沉淀用用水洗至至近中性性，干燥，称重_g，即为弱弱酸性部部分，主要含含大黄酚酚和大黄黄素甲醚醚，留作鉴鉴定用。4.蒽醌醌类成分分的检识识(1) 碱液试试验：取上述述分离所所得游离离蒽醌类类化合物物结晶各各 5mmg 置置于小试试管中，加 955% 乙乙醇1mml 溶溶解，再加 110% 氢氧化化钠水溶溶液23滴，观察溶溶液颜色色变化。凡凡具有邻邻、对位位酚羟基基的蒽醌醌类化合合物应呈呈紫-蓝色，其它羟羟基蒽醌醌类化合合物多为为红色。(2) 醋酸镁镁试验：取上述述分离所所得游离离蒽醌类类化合物物结晶各各 5mmg 置置于小试试管中，加 955% 乙乙醇 11m1 溶解，再满加加0.55% 醋醋酸镁乙乙醇液 233 滴，观察溶溶液颜色色变化。凡凡具有-羟基的的蒽醌类类化合物物应呈橙橙红色，具有间间位二羟羟基的蒽蒽醌昆类类化合物物应呈橙橙-红色，具有对对位二羟羟基的蒽蒽醌类化化合物应应呈紫-红紫色色，具有邻邻位二羟羟基的蒽蒽醌类化化合物应应呈蓝紫紫色。5. 蒽蒽醌类成成分的薄薄层层检检识吸附剂：硅胶 CCMC-Na 硬板，于 1110 烘半小小时。样品：aa. 强强酸性部部分结晶晶丙酮溶溶液b. 大大黄酸标标准品丙丙酮溶液液c. 中中等酸性性部分结结晶丙酮酮溶液d. 大大黄素标标准品丙丙酮溶液液e. 弱弱酸性部部分结晶晶丙酮溶溶液f.大黄黄酚及大大黄素丙丙酮溶液液展开剂：(1) 苯-乙酸乙乙酯（88：2） (22) 苯-甲醇（88：1）(3) 石油醚醚（3060）-甲酸酸乙酯-甲酸（115：55：1）显色剂：先在日日光和紫紫外光灯灯（3655nm）下检视视, 为橙橙黄色荧荧光斑点点，再置置于氨气气中熏后后日光下下检视，斑点变变为红色色。实验三 秦皮皮中七叶叶苷、七七叶内酯酯的提取取、分离离和鉴定定秦皮为本本樨科白白蜡树属属植物白白蜡树（Fraxinus Chinensis Poxb）或苦沥白蜡树（F.rhynchophylla Hance）或小叶白蜡树（F.bungeana DC）的树皮,味苦，性微寒。具有清热、燥湿、收涩作用。主治温热痢疾、目赤肿瘤等症。秦皮中含含有多种种内酯类类成分及及皂苷、鞣鞣质等，其其中主要要有七叶叶苷、七七叶内酯酯、秦皮皮苷及秦秦皮素等等。多有有抗菌消消炎的生生理活性性，七叶叶内酯对对细菌性性痢疾、急急性肠炎炎有较好好治疗效效果，兼兼有退热热作用，毒毒付作用用小，几几无苦味味。适于于小儿服服用。1七叶叶苷（eescuulinn），又又叫马粟粟树皮苷苷：白色色粉末状状结晶，mp205206。易溶于热水（1：15），可溶于乙醇（1：24），微溶于冷水（1：610），难溶于乙酸乙酯，不溶于乙醚、氯仿。在稀酸中可水解。水溶液中有蓝色荧光。2七叶叶内酯（esculetin）：黄色针状结晶，mp276。易溶于沸乙醇及氢氧化钠溶液，可溶于乙酸乙酯，稍溶于沸水，几不溶于乙醚、氯仿。3秦皮皮苷（ffraxxin）：mp2205。4秦皮皮素（ffraxxetiin）：mp22272288。 一、实验验原理七叶苷、七七叶内酯酯均能溶溶于沸乙乙醇，可可用沸乙乙醇将二二者提取取出来，再再利用二二者在乙乙酸乙酯酯中的溶溶解性不不同而分分离之。二、实验验内容（一）提提取：取取秦皮粗粗粉1550g于于圆底烧烧瓶中，加加4000ml乙乙醇回流流2次，得得乙醇提提取液，减减压回收收溶剂至至浸膏状状，即得得总提取取物。（二）分分离：在在上述浸浸膏中加加40mml水加加热溶之之。移于于分液漏漏斗中，以以等体积积氯仿萃萃取二次次，将氯氯仿萃取取过的水水层蒸去去残留氯氯仿后加加等积乙乙酸乙酯酯萃取二二次，合合并乙酸酸乙酯液液，以无无水硫酸酸钠脱水水，减压压回收溶溶剂至干干，残留留物溶于于温热甲甲醇中，浓浓缩至适适量，放放置析晶晶，即有有黄色针针状结晶晶析出。滤滤出结晶晶。甲醇醇、水反反复重结结晶，即即得七叶叶内酯，称称重_g，产产率_。将乙酸乙乙酯萃取取过的水水层浓缩缩至适量量，放置置析晶，即即有微黄黄色晶体体析出。滤滤出结晶晶。以甲甲醇，水水反复重重结晶，即即得七叶叶苷,称称重_g，产产率_。（三）鉴鉴定：1化学学检识：取七叶叶苷、七七叶内酯酯各少许许分别置置试管中中，加乙乙醇1mml溶解解。加11%FeeCl33溶液23滴，显显暗绿色色，再滴滴加浓氨氨水3滴，加加水6mml，日日光下观观察显深深红色。2薄层层鉴定：吸附剂：硅胶GG样品：七七叶苷、七七叶内酯酯标准品品及自制制七叶苷苷七叶内内酯的醇醇溶液。展开剂：甲醇甲酸乙乙酯甲苯（11：4：5）显色：11）UV2554灯下下观察，七七叶苷为为灰色荧荧光，七七叶内酯酯为灰褐褐色。2）以重重氮化对对硝基苯苯胺喷雾雾显色，七七叶苷和和七叶内内酯均呈呈玛瑙色色。结果：七七叶苷RRf=00. 004，七七叶内酯酯Rf=0.228实验四 芦丁丁的提取取和鉴定定芦丁(RRutiin)亦称芸芸香甙(Ruutissudee)，广泛存存在于植植物界中中。现已发发现含芦芦丁的植植物约有有70余种种，如烟叶叶、槐花花米、荞荞麦叶、蒲蒲公英中中均含有有大量的芦芦丁。尤以槐槐花米和和荞麦叶中中含量最最高，可作为为提取芦芦丁的原原料，使用最最多的是是槐花米米。槐花米为为豆科植植物槐(Sopphorra jjapoonicca LL。)的的花蕾，所含含主要成成分为芦芦丁，含量可可达122%16%，其次含含有槲皮素、三萜皂甙、槐花花米甲素素、乙素素、丙素素等。芦丁具有维维生素PP样作用用，可降低低毛细血血管前壁壁的脆性性和调节节渗透性性。临床上上用于毛毛细血管管脆性引引起的出出血症，并常作作高血压压症的辅辅助治疗疗药。槐花米中中主要化化学成分分的结构构及性质质：1. 芦丁(RRutiin)淡黄色细细小针状结结晶，mp.17441788(含三分分子结晶晶)，1888(无水物物)。溶解度：水：1:1000(冷)，1:2200(热)甲醇：11:1