环境微生物实验指导内容-生命科学学院本科基础实验教学中心desk.docx

第一部分分基础实实验实验一显显微镜的的基本构构造、使使用和保保养一、目的的要求1.熟悉悉普通光光学显微微镜的构构造及各各部分的的功能。2.学习习并掌握握油镜的的原理和和使用方方法。二、显微微镜的基基本构造造显微镜是是由机械械装置和和光学系系统两大大部分组组成。1机械械装置镜座(bbasee)和镜镜臂(aarm)镜座位位于显微微镜底部部,呈马马蹄形，它它支持全全镜。镜镜臂有固固定式和和活动式式两种，活活动式的的镜臂可可改变角角度。镜镜臂支持持镜筒。镜筒(bbodyy tuube)是由金金属制成成的圆筒筒，上接接目镜，下下接转换换器。镜镜筒有单单筒和双双筒两种种，单筒筒又可分分为直立立式和后后倾式两两种。而而双筒则则都是倾倾斜式的的，倾斜斜式镜筒筒倾斜445°。双筒筒中的一一个目镜镜有屈光光度调节节装置，以以备在两两眼视力力不同的的情况下下调节使使用。转换器(nossepiiecee)为两两个金属属碟所合合成的一一个转盘盘，其上上装34个物物镜,可可使每个个物镜通通过镜筒筒与目镜镜构成一一个放大大系统。载物台(staage)又称镜镜台，为为方形或或圆形的的盘，用用以载放放被检物物体，中中心有一一个通光光孔。在在载物台台上有的的装有两两个金属属压夹称称标本夹夹，用以以固定标标本；有有的装有有标本推推动器，将将标本固固定后，能能向前后后左右推推动。有有的推动动器上还还有刻度度，能确确定标本本的位置置，便于于找到变变换的视视野。调焦装置置 是是调节物物镜和标标本间距距离的机机件，有有粗动螺螺旋（ccoarrse adjjusttmennt）即即粗调节节器和微微动螺旋旋（fiine adjjusttmennt）即即细调节节器，利利用它们们使镜筒筒或镜台台上下移移动，当当物体在在物镜和和目镜焦焦点上时时，则得得到清晰晰的图像像。2光学学系统物镜（oobjeectiive）物物镜安装装在镜筒筒下端的的转换器器上，因因接近被被观察的的物体，故故又称接接物镜。其其作用是是将物体体作第一一次放大大，是决决定成像像质量和和分辨能能力的重重要部件件。物镜镜上通常常标有数数值孔径径、放大大倍数、镜镜筒长度度、焦距距等主要要参数。如如：NAA 0.30；10××；1660/00.177；166。其其中“NA 0.330”表示数数值孔径径（nuumerricaalaaperrturre,简简写为NNA），“10×”表示放大倍数，“160/0.17”分别表示镜筒长度和所需盖玻片厚度（），“16”表示焦距。目镜（ccoullar lenns）装装于镜筒筒上端，由由两块透透镜组成成。目镜镜把物镜镜造成的的像再次次放大，不不增加分分辨力，上上面一般般标有77×、100×、155×等放大大倍数，可可根据需需要选用用。一般般可按与与物镜放放大倍数数的乘积积为物镜镜数值孔孔径的55007000倍，最最大也不不能超过过10000倍的的选择。目目镜的放放大倍数数过大，反反而影响响观察效效果。聚光器（cconddensser）光光源射出出的光线线通过聚聚光器汇汇聚成光光锥照射射标本，增增强明度度和造成成适宜的的光锥角角度，提提高物镜镜的分辨辨力。聚聚光器由由聚光镜镜和虹彩彩光圈（iiriss diiaphhraggm）组组成，聚聚光镜由由透镜组组成。虹虹彩光圈圈由簿金金属片组组成，中中心形成成圆孔，推推动把手手可随意意调整透透进光的的强弱。调调节聚光光镜的高高度和虹虹彩光圈圈的大小小，可得得到适当当的光照照和清晰晰的图像像。光源（llighht ssourrce）较较新式的的显微镜镜其光源源通常是是安装在在显微镜镜的镜座座内，通通过按扭扭开关来来控制；老式的的显微镜镜大多是是采用附附着在镜镜臂上的的反光镜镜，反光光镜是一一个两面面镜子，一一面是平平面，另另一面是是凹面。在在使用低低倍和高高倍镜观观察时，用用平面反反光镜；使用油油镜或光光线弱时时可用凹凹面反光光镜。滤光片（ffiltter）可可见光是是各种颜颜色的光光组成的的，不同同颜色的的光线波波长不同同。如只只需某一一波长的的光线时时，就要要用滤光光片。选选用适当当的滤光光片，可可以提高高分辨力力，增加加影像的的反差和和清晰度度。滤光光片有紫紫、青、蓝蓝、绿、黄黄、橙、红红等各种种颜色的的，分别别透过不不同波长长的可见见光，可可根据标标本本身身的颜色色，在聚聚光器下下加相应应的滤光光片。三、器材材显微镜、擦擦镜纸、香香柏油、二二甲苯、染染色玻片片标本四、显微微镜的使使用 (1)安放显显微镜打开镜镜箱，右右手紧握握镜臂，左左手平托托镜座，轻轻放桌上上，距离离桌子边边缘几厘厘米处，使使目镜对对着观察察者。（2）检检查检检查各部部件是否否完好，镜镜身、镜镜头必须须清洁。（3）对对光配配置内置置式电光光源的显显微镜可可直接打打开电源源开关，并并调节光光量，使使视野内内的亮度度达到明明暗适宜宜，同时时打开光光圈。旧旧式显微微镜应首首先将虹虹彩光圈圈的孔径径调至最最大，将将聚光器器升至最最高点，再再将低倍倍镜对准准镜台孔孔，镜头头离载物物台约11。这这时，把把反光镜镜转向光光源，直直到视野野中的光光线既明明亮又均均匀时为为止。在在镜检全全过程中中，根据据所需光光线的强强弱，还还可通过过扩大或或缩小光光圈、升升降聚光光器加以以调节。（4）调调焦光光线对好好后，将将玻片标标本放在在镜台上上，有盖盖玻片的的一面朝朝上，被被检物体体对准镜镜台孔正正中，用用标本移移动器上上的压片片夹卡紧紧，然后后调焦。转转动粗调调焦螺旋旋调节镜镜台与物物镜间的的距离，从从侧面注注视，以以二者间间距离55为度度。然后后自目镜镜观察，慢慢慢转动动粗调焦焦螺旋，同同时移动动标本移移动器，直直到基本本看清标标本物像像。（5）低低倍镜观观察用用粗调焦焦螺旋调调焦后，再再轻轻转转动细调调焦螺旋旋，以便便得到清清晰的物物像。如如果观察察的目标标不在视视野中央央，可调调节标本本移动器器，使之之恰好位位于视野野中央。若若光线不不适，可可拨动虹虹彩光圈圈的操纵纵杆，调调节光线线至适宜宜。（6）高高倍镜观观察在在低倍镜镜下将观观察的标标本部分分移至视视野中央央，再转转动镜头头转换器器，将高高倍物镜镜转至工工作位置置。适当当调节亮亮度后，只只需微微微转动细细调焦螺螺旋，就就可看到到更清晰晰的物像像。切记记此时不不能使用用粗调焦焦螺旋，由于显微镜下观察的被检物有一定厚度，故在观察过程中必须随时转动细调焦螺旋，以了解被检物不同光学平面的情况。在高倍镜镜下，将将玻片中中的被检检物按从从上到下下、从左左到右的的顺序移移动、观观察一遍遍，再由由低倍镜镜转高倍倍镜反复复观察几几次，以以熟练高高倍镜使使用。用用高倍镜镜观察后后，若有有必要，可可再换用用油镜观观察。（7）油油镜观察察转动动粗调焦焦螺旋，使使物镜与与镜台保保持一定定距离。滴滴1滴香香柏油于于玻片标标本待观观察的区区域上，将将油镜头头转至工工作位置置，眼睛睛从侧面面注视，转转动粗调调焦螺旋旋，直至至油镜头头浸没于于香柏油油内，几几乎与载载玻片相相接触，但但不能相相碰。然然后从目目镜中观观察，用用粗调焦焦螺旋极极其缓慢慢地向上上调节至至出现物物像为止止，注意意勿将粗粗调焦螺螺旋转动动方向搞搞反了，以以免油镜镜头与载载玻片相相碰而损损坏了镜镜头及玻玻片。再再用细调调焦螺旋旋调至物物像清晰晰，此时时还应适适当增加加光的亮亮度。如如果镜头头已提出出香柏油油而尚未未见到物物像时，应应按上述述过程重重复操作作。使用用完毕，将将镜头从从香柏油油中脱离离，取下下玻片，用用擦镜纸纸擦去镜镜头和玻玻片上的的香柏油油，再用用擦镜纸纸蘸少许许二甲苯苯擦拭镜镜头上的的油迹，然然后用干干净擦镜镜纸擦去去镜头上上残留的的二甲苯苯。二甲甲苯用量量不宜过过多，擦擦试时间间应短。切忌用手手或其他他纸擦试试镜头，以以免损坏坏透镜。（8）复复原显显微镜使使用完毕毕，关闭闭电源，将将物镜镜镜头转开开，取下下玻片。擦擦净载物物台和物物镜，将将各部分分还原，注注意物镜镜头不可可正对镜镜台孔，装装镜入箱箱。五、显微微镜的保保养显微镜的的光学系系统是显显微镜的的主要部部分，尤尤其是物物镜和目目镜。一一架显微微镜的机机械装置置虽好，但但光学系系统不好好，这架架显微镜镜是不会会起好作作用的。因因此，对对显微镜镜要妥善善保管。1避免免直接在在阳光下下曝晒，因因为透镜镜与透镜镜之间，透透镜与金金属之间间都是用用树脂或或亚麻油油仁粘合合起来的的。金属属与透镜镜膨胀系系数不同同，受高高热因膨膨胀不均均，透镜镜可能脱脱落或破破裂，树树脂受高高热溶化化，透镜镜也会脱脱落。2避免免和挥发发性药品品或腐蚀蚀性酸类类一起存存放，碘碘片、酒酒精、醋醋酸、盐盐酸和硫硫酸等对对显微镜镜金属质质机械装装置和光光学系统统都是有有害的。3透镜镜要用擦擦镜纸擦擦拭，若若仅用擦擦镜纸擦擦不净，可可用擦镜镜纸蘸二二甲苯拭拭擦，但但用量不不宜过多多，拭擦擦时间也也不宜过过长，以以免粘合合透镜的的树脂被被溶化，而而使透镜镜胶落。4不能能随意拆拆卸显微微镜，尤尤其是物物镜、目目镜、镜镜筒不能能随意拆拆卸，因因拆卸后后空气中中的灰尘尘落入里里面引起起生霉。机机械装置置经常加加润滑油油，以减减少磨擦擦而受损损。5避免免用手指指沾抹镜镜面，否否则会影影响观察察，沾有有有机物物的镜片片，时间间长了会会生霉，因因此，每每使用一一次，所所有的目目镜和物物镜都得得用擦镜镜纸擦净净。6显微微镜放在在干燥处处，镜箱箱内要放放硅胶吸吸收潮气气。目镜镜、物镜镜放在盒盒内并存存于干燥燥器中，以以免受潮潮生霉。六、几种种特殊光光学显微微镜介绍绍1.相差差显微镜镜相差显微微镜与普普通光学学显微镜镜在构造造上的不不同之外外是在聚聚光镜下下面装有有一个环环状光阑阑（加绿绿色滤光光片），并并且其物物镜是装装有相板板的相差差物镜。此此外，它它还具有有一个调调整光线线的“合轴望望远镜”（又称称“辅助远远焦镜”）。环环状光阑阑的作用用是形成成一个空空心的光光线锥，造造成透过过标本的的光线分分离成直直射光和和衍射光光2组光光线。这这2组光光线分别别从相板板上的环环区和环环外区通通过，导导致它们们之间微微弱的相相位差人人为地扩扩大增强强，进而而在上面面透镜的的收敛作作用下，这这2组光光线复在在一条光光路上发发生干涉涉效应，使使得相位位差转变变成振幅幅差（即即明暗差差），反反差增强强。因而而通常在在显微镜镜上难以以观察到到的细胞胞细微结结构，就就可以利利用相差差显微镜镜看清楚楚，同时时增强被被观察物物体的立立体感，即即景深加加大，以以利于观观察物体体的全貌貌。在细细胞显微微操作时时尤其需需要相差差显微镜镜。合轴轴望远镜镜是用在在相差显显微镜上上调节光光轴的辅辅助设备备，它不不能用来来观察被被检标本本。相差显微微镜主要要用于观观察未染染色的活活细胞，亦亦可用于于观察固固定过的的材料。被被检材料料厚度不不超过220m，载载玻片要要求厚薄薄均匀，厚厚度在11左右右，盖玻玻片的厚厚度要求求在0.17左右。2.暗视视野显微微镜暗视野显显微镜是是按照丁丁达尔（TTynddalll）光学学效应原原理，在在显微镜镜基本结结构上换换装暗视视野聚光光镜，使使照射被被检物体体表面的的光线不不能直接接进入物物镜与目目镜，而而利用被被检物体体表面的的散射光光线来观观察，其其分辨力力可达00.20.0004m，这这是普通通光学显显微镜远远不可及及的。它它的成像像特点是是：黑暗暗的视野野中可见见明亮的的被检物物体的明明细外貌貌及其运运动，但但是看不不见被检检物体内内部的细细微结构构。暗视视野显微微镜要求求载玻片片厚度在在0.771.7之之间。3.偏振振光显微微镜偏振光显显微镜是是在普通通光学显显微镜的的结构基基础上，加加上2块块能使光光线偏振振的尼科科尔棱镜镜。装在在聚光镜镜下面的的那一块块称为起起偏镜，装装在目镜镜与物镜镜之间的的一块称称为检偏偏镜。这这2块棱棱镜中的的一块固固定，另另一块可可以旋转转（或者者2块均均可旋转转），并并注有刻刻度。另另外，偏偏振光显显微镜的的镜台亦亦能旋转转。偏振光显显微镜是是利用偏偏振光来来鉴别晶晶体和生生物体内内某些有有序结构构的光学学性质，同同时也可可用来鉴鉴别某些些组织中中的化学学成分。4.荧光光显微镜镜荧光显微微镜是利利用激发发的照射射，使标标本内的的荧光物物质被激激发出各各种不同同着色的的荧光，从从而分辨辨标本内内某些物物质的性性质和位位置。也也可以用用显微镜镜外加轻轻便荧光光光源代代替荧光光显微镜镜，其观观察原理理相同，只只是观察察效果略略差。荧荧光显微微镜主要要用于观观察材料料中荧光光染料着着色的色色素颗粒粒等特殊殊成分。5.倒置置显微镜镜倒置显微微镜是将将光路反反转，光光线由上上往下照照射被检检物体，再再经过反反光镜进进入目镜镜。此种种显微镜镜充分利利用聚光光镜与载载物台之之间的距距离，主主要用来来观察培培养器皿皿中的细细胞和进进行显微微操作，当当然亦可可被用作作显微镜镜。七、实验验报告1.分别别绘出你你在低倍倍镜、高高倍镜和和油镜下下观察到到的细菌菌个体形形态。2.在使使用油镜镜进行调调焦时，应应将镜筒筒徐徐上上升还是是下降？为什么么？3.使用用油镜观观察时，为为什么要要在载玻玻片上滴滴加香柏柏油？4.镜检检玻片标标本时，为为什么要要先用低低倍物镜镜观察，而而不是直直接用高高倍物镜镜或油镜镜观察？实验二细细菌个体体形态的的观察一、目的的要求1学习习观察细细菌的个个体形态态2学会会生物图图的绘制制二、基本本原理细菌的个个体形态态是指细细菌细胞胞的大小小，形状状等特征征，利用用观察个个体形态态对细菌菌进行初初步识别别和鉴定定。三、器材材显微镜、细细菌三型型涂片、双双层瓶（二二甲苯、香香柏油）、擦擦镜纸四、操作作步骤1观察察前的准准备（1）置置显微镜镜于平稳稳的实验验台上，镜镜座距实实验台边边沿约33-4，镜检检者姿势势要端正正，一般般用左眼眼观察，右右眼便于于绘图或或记录，两两眼必须须同时睁睁开，以以减少疲疲劳，亦亦可练习习左右眼眼均能观观察。（2）调调节光源源、光线线较强的的天然光光源宜用用平面镜镜；光线线较弱的的天然光光源或人人工光源源宜用凹凹面镜。2低倍倍镜观察察检查的标标本需先先用低倍倍镜观察察，因为为低倍镜镜视野较较大，易易发现目目标和确确定检查查的位置置。将三型涂涂片玻片片标本置置镜台上上，用标标本夹夹夹住，移移动推动动器，使使观察对对象处在在物镜正正下方，转转动粗调调节器，物物镜降至至距标本本约0.5处处，由目目镜观察察，此时时可适当当地缩小小光圈，否否则视野野中只见见光亮一一片，难难见到目目的物，同同时用粗粗调节器器慢慢升升起镜筒筒，直至至物像出出现后再再用细调调节器调调节到物物像清楚楚时为止止，然后后移动标标本，认认真观察察标本各各部位，找找到合适适的目的的物，并并将其移移至视野野中心，准准备用高高倍镜观观察。3高倍倍镜观察察将高倍镜镜转至正正下方，在在转换物物镜时，需需用眼睛睛在侧面面观察，避避免镜头头与玻片片相撞。如如果高倍倍镜触及及载玻片片应立即即停止旋旋动，说说明原来来低倍镜镜就没有有调准焦焦距，目目的物并并没找到到，要用用低倍镜镜重调，如如果调对对了，换换高倍镜镜时基本本可以看看到目的的物，若若有点模模糊，用用细调节节器调就就清晰可可见。找找到最适适宜观察察的部位位后，将将此部位位移至视视野中心心，准备备用油镜镜观察。4.油镜镜观察（1）用用粗调节节器将镜镜筒提起起约2，将油油镜转至至正下方方。（2）在在玻片标标本的镜镜检部位位滴上一一滴香柏柏油，切切勿加多多。（3）从从侧面注注视，用用粗调节节器将镜镜筒小心心地降下下，使油油镜浸在在香柏油油中，其其镜头几几乎与标标本相接接，应特特别注意意不能压压在标本本上，更更不可用用力过猛猛，否则则不仅压压碎玻片片，也会会损坏镜镜头。 （44）从接接目镜内内观察，进进一步调调节光线线，使光光线明亮亮，再用用粗调节节器将镜镜筒徐徐徐上升，直直至视野野出现物物像为止止，然后后用细调调节器校校正焦距距。如油油镜已离离开油面面而仍未未见物像像，必须须再从侧侧面观察察，将油油镜降下下，重复复操作至至物像看看清为止止。切勿将粗粗调节器器旋转方方向搞反反了，以以免油镜镜头与载载玻片相相碰而损损坏了镜镜头及玻玻片。（5）观观察完毕毕，关闭闭电源，上上旋镜筒筒。将物物镜镜头头转开，取取下玻片片，用擦擦镜纸拭拭去镜头头上的油油，然后后用擦镜镜纸蘸少少许二甲甲苯（香香柏油溶溶于二甲甲苯）擦擦去镜头头上残留留油迹，最最后再用用干净擦擦镜纸擦擦去残留留的二甲甲苯。切切忌用手手或其他他纸擦镜镜头，以以免损坏坏镜头。用用绸布擦擦净显微微镜的金金属部件件。（6）将将各部分分还原，将将接物镜镜转成八八字形，再再向下旋旋。同时时把聚光光镜降下下，以免免接物镜镜与聚光光镜发生生碰撞，反反光镜垂垂直于镜镜座。五、实验验报告1.细菌菌个体的的基本形形态有几几种？分分别是？2.分别别绘制出出你在低低倍镜、高高倍镜和和油镜下下观察到到的细菌菌形态图图。实验三 放线菌菌个体形形态的观观察一、目的的要求掌握观察察放线菌菌形态的的基本方方法，并并观察放放线菌的的形态特特征。二、基本本原理放线菌在在固体培培养基上上呈辐射射状生长长而得名名。放线线菌是由由不同长长短的纤纤细的菌菌丝所形形成的单单细胞菌菌丝体。菌菌丝体分分为两部部分，即即潜入培培养基中中的营养养菌丝（或或称基内内菌丝）和和生长在在培养基基表面的的气生菌菌丝。有有些气生生菌丝分分化成各各种孢子子丝，呈呈螺旋形形、波浪浪形或分分枝状等等。孢子子常呈圆圆形、椭椭圆形或或杆形。气气生菌丝丝及孢子子的形状状和颜色色常作为为分类的的重要依依据。三、器材材显微镜，载载玻片，盖盖玻片，玻玻璃棒，接接种铲，小小刀，镊镊子，土土样，石石炭酸复复红染液液，吕氏氏碱性美美蓝染液液，加拿拿大树胶胶，玻璃璃纸，高高氏1号号培养基基；培养养皿等。四、操作作步骤1放线线菌自然然生长状状态的观观察（1）将将灭菌后后的高氏氏1号培培养基倒倒入培养养皿，每每皿倒115mll左右，凝凝固后备备用。（2）用用经火焰焰灭过菌菌的小镊镊子将灭灭菌优质质玻璃纸纸平铺在在平皿培培养基上上，如果果琼脂培培养基和和玻璃纸纸之间有有气泡，可可以用灭灭过菌的的玻璃棒棒将气泡泡除去。（3）将将一定量量的无菌菌水倒入入装有土土样的无无菌玻璃璃珠瓶中中，制成成菌悬液液，再适适当稀释释。（4）用用无菌吸吸管取00.1mml的孢孢子悬液液稀释液液，接种种在玻璃璃纸上，并并用无菌菌玻璃棒棒涂匀后后，置228培养，直直至菌长长好，备备用。（5）在在洁净的的载玻片片上滴一一小滴水水，稍涂涂布。取取出培养养皿，打打开皿盖盖，用镊镊子将玻玻璃纸与与培养基基分开，再再用剪刀刀剪取小小片长有有菌的玻玻璃纸，菌菌面朝上上放在载载玻片的的水面上上，使纸纸平贴载载玻片。（6）将将载玻片片置显微微镜下观观察。附：玻璃璃纸灭菌菌方法：在玻璃璃纸灭菌菌时，若若直接将将干燥的的玻璃纸纸灭菌，它它就会缩缩小，不不便使用用。故需需作如下下处理：将玻璃璃纸和滤滤纸剪成成培养皿皿大小的的圆形纸纸片，用用水浸泡泡后把湿湿滤纸和和玻璃纸纸交互重重叠地放放在培养养皿中，借借滤将玻玻璃纸隔隔开。然然后进行行湿热灭灭菌，备备用。2.营养养菌丝的的观察（1）用用接种铲铲连同培培养基挑挑取放线线菌菌苔苔置载玻玻片中央央。（2）用用另一载载玻片将将其压碎碎，弃去去培养基基，制成成涂片，干干燥、固固定。（3）用用吕氏碱碱性美蓝蓝染液或或石炭酸酸复红染染液染00.51分钟钟，水洗洗。（4）干干燥后，用用油镜观观察营养养菌丝的的形态。3.气生生菌丝与与营养菌菌丝的比比较观察察（1）将将高氏11号培养养基倒入入无菌培培养皿，制制成4左右的的培养基基平板，经经培养检检验后无无菌，备备用。（2）用用火焰灭灭菌的镊镊子将无无菌盖玻玻片以445度倾倾斜角插插入平皿皿培养基基琼脂内内，然后后将孢子子悬液（浓浓度以稀稀释100-210-33为好），接接种在盖盖玻片与与平皿培培养基的的界面上上。（3）倒倒置，于于28培养445天后后，小心心地将盖盖玻片取取出，把把有菌的的一面朝朝上，放放在载玻玻片上，置置显微镜镜下进行行观察。一一般情况况是气生生菌丝颜颜色较深深，并比比营养菌菌丝粗二二倍左右右。4.孢子子丝及孢孢子的观观察（1）将将培养334天的的放线菌菌培养皿皿打开，放放在显微微镜低倍倍镜下寻寻找菌落落的边缘缘，直接接观察气气生菌丝丝和孢子子丝的形形态，注注意其分分枝情况况、卷曲曲情况等等。（2）取取清洁的的盖玻片片一块，在在菌落上上面轻轻轻按压一一下，然然后将印印有痕迹迹的一面面朝下放放在有一一滴吕氏氏碱性美美蓝染液液的载玻玻片上，将将孢子等等印浸在在染液中中，制成成印片。用用油镜观观察孢子子的形状状、孢子子丝等。（3）取取干净载载玻片一一块，在在玻片中中央加一一小滴加加拿大树树胶，使使树胶摊摊成一薄薄层，放放置数分分钟，使使略微晾晾干（但但不要过过分干燥燥）。然然后用小小刀切取取放线菌菌培养体体一块（带带培养基基切下）。将将培养体体表面贴贴在涂有有树胶的的玻片上上，用另另一玻片片轻轻按按压（不不要压碎碎），然然后将放放线菌培培养体小小心弃去去，注意意不要使使培养体体在玻片片上滑动动，否则则印痕模模糊不清清。将制制好的印印片通过过火焰固固定，用用石炭酸酸复红染染色1分分钟，水水洗，晾晾干（不不能用吸吸水纸吸吸干）。用用油镜观观察孢子子丝的形形态及孢孢子排列列情况。五、实验验报告1.绘图图说明你你所观察察到的放放线菌形形态特征征。2.在自自然界和和实际应应用中放放线菌有有什么作作用？实验四霉菌的的个体形形态观察察一、目的的要求掌握观察察霉菌形形态的基基本方法法，并观观察其形形态特征征。二、基本本原理霉菌菌丝丝较粗大大，细胞胞易收缩缩变形，而而且孢子子很容易易飞散，所所以制标标本时常常用乳酸酸石炭酸酸棉蓝染染色液。此此染色液液制成的的霉菌标标本片其其特点是是（a）细胞胞不变形形；(bb)具有有杀菌防防腐作用用，且不不易干燥燥，能保保持较长长时间；（c）溶液液本身呈呈蓝色，有有一定染染色效果果。霉菌菌的菌丝丝、分生生孢子梗梗和分生生孢子的的形态常常作为分分类的重重要依据据。三、器材材曲霉（AAspeergiilluus ssp.），青青霉 (Penniciilliium sp.)，根根霉(RRhizzopuus ssp.)，毛霉霉(Muucorr spp.)；乳酸石炭炭酸棉蓝蓝染色液液，200%甘油油，马丁丁氏（MMarttin）培培养基平平板或查查氏培养养基平板板，无菌菌吸管，载载玻片，盖盖玻片，U形棒，解剖刀，玻璃纸，滤纸等。四、操作作步骤1一般般观察法法（1）将将培养334天的的霉菌培培养皿打打开，放放在显微微镜低倍倍镜下寻寻找菌落落的边缘缘，直接接观察菌菌丝，分分生孢子子梗和分分生孢子子。（2）于于洁净载载玻片上上，滴一一滴乳酸酸石炭酸酸棉蓝染染色液，用用解剖针针从霉菌菌菌落的的边缘外外取少量量带有孢孢子的菌菌丝置染染色液中中，再细细心地将将菌丝挑挑散开，然然后小心心地盖上上盖玻片片，注意意不要产产生气泡泡。置显显微镜下下先用低低倍镜观观察，必必要时再再换高倍倍镜。2载玻玻片观察察法（1）将将略小于于培养皿皿底内径径的滤纸纸放入皿皿内，再再放上UU形玻棒棒，其上上放一洁洁净的载载玻片，然然后将二二个盖玻玻片分别别斜立在在载玻片片的两端端，盖上上皿盖，把把数套（根根据需要要而定）如如此装置置的培养养皿叠起起，包扎扎好，用用1.005/2，1211.3灭菌220分钟钟，备用用。（2）将将67mll灭菌的的马丁氏氏（Maartiin）琼琼脂培养养基倒入入直径为为9的的灭菌平平皿中，待待凝固后后，用无无菌解剖剖刀切成成0.5512的琼脂脂块，用用刀尖铲铲起琼脂脂块放在在已灭菌菌的培养养皿内的的载玻片片上，每每片上放放置2块块。（3）用用灭菌的的尖细接接种针，取取（肉眼眼方能看看见的）一一点霉菌菌孢子，轻轻轻点在在琼脂块块的边缘缘上，用用无菌镊镊子夹着着立在载载玻片旁旁的盖玻玻片盖在在琼脂块块上，再再盖上皿皿盖。（4）在在培养皿皿的滤纸纸上，加加无菌的的20%甘油数数毫升，至至滤纸湿湿润即可可停加，将将培养皿皿置288培养一一定时间间后，取取出载玻玻片置显显微镜下下观察。3.玻璃璃纸透析析培养观观察法（1）向向霉菌斜斜面试管管中加入入5mll无菌水水，洗下下孢子，制制成孢子子悬液。（2）用用无菌镊镊子将已已灭菌的的、直径径与培养养皿相同同的圆形形玻璃纸纸覆盖于于查氏培培养基平平板上。（3）用用1mll无菌吸吸管吸取取0.22ml孢孢子悬液液于上述述玻璃纸纸平板上上，并用用无菌玻玻璃刮棒棒涂抹均均匀。（4）置置于288温室培培养488小时后后，取出出培养皿皿，打开开皿盖，用用镊子将将玻璃纸纸与培养养基分开开，再用用剪刀取取一小片片玻璃纸纸置载玻玻片上，用用显微镜镜观察。五、实验验报告1.绘图图说明你你所观察察到的霉霉菌形态态特征。2.霉菌菌对人类类生活和和生产能能产生哪哪些积极极作用和和消极作作用？3.玻璃璃纸应怎怎样进行行灭菌？为什么么？实验五 酵母菌菌的个体体形态观观察一、目的的要求1.观察察酵母菌菌的细胞胞形态及及出芽生生殖方式式。2.学习习掌握区区分酵母母菌死、活活细胞的的染色方方法。二、基本本原理酵母菌是是多形的的、不运运动的单单细胞微微生物，细细胞核与与细胞质质已有明明显的分分化，菌菌体比细细菌大。繁繁殖方式式也较复复杂，无无性繁殖殖主要是是出芽生生殖，仅仅裂殖酵酵母属是是以分裂裂方式繁繁殖；有有性繁殖殖是通过过接合产产生子囊囊孢子。本本实验通通过用美美蓝染色色浸片来来观察生生活的酵酵母形态态和出芽芽生殖方方式。美美蓝是一一种无毒毒性染料料，它的的氧化型型是蓝色色的，而而还原型型是无色色的，用用它来对对酵母的的活细胞胞进行染染色，由由于细胞胞中新陈陈代谢的的作用。使使细胞内内具有较较强的还还原能力力，能使使美蓝从从蓝色的的氧化型型变为无无色的还还原型，所所以酵母母的活细细胞无色色，而对对于死细细胞或代代谢缓慢慢的老细细胞，则则因它们们无此还还原能力力或还原原能力极极弱，而而被美蓝蓝染成蓝蓝色或淡淡蓝色。因因此，用用美蓝水水浸片不不仅可观观察酵母母的形态态，还可可以区分分死、活活细胞。三、器材材酵母菌、0.1%吕氏碱性美蓝染液，显微镜，载玻片，盖玻片等。四、操作作步骤1在载载玻片中中央加一一滴0.1%吕氏碱碱性美蓝蓝染液，液液滴不可可过多或或过少，以以免盖上上盖玻片片时，溢溢出或留留有气泡泡。然后后按无菌菌操作法法取在琼琼脂斜面面上培养养48小时时的酵母母菌少许许，放在在吕氏碱碱性美蓝蓝染液中中，使菌菌体与染染液均匀匀混合。2用镊镊子夹盖盖玻片一一块，小小心地盖盖在液滴滴上。盖盖盖玻片片时应注注意，不不能将盖盖玻片平平放下去去，应先先将盖玻玻片的一一边与液液滴接触触，然后后将整个个盖玻片片慢慢放放下，这这样可以以避免产产生气泡泡。3将制制好的水水浸片放放置3分钟后后镜检。先先用低倍倍镜观察察，然后后换用高高倍镜观观察酵母母菌的形形态和出出芽情况况，同时时可以根根据是否否染上颜颜色来区区别死、活活细胞。4染色色半小时时后，再再观察一一下死细细胞数是是否增加加。5用00.055%吕氏氏碱性美美蓝染液液重复上上述的操操作。五、实验验报告1.绘图图说明你你所观察察到的酵酵母菌的的细胞结结构及出出芽生殖殖方式。2.酵母母菌在实实际应用用中有什什么作用用？实验六原原生动物物和藻类类个体形形态的观观察一、目的的要求1进一一步熟悉悉和掌握握显微镜镜的操作作方法2观察察原生动动物和藻藻类个体体形态，掌掌握生物物图的绘绘制方法法二、基本本原理1原生生动物以以细菌和和颗粒状状有机物物或溶解解性有机机物为食食，它对对废水的的净化起起重要作作用，原原生动物物易于通通过显微微镜观察察和分辨辨，因而而可作为为指示生生物，通通过观察察原生动动物群落落结构来来评价水水质污染染程度。2借助助显微镜镜观察藻藻类个体体形态，通通过实验验了解藻藻类的特特征，细细胞等的的构成，是是藻类分分类的重重要依据据。三、器材材显微镜、原原生动物物装片、藻藻类装片片、活性性污泥混混合液或或各种水水样；摄摄子、擦擦镜纸、吸吸水纸、玻玻璃小吸吸管、烧烧杯、载载玻片、盖盖玻片等等四、操作作步骤1标本本片的制制作用压滴法法制作原原生动物物标本片片，取一一片干净净的载玻玻片放在在实验台台上，用用一支滴滴管吸取取活性污污泥混合合液或水水样滴于于载玻片片的中央央，用干干净的盖盖玻片覆覆盖在液液滴上（注注意不要要有气泡泡）即成成标本片片。2低倍倍镜观察察将标标本片置置镜台上上，用标标本夹夹夹住，用用粗调焦焦螺旋调调焦后，再再轻轻转转动细调调焦螺旋旋以便得得到清晰晰的物像像。如果果观察的的目标不不在视野野中央可可调节标标本移动动器，使使之位于于视野中中央，准准备用高高倍镜观观察。3高倍倍镜观察察用低低倍镜调调准焦距距后，换换高倍镜镜，若有有点模糊糊，用细细调节器器调至清清晰。4、观察察原生动动物的外外形，行行动器官官等（见见附注）5、观察察藻类的的外形，所所含色素素体和藻藻体形态态构造等等（见附附注）。五、实验验报告将你在显显微镜下下观察到到的原生生动物形形态绘制制成图，它它属于哪哪一类（见见本课教教材和附附注）？有何特特征？六、附注注（一）根根据藻类类所含的的色素和和植物体体的形态态与构造造分成110门。1细胞胞具色素素体；贮贮藏物质质为淀粉粉或脂肪肪21细胞胞无色素素体，色色素分散散在原生生质中；贮藏物物质以蓝蓝藻淀粉粉为主蓝蓝藻门（CCyannophhytaa） 22细胞胞壁由上上、下两两个硅质质瓣壳套套合组成成；壳面面具辐射射对称或或左右对对称的花花纹硅硅藻门（BBaciillaarioophyyta） 22细胞胞壁没有有上、下下两个硅硅质瓣壳壳组成33营养养细胞或或动孢子子具横沟沟和纵沟沟或仅具具纵沟43营养养细胞或或动孢子子不具横横沟和纵纵沟5 44无细细胞壁或或细胞壁壁由一定定数目的的板片组组成甲藻门门（Pyyrroophyyta）4无细细胞壁或或细胞壁壁不具板板片隐藻藻门（CCrypptopphytta）5色素素体为绿绿色，罕罕见灰色色或无色色；贮藏藏物质为为淀粉或或裸藻淀淀粉65色素素体为红红色、黄黄色、黄黄绿色，有有时为淡淡绿色；贮藏物物质为红红藻淀粉粉、白糖糖素、脂脂肪或甘甘露醇88 66植物物体大型型，分枝枝，规则则地分化化成节和和节间轮藻门门（Chharoophyyta） 66植物物体为单单细胞，群群体的或或多细胞胞的丝状状体或叶叶状体，无无节和节节间的分分化77植物物体多为为单细胞胞，少数数为群体体；运动动细胞顶顶端具11、2或或3条鞭鞭毛；有有时无色色；贮藏藏物质为为裸藻淀淀粉裸藻藻门（EEugllenoophyyta）7植物物体为单单细胞的的、群体体的，丝丝状的或或薄壁组组织状的的；运动动的营养养细胞或或动孢子子具2（少少数属具具4或88） 条条等长的的鞭毛；罕见无无色的；贮藏物物质为淀淀粉绿藻藻门（CChlooropphytta） 88色素素体为红红色或有有时为绿绿色；生生活史的的任何时时期均无无具鞭毛毛的细胞胞；贮藏藏物质为为红藻淀淀粉红藻藻门（RRhoddophhytaa） 88色素素体不为为红色；运动细细胞或生生殖细胞胞具2（罕罕见3）条条不等长长的鞭毛毛；贮藏藏物质为为白糖素素、油或或甘露醇醇99色素素体褐色色；植物物体常为为大型的的、丝状状、壳状状、叶状状，有的的具假根根、假茎茎、假叶叶的分化化；动孢孢子肾形形，具22条侧生生的鞭毛毛；贮藏藏物质为为褐藻淀淀粉和甘甘露醇褐褐藻门（PPhaeeophhytaa）9色素素体黄绿绿色、金金褐色或或淡黄色色；植物物体常为为小型的的，单细细胞、群群体或丝丝状；运运动细胞胞具1、22或3条条等长或或不等长长的鞭毛毛；贮藏藏物质为为白糖素素或油10010色色素体金金褐色或或淡黄色色；植物物体通常常为小型型的、单单细胞或或群体；运动细细胞具11条鞭毛毛或2条条等长或或不等长长的鞭毛毛，罕见见具3条条鞭毛的的；有些些种类为为变形虫状的金藻藻门（CChryysopphytta）10色色素体黄黄绿色；植物体体为单细细胞、群群体或丝丝状；运运动细胞胞具2条条不等长长的鞭毛毛；单细细胞或群群体种类类细胞壁壁常由两两瓣套合合组成，丝丝状种类类由两“H”字形节节合成黄黄藻门（XXantthopphytta）（二）根根据原生生动物行行动器官官的不同同，可分分为下列列四类：（1）鞭鞭毛虫类类（Fllageellaata）：单细胞胞个体，具具有一根根或一根根以上鞭鞭毛作为为行动工工具。通通常有卵卵圆形、椭椭圆形、杯杯形、双双锥形及及多角形形等等。有有单生的的也有各各种形态态的群体体生活的的。常见见种类有有：聚屋屋滴虫（Oikomonas socialis）、尾波豆虫（Bodo caudatus）、跳侧滴虫（Pleuromonas jaculans）、领鞭毛虫（Choanoflagellate）。（2）肉肉足虫类类（Saarcoodinna）：原生质质体赤裸裸，没有有加厚的的表膜或或壳，伪伪足可以以从质体体任何地地方伸出出。内外外质分界界明显，外外质透明明，内质质泡状或或颗粒状状。没有有固定的的形状，靠靠体内原原生质流流动形成成伪足捕捕食。个个体大小小可由几几个微米米到几百百个微米