常用培养基制备灭菌与消毒讲稿.ppt

常用培养基制备灭菌与常用培养基制备灭菌与消毒消毒第一页，讲稿共五十八页哦牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基n n牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下：普通的细菌基础培养基。其配方如下：n n牛肉膏牛肉膏3g3g，蛋白胨，蛋白胨10g10g，Nacl5gNacl5g，琼脂，琼脂151520g20g，水，水1000mL1000mL，PH7.0PH7.07.2(7.2(后调后调)第二页，讲稿共五十八页哦高氏高氏1 1号培养基号培养基n n高氏高氏1 1号培养基是用于分离和培养放线菌的号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下：合成培养基。其配方如下：n n可溶性淀粉可溶性淀粉20g20g，KNO3 1gKNO3 1g，NaCl 0.5gNaCl 0.5g，K2HPO4K2HPO43H2O 0.5g3H2O 0.5g，MgSO4MgSO47H2O 0.5g7H2O 0.5g，FeSO4FeSO47H2O 0.01g7H2O 0.01g，琼脂，琼脂151520g20g，水，水1000mL1000mL，pH7.4pH7.47.67.6。第三页，讲稿共五十八页哦查氏合成培养基查氏合成培养基n n查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的培查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的培养基养基,其配方如下：其配方如下：n nNaNO3 3g,K2HPO4 1g,KCl 0.5g,NaNO3 3g,K2HPO4 1g,KCl 0.5g,MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗糖蔗糖 30g,30g,H2O 1000ml,pHH2O 1000ml,pH自然自然第四页，讲稿共五十八页哦麦芽汁培养基麦芽汁培养基n n用来培养酵母菌用来培养酵母菌,干麦芽粉加干麦芽粉加4 4倍水倍水,在在50-50-6060保温糖化保温糖化3-43-4小时，用碘液试验检查至小时，用碘液试验检查至糖化完全为止糖化完全为止,调整糖液浓度调整糖液浓度,煮沸后，过滤，煮沸后，过滤，调调pHpH为为6.06.0。第五页，讲稿共五十八页哦消毒与灭菌消毒与灭菌消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。方法：方法：物理的方法：加热、过滤、辐射物理的方法：加热、过滤、辐射物理的方法：加热、过滤、辐射物理的方法：加热、过滤、辐射化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。第六页，讲稿共五十八页哦加热法：加热法：干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌1 1 1 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。布用玻璃棒。布用玻璃棒。布用玻璃棒。2 2 2 2、热空气灭菌利用高温干燥空气（、热空气灭菌利用高温干燥空气（、热空气灭菌利用高温干燥空气（、热空气灭菌利用高温干燥空气（160160160160170C170C170C170C）加热灭菌）加热灭菌）加热灭菌）加热灭菌1 1 1 12h2h2h2h，适用于，适用于，适用于，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。3 3 3 3、注意事项：、注意事项：、注意事项：、注意事项：1 1 1 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；2 2 2 2）温度控制在）温度控制在）温度控制在）温度控制在180180180180；3 3 3 3）物品不能太挤；）物品不能太挤；）物品不能太挤；）物品不能太挤；4 4 4 4）温度降至）温度降至）温度降至）温度降至70707070时才开箱门。时才开箱门。时才开箱门。时才开箱门。第七页，讲稿共五十八页哦第八页，讲稿共五十八页哦湿热法湿热法 ：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：1 1 1 1、设备：高压灭菌锅、设备：高压灭菌锅、设备：高压灭菌锅、设备：高压灭菌锅2 2 2 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。3 3 3 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。可用于玻璃器皿的灭菌。可用于玻璃器皿的灭菌。可用于玻璃器皿的灭菌。4 4 4 4、注意事项：、注意事项：、注意事项：、注意事项：1 1 1 1）冷空气彻底排除；）冷空气彻底排除；）冷空气彻底排除；）冷空气彻底排除；2 2 2 2）加水；）加水；）加水；）加水；3 3 3 3）压力降为）压力降为）压力降为）压力降为“0 0 0 0”时方可打开时方可打开时方可打开时方可打开。第九页，讲稿共五十八页哦n n在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留气的温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见有不同分量空气时，压力与温度的关系见表表2第十页，讲稿共五十八页哦第十一页，讲稿共五十八页哦 常压蒸汽灭菌：常压蒸汽灭菌：对对对对于于于于不不不不宜宜宜宜用用用用高高高高压压压压蒸蒸蒸蒸汽汽汽汽灭灭灭灭菌菌菌菌的的的的培培培培养养养养基基基基如如如如明明明明胶胶胶胶培培培培养养养养基基基基、牛牛牛牛乳乳乳乳培培培培养养养养基基基基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。煮沸灭菌法：煮沸灭菌法：煮沸灭菌法：煮沸灭菌法：适用注射器和解剖器皿，时间适用注射器和解剖器皿，时间适用注射器和解剖器皿，时间适用注射器和解剖器皿，时间1010101015min15min15min15min，超高温杀菌超高温杀菌超高温杀菌超高温杀菌 135-150C135-150C135-150C135-150C和和和和2-8s2-8s2-8s2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。对牛乳和其它液态食品灭菌。对牛乳和其它液态食品灭菌。对牛乳和其它液态食品灭菌。优点优点优点优点 ：保持食品价值和营养成分。保持食品价值和营养成分。保持食品价值和营养成分。保持食品价值和营养成分。第十二页，讲稿共五十八页哦 过滤除菌：过滤除菌：原理：介质在有压力时阻隔微生物。原理：介质在有压力时阻隔微生物。原理：介质在有压力时阻隔微生物。原理：介质在有压力时阻隔微生物。适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：1 1 1 1、压力适当；、压力适当；、压力适当；、压力适当；2 2 2 2、无菌条件下进行；、无菌条件下进行；、无菌条件下进行；、无菌条件下进行；3 3 3 3、防止渗透现象。、防止渗透现象。、防止渗透现象。、防止渗透现象。第十三页，讲稿共五十八页哦 辐射灭菌：辐射灭菌：原理：原理：紫外线波长在紫外线波长在紫外线波长在紫外线波长在200200200200300nm300nm300nm300nm，具有杀菌作用，以，具有杀菌作用，以，具有杀菌作用，以，具有杀菌作用，以265-266265-266265-266265-266杀杀杀杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。缺点：缺点：缺点：缺点：穿透力不大。距照射物穿透力不大。距照射物穿透力不大。距照射物穿透力不大。距照射物1.2m1.2m1.2m1.2m为宜。为宜。为宜。为宜。应用：应用：应用：应用：无菌室，医院。无菌室，医院。无菌室，医院。无菌室，医院。注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用。对眼睛和皮肤有刺激作用。对眼睛和皮肤有刺激作用。对眼睛和皮肤有刺激作用。第十四页，讲稿共五十八页哦 化学药品灭菌：化学药品灭菌：原理：原理：原理：原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。应用化学制剂破坏细菌代谢机能。应用化学制剂破坏细菌代谢机能。应用化学制剂破坏细菌代谢机能。杀菌剂如重金属离子；杀菌剂如重金属离子；杀菌剂如重金属离子；杀菌剂如重金属离子；抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。注意：注意：注意：注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以及微及微及微及微 生物所处的环境有关。生物所处的环境有关。生物所处的环境有关。生物所处的环境有关。常用化学杀菌剂有：常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸乙醇、醋酸、石碳酸乙醇、醋酸、石碳酸乙醇、醋酸、石碳酸 福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等第十五页，讲稿共五十八页哦 分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种 或某一株微生物的过程。或某一株微生物的过程。或某一株微生物的过程。或某一株微生物的过程。为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落并不一定保为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落并不一定保为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落并不一定保为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落并不一定保 证是一种菌。证是一种菌。常用的分离、纯化方法：常用的分离、纯化方法：常用的分离、纯化方法：常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法、稀释涂布平板法单细胞挑取法、稀释涂布平板法 稀释混合平板法、平板划线法稀释混合平板法、平板划线法稀释混合平板法、平板划线法稀释混合平板法、平板划线法 实验四实验四 微生物的分离、纯化及培养微生物的分离、纯化及培养技术技术第十六页，讲稿共五十八页哦稀释涂布平板法稀释涂布平板法 ：步步步步骤骤骤骤：1 1 1 1、倒倒倒倒平平平平板板板板：牛牛牛牛肉肉肉肉膏膏膏膏蛋蛋蛋蛋白白白白胨胨胨胨培培培培养养养养基基基基，高高高高氏氏氏氏I I I I号号号号培培培培养养养养基基基基，查查查查氏氏氏氏培培培培养养养养基基基基冷冷冷冷却却却却至至至至55-6055-6055-6055-60时时时时，混混混混匀匀匀匀后后后后倒倒倒倒平平平平板板板板，牛牛牛牛肉肉肉肉膏膏膏膏蛋蛋蛋蛋白白白白胨胨胨胨培培培培养养养养基基基基倒倒倒倒4 4 4 4皿皿皿皿，高氏高氏高氏高氏I I I I号培养基和查氏培养基各倒号培养基和查氏培养基各倒号培养基和查氏培养基各倒号培养基和查氏培养基各倒3 3 3 3皿。皿。皿。皿。2 2 2 2、制制制制备备备备污污污污水水水水稀稀稀稀释释释释液液液液：10g10g10g10g土土土土样样样样，加加加加入入入入90ml90ml90ml90ml无无无无菌菌菌菌水水水水中中中中，在在在在三三三三角角角角瓶瓶瓶瓶中中中中振振振振摇摇摇摇20min20min20min20min。取取取取0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 加加加加入入入入盛盛盛盛有有有有4.5ml4.5ml4.5ml4.5ml无无无无菌菌菌菌水水水水的的的的试试试试管管管管中中中中，以以以以此此此此类类类类推推推推，制制制制成不同稀释度。成不同稀释度。成不同稀释度。成不同稀释度。3 3 3 3、涂涂涂涂布布布布：将将将将上上上上述述述述每每每每种种种种培培培培养养养养基基基基平平平平板板板板底底底底面面面面标标标标记记记记稀稀稀稀释释释释度度度度，然然然然后后后后用用用用无无无无菌菌菌菌吸吸吸吸管管管管从从从从最最最最后后后后三三三三种种种种稀稀稀稀释释释释度度度度，即即即即10101010-4-4-4-4、10101010-5-5-5-5和和和和10101010-6-6-6-6的的的的试试试试管管管管中中中中吸吸吸吸取取取取0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。对号放入平板上，用玻棒涂布。对号放入平板上，用玻棒涂布。对号放入平板上，用玻棒涂布。4 4 4 4、培培培培养养养养：高高高高氏氏氏氏I I I I号号号号和和和和查查查查氏氏氏氏倒倒倒倒置置置置培培培培养养养养于于于于28282828培培培培养养养养箱箱箱箱中中中中培培培培养养养养3-5days3-5days3-5days3-5days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37373737培养培养培养培养1-2days1-2days1-2days1-2days。5 5 5 5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。第十七页，讲稿共五十八页哦第十八页，讲稿共五十八页哦 平板划线法：平板划线法：平板划线法：平板划线法：1 1 1 1、倒倒倒倒平平平平板板板板，标标标标记记记记培培培培养养养养基基基基名名名名称称称称，编编编编号号号号和和和和实实实实验验验验日期。日期。日期。日期。2 2 2 2、划线方法、划线方法、划线方法、划线方法 稀释混合平板法稀释混合平板法稀释混合平板法稀释混合平板法 ：1 1 1 1、先加菌、先加菌、先加菌、先加菌2 2 2 2、倒平板时注意培养基温度、倒平板时注意培养基温度、倒平板时注意培养基温度、倒平板时注意培养基温度3 3 3 3、混合均匀、混合均匀、混合均匀、混合均匀第十九页，讲稿共五十八页哦 微生物培养技术微生物培养技术1 1、斜面接种、斜面接种2 2、液体培养基接种、液体培养基接种3 3、穿刺接种、穿刺接种将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培养箱养箱中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，置中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，置44冰箱中冰箱中保存。保存。第二十页，讲稿共五十八页哦观察菌落形态并记录观察菌落形态并记录序号序号 来源来源 大小大小 形状形状 边缘边缘 颜色颜色 表面表面 代谢物代谢物 种类种类第二十一页，讲稿共五十八页哦实验五：放线菌及霉菌形态观察目的要求目的要求1.1.了解放线菌、霉菌的形态观察的原理。了解放线菌、霉菌的形态观察的原理。2.2.学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操作方法。作方法。3.3.初步了解放线菌、霉菌的形态特征。初步了解放线菌、霉菌的形态特征。第二十二页，讲稿共五十八页哦原理原理n放线菌是一群丝状，放线菌是一群丝状，G G+的细菌，在气生菌丝的细菌，在气生菌丝末端形成孢子。末端形成孢子。n细胞壁主要成分是肽聚糖，最适细胞壁主要成分是肽聚糖，最适pHpH与细菌相与细菌相似。主要以孢子方式进行无性繁殖。似。主要以孢子方式进行无性繁殖。n其其DNA DNA 碱基组成中碱基组成中GCGC含量特别高。超过任何已含量特别高。超过任何已知的细菌。知的细菌。n 许多临床应用的抗生素都由链霉菌种产生。许多临床应用的抗生素都由链霉菌种产生。放线菌放线菌(Actinomycetes)第二十三页，讲稿共五十八页哦第二十四页，讲稿共五十八页哦分生孢子丝分生孢子丝分生孢子丝分生孢子丝琼脂表琼脂表琼脂表琼脂表面面面面基内菌丝基内菌丝基内菌丝基内菌丝气生菌丝气生菌丝气生菌丝气生菌丝The cross section of an actinomycete colony showing the substrate The cross section of an actinomycete colony showing the substrate mycelium mycelium（基内菌丝）（基内菌丝）（基内菌丝）（基内菌丝）and aerial myceliumand aerial mycelium（气生菌丝）（气生菌丝）（气生菌丝）（气生菌丝）with chains of with chains of conidiosporesconidiospores（分生孢子）（分生孢子）（分生孢子）（分生孢子）第二十五页，讲稿共五十八页哦分生孢子丝分生孢子丝分生孢子丝分生孢子丝琼脂表琼脂表琼脂表琼脂表面面面面基内菌丝基内菌丝基内菌丝基内菌丝气生菌丝气生菌丝气生菌丝气生菌丝The cross section of an actinomycete colony showing the substrate The cross section of an actinomycete colony showing the substrate myceliummycelium（基内菌丝）（基内菌丝）（基内菌丝）（基内菌丝）and aerial mycelium and aerial mycelium（气生菌丝）（气生菌丝）（气生菌丝）（气生菌丝）with with chains of conidiosporeschains of conidiospores（分生孢子）（分生孢子）（分生孢子）（分生孢子）第二十六页，讲稿共五十八页哦n n放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、弯曲、的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、弯曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。孢子也有钩状、螺旋状、轮生等多种形态。孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。它们的球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。种颜色呈同心圆放射状。第二十七页，讲稿共五十八页哦链霉菌的各种链霉菌的各种链霉菌的各种链霉菌的各种孢子丝结构孢子丝结构孢子丝结构孢子丝结构第二十八页，讲稿共五十八页哦链霉菌的分离链霉菌的分离：n n pH中性偏碱n n 喜干（含水少）喜干（含水少）n 采用含各种无机盐的选择性培养基第二十九页，讲稿共五十八页哦已知放线菌能够产生500多种抗生素。大多数抗生素对不同的细菌有大多数抗生素对不同的细菌有独特的疗效独特的疗效有5050多种被实际应用多种被实际应用Antibiotics放线菌放线菌Actinomycetes 第三十页，讲稿共五十八页哦霉菌(molds)n n是丝状真菌的总称是丝状真菌的总称是丝状真菌的总称是丝状真菌的总称,即即即即“发霉的真菌发霉的真菌发霉的真菌发霉的真菌”。通常指菌丝体比较发达。通常指菌丝体比较发达。通常指菌丝体比较发达。通常指菌丝体比较发达而又不产生大型子实体的真菌。常在潮湿的气候下大量生长而又不产生大型子实体的真菌。常在潮湿的气候下大量生长而又不产生大型子实体的真菌。常在潮湿的气候下大量生长而又不产生大型子实体的真菌。常在潮湿的气候下大量生长繁殖。繁殖。繁殖。繁殖。第三十一页，讲稿共五十八页哦形态特征（Morphological characteristics）n n属异养型真核生物，具有丝状或管状结构，单个分支称为菌丝。菌丝形成的网络状结构称为菌丝体。n n营养菌丝（营养菌丝（vegetative myceliumvegetative mycelium）：汲取营养）：汲取营养n n气生菌丝（aerial myceliumaerial mycelium）n n繁殖菌丝:孢子丝，进行繁殖。孢子丝，进行繁殖。第三十二页，讲稿共五十八页哦分类（classification）n n有隔菌丝：有隔菌丝中有横隔膜将菌丝分隔成多个细胞，在有隔菌丝中有横隔膜将菌丝分隔成多个细胞，在菌丝生长过程中细胞核的分裂伴随着细胞的分裂，每个细胞含有菌丝生长过程中细胞核的分裂伴随着细胞的分裂，每个细胞含有一至多个细胞核。横隔膜可以使相邻细胞之间的物质相互沟通。一至多个细胞核。横隔膜可以使相邻细胞之间的物质相互沟通。如曲霉和青霉。如曲霉和青霉。n n无隔菌丝：菌丝中无横膈膜，整个细胞是一个单细胞，菌：菌丝中无横膈膜，整个细胞是一个单细胞，菌丝内有许多核，在生长过程中只有核的分裂和原生质体质量的丝内有许多核，在生长过程中只有核的分裂和原生质体质量的增加，没有细胞数目的增多。如毛霉和根霉。增加，没有细胞数目的增多。如毛霉和根霉。第三十三页，讲稿共五十八页哦(1)nonseptate(2)septate第三十四页，讲稿共五十八页哦繁殖方式繁殖方式n n无性繁殖：无性繁殖：n n芽生孢子芽生孢子n n节孢子节孢子n n孢囊孢子孢囊孢子n n后垣孢子后垣孢子n n分生孢子分生孢子n n有性繁殖：有性繁殖：n n卵孢子卵孢子n n接合孢子接合孢子n n子囊孢子子囊孢子第三十五页，讲稿共五十八页哦Sporangiospores 孢囊孢子（孢囊孢子（Sporangiospores are Sporangiospores are formed within a sporangium formed within a sporangium）第三十六页，讲稿共五十八页哦节孢子Arthrospores第三十七页，讲稿共五十八页哦分生孢子分生孢子分生孢子分生孢子ConidiosporesConidiospores第三十八页，讲稿共五十八页哦卵孢子卵孢子（OosporesOospores）antheridiumantheridiumoospheresoospheresoosporesoosporesoogoniumoogoniumOospores formation第三十九页，讲稿共五十八页哦接合孢子接合孢子 ZygosporesZygospores第四十页，讲稿共五十八页哦接合孢子接合孢子形成过程形成过程第四十一页，讲稿共五十八页哦子囊孢子子囊孢子 AscosporesAscospores第四十二页，讲稿共五十八页哦几种常见霉菌几种常见霉菌属属主要特征主要特征分布分布作用与用途作用与用途根霉属根霉属菌丝无隔菌丝无隔,单细胞单细胞迅速蔓延迅速蔓延,有假根有假根,孢子囊呈黑色孢子囊呈黑色,产产生孢子囊和接合生孢子囊和接合孢子孢子常长在淀粉类食常长在淀粉类食品上如馒头、面品上如馒头、面包、甘薯等包、甘薯等能将淀粉转化为能将淀粉转化为糖，用于生产糖糖，用于生产糖化酶，酿造甜酒化酶，酿造甜酒等等曲霉属曲霉属菌丝分隔，分生菌丝分隔，分生孢子梗顶端膨大，孢子梗顶端膨大，顶囊上生辐射状顶囊上生辐射状小梗菌落疏松、小梗菌落疏松、颜色多样颜色多样空气、谷物、土空气、谷物、土壤和各种有机物壤和各种有机物上上分解淀粉和蛋白分解淀粉和蛋白质能力强，用于质能力强，用于制曲、制醋、生制曲、制醋、生产柠檬酸、酶制产柠檬酸、酶制剂及糖化饲料等剂及糖化饲料等青霉属青霉属菌丝分隔，孢子菌丝分隔，孢子梗呈扫帚形，菌梗呈扫帚形，菌落由紧密到疏松，落由紧密到疏松，多呈蓝绿色多呈蓝绿色空气、土壤及物空气、土壤及物品上，腐烂的柑品上，腐烂的柑橘上更多橘上更多青霉素产生菌，青霉素产生菌，也用于制备农用也用于制备农用抗生素和发酵饲抗生素和发酵饲料料第四十三页，讲稿共五十八页哦根霉第四十四页，讲稿共五十八页哦 根霉的形态结构第四十五页，讲稿共五十八页哦曲霉曲霉曲霉曲霉第四十六页，讲稿共五十八页哦曲霉的形态结构曲霉的形态结构左侧分生孢子梗具有一层小梗；右侧分生孢子梗具左侧分生孢子梗具有一层小梗；右侧分生孢子梗具 有二层小梗有二层小梗第四十七页，讲稿共五十八页哦 青霉青霉第四十八页，讲稿共五十八页哦 青霉的形态结构 A A单轮型单轮型 B B非对称型非对称型 C对称二轮型对称二轮型第四十九页，讲稿共五十八页哦实验内容实验内容n人们设计了各种培养和观察方法，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌和霉菌自然生长状态下保持放线菌和霉菌自然生长状态下的形态特征。本实验采用插片法。的形态特征。本实验采用插片法。第五十页，讲稿共五十八页哦n n插片法插片法:倒平板倒平板插片插片接种接种培养培养镜镜检检记录绘图记录绘图 n n压印法压印法:倒平板倒平板划线接种划线接种挑取菌落挑取菌落加盖玻片加盖玻片镜检镜检记录绘图记录绘图n n 埋片法埋片法:倒琼脂倒琼脂切槽切槽接种接种培养培养镜镜检检记录绘图记录绘图 第五十一页，讲稿共五十八页哦n n倒平板倒平板倒平板倒平板 将培养基熔化后，倒将培养基熔化后，倒将培养基熔化后，倒将培养基熔化后，倒10-1210-1210-1210-12毫升左右于灭菌培养皿内，毫升左右于灭菌培养皿内，毫升左右于灭菌培养皿内，毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用凝固后使用凝固后使用凝固后使用.n n插片插片插片插片 将灭菌的盖玻片以将灭菌的盖玻片以将灭菌的盖玻片以将灭菌的盖玻片以45454545度角插入培养皿内的培养基中，插度角插入培养皿内的培养基中，插度角插入培养皿内的培养基中，插度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为入深约为入深约为入深约为1/21/2或或1/31/31/31/3。n n 接种与培养接种与培养接种与培养接种与培养 用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28282828培养培养3 37 7 7 7天。天。n n 观察观察 培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。直接在显微镜下观察。玻片上。直接在显微镜下观察。第五十二页，讲稿共五十八页哦关键步骤及注意事项关键步骤及注意事项n n倒平板要厚一些，接种时划线要密。倒平板要厚一些，接种时划线要密。n n插片时要有一定角度并与划线垂直。插片时要有一定角度并与划线垂直。n n观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，更换高倍镜观察。当视野，更换高倍镜观察。n n如果用如果用0.1%0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。后观察，效果会更好。第五十三页，讲稿共五十八页哦思考题思考题n n镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝生菌丝?n n你认为霉菌和放线菌菌丝的主要区别是什么你认为霉菌和放线菌菌丝的主要区别是什么？第五十四页，讲稿共五十八页哦 实验六、菌种保藏实验六、菌种保藏 几种常用的保藏方法：几种常用的保藏方法：几种常用的保藏方法：几种常用的保藏方法：1 1、传代培养法、传代培养法、传代培养法、传代培养法 保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基（用于厌氧细菌）培养好后，置（用于厌氧细菌）培养好后，置4C4C4C4C 冰箱中存放，冰箱中存放，定期进行传代培养、再存放。定期进行传代培养、再存放。可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石蜡来进一步延长保存期。蜡来进一步延长保存期。蜡来进一步延长保存期。蜡来进一步延长保存期。2 2 2 2、载体法、载体法、载体法、载体法 使生长合适的微生物吸附在一定的载体上进行干使生长合适的微生物吸附在一定的载体上进行干使生长合适的微生物吸附在一定的载体上进行干使生长合适的微生物吸附在一定的载体上进行干燥。燥。燥。燥。常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、磁珠和滤纸片等。磁珠和滤纸片等。磁珠和滤纸片等。磁珠和滤纸片等。第五十五页，讲稿共五十八页哦 3 3 3 3、悬液法、悬液法、悬液法、悬液法 将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。4 4 4 4、冷冻法、冷冻法、冷冻法、冷冻法 使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。包括低温法和液使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。包括低温法和液使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。包括低温法和液使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。包括低温法和液氮法。氮法。氮法。氮法。此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。注意控制降温速率此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。注意控制降温速率此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。注意控制降温速率此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。注意控制降温速率及保护剂的使用。及保护剂的使用。及保护剂的使用。及保护剂的使用。5 5 5 5、真空干燥法、真空干燥法、真空干燥法、真空干燥法 这类方法包括冷冻真空干燥法和这类方法包括冷冻真空干燥法和这类方法包括冷冻真空干燥法和这类方法包括冷冻真空干燥法和L L L L干燥法。干燥法。干燥法。干燥法。冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然后在低温状态下进行减压干燥。后在低温状态下进行减压干燥。后在低温状态下进行减压干燥。后在低温状态下进行减压干燥。L-L-L-L-干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在1010101020C20C20C20C 范围内进行真空干燥。范围内进行真空干燥。范围内进行真空干燥。范围内进行真空干燥。第五十六页，讲稿共五十八页哦 操作方法操作方法 1 1、斜面保藏法、斜面保藏法、斜面保藏法、斜面保藏法 将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待其充将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待其充分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好（棉塞换分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好（棉塞换成胶塞效果更好），置成胶塞效果更好），置4C4C冰箱中包藏。冰箱中包藏。保藏时间依微生物的种类而定。霉菌、放线菌保藏时间依微生物的种类而定。霉菌、放线菌保藏时间依微生物的种类而定。霉菌、放线菌保藏时间依微生物的种类而定。霉菌、放线菌及芽孢菌保存及芽孢菌保存及芽孢菌保存及芽孢菌保存2 24 4个月移种一次，酵母菌间隔两个月移种一次，酵母菌间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周传代一次。个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周传代一次。此法优点是操作简单、使用方便，缺点是保藏此法优点是操作简单、使用方便，缺点是保藏时间短、易被污染。时间短、易被污染。第五十七页，讲稿共五十八页哦 2 2、液体石蜡保藏法、液体石蜡保藏法 将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端其用量以高出斜面顶端1CM1CM为准，使菌种为准，使菌种与空气隔绝。与空气隔绝。将试管直立，置低温或室温下保存。将试管直立，置低温或室温下保存。此法实用且效果较好。霉菌、放线菌、此法实用且效果较好。霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏1 12 2年，普通细菌也可保藏年，普通细菌也可保藏1 1年左右。年左右。3 3、穿刺保藏法、穿刺保藏法 按穿刺接种方式培养菌种，菌种长好按穿刺接种方式培养菌种，菌种长好后用胶塞封严，置后用胶塞封严，置44冰箱存放。冰箱存放。第五十八页，讲稿共五十八页哦