梅毒实验室诊断课件.ppt

关于梅毒实验室诊断第1页，此课件共112页哦“性病”概念的演化v性病：是指通过性接触而发生传播的一组传染病。性病：是指通过性接触而发生传播的一组传染病。v2020世纪世纪7070年代以前年代以前经典性病（经典性病（venereal diseases,VDvenereal diseases,VD）包括：梅毒、淋病、软下疳等包括：梅毒、淋病、软下疳等v19751975年，年，WHOWHO性传播疾病（性传播疾病（sexually transmitted sexually transmitted diseases,STDdiseases,STD）v2020世纪世纪9090年代以后年代以后性传播感染（性传播感染（sexually transmitted sexually transmitted infections,STIinfections,STI），），包括：艾滋病、梅毒、淋病、包括：艾滋病、梅毒、淋病、CACA、GHGH等。等。第2页，此课件共112页哦历史的回顾v性病是一个历史悠久的疾病，多数认为梅毒是1505年由印度传入我国广东岭南。v梅毒是一个曾经广泛流行的性病，解放初期，估计的性病（主要是梅毒）患者约为1000万。v1954年之后，全国逐渐形成了一个“四级”皮肤性病防治体系。v1964年，实现了全国梅毒基本消灭的目标。第3页，此课件共112页哦性病死灰复燃v上世纪70年代末，改革开放后，性观念的改变性产业的出现性生活方式的变化高危人群规模在不断的增加，如：暗娼、男男性接触者、流动人口等。性病在我国死灰复燃，再度流行。第4页，此课件共112页哦现况v严重的公共卫生问题和社会问题；v临床认知水平不够，实验室诊断水平参差不齐；v实验室检测各流程存在不规范现象；v新的实验室诊断技术不断出现而又缺乏了解；v部分（如私人诊所）医疗工作存在过度诊疗或诊疗不规范，延误患者的最佳诊疗时机；v无症状感染者成为维系性病流行的重要的传染源。第5页，此课件共112页哦如何就目前高发的性病，尤其是对梅毒进行有效监测和控制？如何对高危人群及潜在易感人群进行筛查，主动发现无症状的性病感染者？如何确定感染的病原体种类？需要完善的实验室检测工作，包括检测能力建设和质量控制第6页，此课件共112页哦性病防治工作的重点 两个系统两个系统v 疫情监测系统v 实验室检测系统-实验室检测能力和质量控制 一个服务一个服务v 规范化医疗服务第7页，此课件共112页哦第8页，此课件共112页哦梅毒的定义v梅毒是由密螺旋体之一的梅毒螺旋体引起的一种慢性全身感染性疾病。是传统的性传播疾病之一。第9页，此课件共112页哦常用梅毒实验室检测方法v病原学检测v血清学检测第10页，此课件共112页哦病原学检查的原理v螺旋体进入人体后，在皮下黏膜增殖并沿淋巴管至附近的淋巴结经过24周的潜伏在感染部位形成硬下疳。数天至1周后淋巴结肿大。再以后经血液传播至全身，或孕妇的羊水中都有大量螺旋体的存在。因此，在梅毒病人的硬下疳、扁平湿疣等皮损以及梅毒病人肿大的淋巴结，梅毒孕妇的羊水，都可以采集标本来做此检查第11页，此课件共112页哦梅毒病原学检查的应用范围及标本采集v适用范围 病人出现的硬下疳、扁平湿疣、肿大的腹股沟淋巴结穿刺液、羊水穿刺液等。v标本采集：略第12页，此课件共112页哦梅毒病原学检查的方法v1、暗视野显微镜检查法v2、镀银染色检测法v3、刚果红负染色法第13页，此课件共112页哦暗视野检查法v仪器器材1、暗视野显微镜2、无菌纱布3、不锈钢刮刀4、灭菌棉拭子5、灭菌生理盐水6、载玻片、盖玻片第14页，此课件共112页哦暗视野检查法v标本收集1、皮肤黏膜组织液2、淋巴液3、羊水第15页，此课件共112页哦暗视野检查法v检测流程1、制片2、暗视野显微镜的使用及观察第16页，此课件共112页哦暗视野检查法v结果判读 发现有纤细、白色、有折光的螺旋状微生物，具有旋转、蛇行及伸缩等特征性的运动方式，可判断为梅毒螺旋体v报告 暗视野显微镜下发现有上述特征的螺旋体报告“发现苍白螺旋体”第17页，此课件共112页哦暗视野检查法v临床意义1、检测阳性，在临床上可确证梅毒；2、如未能发现梅毒螺旋体，不能排除诊断；3、无论暗视野显微镜检查的结果如何，都应进一步进行血清学检测。第18页，此课件共112页哦镀银染色检查v检测原理 梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染成棕黑色，可以从普通高倍显微镜下观察到梅毒螺旋体。第19页，此课件共112页哦镀银染色检查v仪器器材1、普通显微镜2、加拿大树胶3、罗吉固定液4、鞣酸媒染剂5、Fontana银溶液6、无水乙醇7、无菌纱布等取材用品第20页，此课件共112页哦镀银染色检查v操作流程1、涂片干燥：自然干燥，不可用火固定；2、固定：2-3分钟3、洗涤：无水乙醇4、媒染：微加热、30秒5、银染：水洗、微加热、30秒6、镜检：水洗待干、封片镜检第21页，此课件共112页哦镀银染色检查v结果判读 在显微镜下观察到染成棕褐色的螺旋体状生物，可判断为梅毒螺旋体。v报告 见到染成棕褐色梅毒螺旋体报告阳性结果，否则报告阴性结果。第22页，此课件共112页哦刚果红负染色法v原理：刚果红是一种酸碱指示剂在涂有标本的玻片上刚果红将玻片染色，而螺旋体、细菌、细胞、真菌等生物体形成占位而不着色。再用盐酸蒸气将刚果红的红色熏成蓝色方便观察。第23页，此课件共112页哦刚果红负染色法v器材及试剂：1、普通显微镜2、1%的刚果红水溶液、3、浓盐酸。第24页，此课件共112页哦刚果红负染色法v结果判读：在蓝黑色背景中发现白色纤细的螺旋状微生物螺距数量为平均614个，可判断为“苍白螺旋体”v报告 发现上述特征螺旋体结构微生物，可报告“发现苍白螺旋体”第25页，此课件共112页哦第26页，此课件共112页哦第27页，此课件共112页哦第28页，此课件共112页哦第29页，此课件共112页哦v梅毒血清学检测分类梅毒血清学检测分类v（1 1）非梅毒螺旋体抗原血清学试验）非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体非特异性梅毒抗体）v（2 2）梅毒螺旋体抗原血清学试验）梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体特异性梅毒抗体）第30页，此课件共112页哦非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理v梅毒螺旋体一旦感染人体，在梅毒螺旋体一旦感染人体，在3-43-4周产生抗类脂质抗原的周产生抗类脂质抗原的IgMIgM和和IgGIgG的的混合抗体（也叫反应素）。混合抗体（也叫反应素）。v未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转阴。反应素可以逐渐减少至转阴。第31页，此课件共112页哦非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理v反应素与心磷脂形成抗原抗体反应，卵磷脂可加强心磷脂的抗反应素与心磷脂形成抗原抗体反应，卵磷脂可加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强抗原的敏感性。原性，胆固醇可增强抗原的敏感性。v心磷脂、卵磷脂及胆固醇都是醇溶性脂类、遇水形成胶体溶液，胆心磷脂、卵磷脂及胆固醇都是醇溶性脂类、遇水形成胶体溶液，胆固醇遇水形成结晶。固醇遇水形成结晶。第32页，此课件共112页哦非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图第33页，此课件共112页哦非梅毒螺旋体抗原血清学试验方法包括：包括：（1 1）快速血浆反应素环状卡片试验（）快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)RPR)（2 2）甲苯胺红不加热血清试验（）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST)TRUST)（3 3）性病研究实验室试验（）性病研究实验室试验（VDRLVDRL）所用抗原基本成分是：心磷脂、卵磷脂和胆固醇第34页，此课件共112页哦VDRLVDRL试验试验抗原组成及特点抗原组成及特点v抗原组成：抗原组成：0.03%0.03%心磷脂、心磷脂、0.21%0.21%卵磷脂、卵磷脂、0.90%0.90%胆固醇胆固醇v抗原需新鲜配制，不能保存v待检血清需灭活v需要在显微镜下观察结果v目前主要用于脑脊液检查，特异性较高v是诊断神经梅毒的重要依据，但检测阴性不能排除神经梅毒第35页，此课件共112页哦VDRLVDRL试验试验仪器材料仪器材料1 1、水平旋转仪、显微镜、水平旋转仪、显微镜2 2、试剂盒：、试剂盒：VDRLVDRL抗原原液、抗原原液、VDRLVDRL缓冲液、抗原滴管及针缓冲液、抗原滴管及针头、带直径为头、带直径为14mm14mm漆圈的玻璃反应板、漆圈的玻璃反应板、VDRLVDRL试验结果判试验结果判读用参照涂片读用参照涂片3 3、30ml30ml平底玻璃小瓶、生理盐水平底玻璃小瓶、生理盐水第36页，此课件共112页哦VDRLVDRL试验试验标本采集标本采集1 1、血清：新鲜血清或冻存血清；、血清：新鲜血清或冻存血清；2 2、脑脊液：采用腰穿术获得、脑脊液：采用腰穿术获得 一般来说，送检一般来说，送检VDRLVDRL试验的脑脊液应采集两份，一试验的脑脊液应采集两份，一份作脑脊液常规（白细胞份作脑脊液常规（白细胞10*106/L、蛋白含量、蛋白含量500mg/L）测定，检测结果与另一份用作）测定，检测结果与另一份用作VDRLVDRL试验的试验的脑脊液样本同时送实验室。脑脊液样本同时送实验室。第37页，此课件共112页哦VDRLVDRL试验试验操作步骤操作步骤1 1、VDRLVDRL抗原配制；抗原配制；2 2、VDRLVDRL玻片定性试验玻片定性试验（1 1）灭活：血清标本）灭活：血清标本5656灭活灭活3030分钟；分钟；（2 2）吸样：吸取）吸样：吸取0.05ml0.05ml血清放入反应板圈中，并涂布于整个圈内；血清放入反应板圈中，并涂布于整个圈内；（3 3）加抗原：用标准针头加入）加抗原：用标准针头加入1 1滴抗原；滴抗原；（4 4）反应：置水平旋转仪上旋转）反应：置水平旋转仪上旋转4min4min，18051805次次/min/min，立即置低，立即置低倍显微镜下观察。倍显微镜下观察。第38页，此课件共112页哦VDRLVDRL试验试验操作步骤操作步骤3 3、VDRLVDRL定量试验定量试验（1 1）加稀释液：在圈内加入）加稀释液：在圈内加入0.05ml0.05ml生理盐水；生理盐水；（2 2）样本稀释：吸取）样本稀释：吸取0.05ml0.05ml样本与第一个圈内生理盐水混合，混样本与第一个圈内生理盐水混合，混匀后，吸取匀后，吸取0.05ml0.05ml加至第二个圈，做系列稀释，并将稀释样本涂布加至第二个圈，做系列稀释，并将稀释样本涂布于整个圈内于整个圈内（3 3）同定性试验的（）同定性试验的（3 3）、（）、（4 4）。）。第39页，此课件共112页哦VDRLVDRL试验试验结果判读结果判读凝集反应强度分级：凝集反应强度分级：3+4+3+4+：镜下见中等大小或大的絮状物，液体清亮；：镜下见中等大小或大的絮状物，液体清亮；2+2+：絮状物较小，液体较清亮；：絮状物较小，液体较清亮；1+1+：絮状物较小，均匀分布，液体浑浊；：絮状物较小，均匀分布，液体浑浊；：抗原复合物颗粒稍粗；：抗原复合物颗粒稍粗；v ：抗原颗粒均匀、细小。：抗原颗粒均匀、细小。定性试验：镜下可见定性试验：镜下可见1+4+1+4+的絮状凝集物为阳性，不产生凝集为阴的絮状凝集物为阳性，不产生凝集为阴性；性；定量试验：镜下可见絮状凝集物的样本最高稀释倍数为其滴度。定量试验：镜下可见絮状凝集物的样本最高稀释倍数为其滴度。第40页，此课件共112页哦VDRLVDRL试验试验临床意义临床意义 脑脊液脑脊液VDRLVDRL试验是神经梅毒的标准试验，阳性结果可诊断为试验是神经梅毒的标准试验，阳性结果可诊断为神经梅毒，但阴性结果不能排除诊断，存在假阴性。神经梅毒，但阴性结果不能排除诊断，存在假阴性。第41页，此课件共112页哦RPRRPR试验试验v在在VDRLVDRL试剂成分的基础上，加入黑色活性碳颗粒，作为凝集的指示物；试剂成分的基础上，加入黑色活性碳颗粒，作为凝集的指示物；与待检血清（浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的黑色絮状物。与待检血清（浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的黑色絮状物。v用白色硬纸片代替玻片；用白色硬纸片代替玻片；v血清不需要灭活；血清不需要灭活；v不需要显微镜观察结果不需要显微镜观察结果v可作定性和定量试验可作定性和定量试验第42页，此课件共112页哦TRUSTTRUST试验试验v原理和成分以及操作与原理和成分以及操作与RPRRPR试验相同试验相同v用红色的甲苯胺红替代了活性碳颗粒，在与待检血清（血用红色的甲苯胺红替代了活性碳颗粒，在与待检血清（血浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的红色絮状物红色絮状物第43页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)样本类型：血清、血浆、脑脊液样本类型：血清、血浆、脑脊液样本保存：短期（样本保存：短期（1 1周）内进行检测的可存放于周）内进行检测的可存放于2-82-8；保存一周以上的应置于保存一周以上的应置于-20-20 以下冰箱保存；以下冰箱保存；长期保存应置于长期保存应置于-70-70 以下冰箱中保存。以下冰箱中保存。第44页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)v样本运送：样本运送：应按照生物安全要求进行包装和运送。应按照生物安全要求进行包装和运送。（1 1）第一层容器（如试管）第一层容器（如试管）（2 2）第二层容器）第二层容器 （3 3）第三层容器）第三层容器第45页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)样本接收：样本接收：（1 1）检查标本管有无破损和溢漏；）检查标本管有无破损和溢漏；（2 2）核对标本与送检单；）核对标本与送检单；（3 3）检查标本的状况）检查标本的状况;（4 4）如标本不能接收，怎么处理？）如标本不能接收，怎么处理？（5 5）样本交接应在接收单上双方签字确认）样本交接应在接收单上双方签字确认注意：应把每一份样本当作强阳性样本来处置和对待！注意：应把每一份样本当作强阳性样本来处置和对待！第46页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)仪器：水平旋转仪（要求？）仪器：水平旋转仪（要求？）试剂盒：试剂盒：（1 1）含有活性碳的抗原悬液；）含有活性碳的抗原悬液；（2 2）一个标定的）一个标定的9 9号针头（号针头（0.9mm0.9mm）；）；（3 3）压印有）压印有18mm18mm直径圆圈的封塑环状卡片；直径圆圈的封塑环状卡片；（4 4）内部对照；）内部对照；为了保证试验结果的可靠性，以及每为了保证试验结果的可靠性，以及每批试剂间的可比性，应制备外部对照血清批试剂间的可比性，应制备外部对照血清（5 5）50ul50ul量程移液器和吸头量程移液器和吸头（6 6）0.9%0.9%无菌生理盐水无菌生理盐水第47页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)定性试验定性试验（1 1）试剂准备：复室温）试剂准备：复室温3030分钟分钟（2 2）加标本：样本量）加标本：样本量50ul50ul；（3 3）加抗原：抗原量（）加抗原：抗原量（60601滴滴/ml，约，约17ul/滴）滴）（4 4）反应：反应时间）反应：反应时间8min8min（5 5）读取结果）读取结果第48页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)定量试验定量试验抗原抗原1 1滴滴 抗原抗原1 1滴滴 抗原抗原1 1滴滴 抗原抗原1 1滴滴 抗原抗原1 1滴滴50ul标本标本1:1（全血）（全血）50ul标本标本50ulN.S1:250ulN.S1:450ulN.S1:850ulN.S1:16吸取50ul吸取50ul吸取50ul弃掉50ul标本稀释顺序涂布顺序第49页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)结果判读结果判读判读凝集反应强度分级：判读凝集反应强度分级：3+-4+3+-4+：圆圈内出现中到大的黑色絮状物，液体清亮；：圆圈内出现中到大的黑色絮状物，液体清亮；2+2+：圆圈内出现小到中的黑色絮状物，液体较清亮；：圆圈内出现小到中的黑色絮状物，液体较清亮；1+1+：圆圈内出现小的黑色絮状物，液体浑浊；：圆圈内出现小的黑色絮状物，液体浑浊；-：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散。：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散。第50页，此课件共112页哦第51页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)结果报告结果报告（1 1）定性试验定性试验：出现出现1+-4+1+-4+强度的凝集反应报告阳性（强度的凝集反应报告阳性（+）不产生凝集反应报告阴性（不产生凝集反应报告阴性（-）（2 2）定量试验定量试验：出现凝集反应的血清最高稀释倍数为抗体滴度，结果报告出现凝集反应的血清最高稀释倍数为抗体滴度，结果报告滴度为滴度为1 1：X X。也可将每个稀释度的反应强度依次报告，如也可将每个稀释度的反应强度依次报告，如1:11:1（全血）（全血）（4+4+）、）、1:21:2（3+3+）、）、1:41:4（2+2+）、）、1:81:8（1+1+）、）、1:161:16（-）。有利于疗）。有利于疗效观察效观察第52页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)质量控制质量控制（1 1）内部对照：内部对照：试剂盒含有的阳性质控血清，用于检查该盒试剂的有效性。试剂盒含有的阳性质控血清，用于检查该盒试剂的有效性。新开试剂，以及每天工作开始前或每批试验开始前，应常新开试剂，以及每天工作开始前或每批试验开始前，应常规进行内部对照质控。规进行内部对照质控。（2 2）外部对照：外部对照：可采取自留阳性标本用作外部对照。可采取自留阳性标本用作外部对照。新开试剂或更换试剂批次，应同时进行外部对照试验，用于新开试剂或更换试剂批次，应同时进行外部对照试验，用于检查每批试验结果的重复性和可比性。检查每批试验结果的重复性和可比性。第53页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)质量控制质量控制（3 3）移液器质量控制：移液器质量控制：强检和定期校准；强检和定期校准；（4 4）旋转仪质量控制旋转仪质量控制：检查转速；：检查转速；（5 5）人员的质量控制人员的质量控制：有经验人员的指导下开展工作、双人核：有经验人员的指导下开展工作、双人核对结果；对结果；（6 6）操作的质量控制操作的质量控制：反复操作、正确操作。：反复操作、正确操作。第54页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)临床意义临床意义（1 1）产生的抗类脂质抗体，未经治疗可长期存在；）产生的抗类脂质抗体，未经治疗可长期存在；（2 2）经适当治疗后，抗体可以逐渐减少至转为阴性；）经适当治疗后，抗体可以逐渐减少至转为阴性；（3 3）定性试验结果可用于现症梅毒诊断；）定性试验结果可用于现症梅毒诊断；（4 4）定量试验结果可用于疗效观察及判愈。）定量试验结果可用于疗效观察及判愈。第55页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)梅毒血清反应假阳性梅毒血清反应假阳性 即非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性的现象。（1 1）技术性假阳性反应技术性假阳性反应 由于标本保存不当（如细菌污染或溶血）由于标本保存不当（如细菌污染或溶血）、试剂质量差或过期、或试验操作错误等所造成。、试剂质量差或过期、或试验操作错误等所造成。（2 2）生物学假阳性反应生物学假阳性反应 非梅毒螺旋体抗原血清学试验采用的抗原为非梅毒螺旋体抗原血清学试验采用的抗原为脂类混合物，所检测的抗心磷脂抗体亦可见于其他多种疾病，如自脂类混合物，所检测的抗心磷脂抗体亦可见于其他多种疾病，如自身免疫性疾病、怀孕的妇女，麻风病人。身免疫性疾病、怀孕的妇女，麻风病人。第56页，此课件共112页哦v 王千秋教授等检测了10546份血清样本，RPR假阳性率为0.21%（15/7002）。v假阳性中：10例为有高危性行为的常规检查者 2例孕妇 皮肌炎、尖锐湿疣、龟头破溃各1例第57页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)梅毒血清反应假阳性的处理梅毒血清反应假阳性的处理（1 1）技术性假阳性反应：实验前检查试剂的有效性、重）技术性假阳性反应：实验前检查试剂的有效性、重复操作排除人为操作错误等；复操作排除人为操作错误等；（2 2）生物学假阳性反应：应做）生物学假阳性反应：应做TPPA(TPHA)TPPA(TPHA)等试验进行排等试验进行排除除 单一RPR（非特异性抗体血清试验）结果阳性，不能作为梅毒的确定性诊断试验结果，需用梅毒螺旋体抗原血清试验进行确证。第58页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)前带现象前带现象 指非梅毒螺旋体抗原血清学试验中，有时血清中存指非梅毒螺旋体抗原血清学试验中，有时血清中存在高浓度的反应素导致抗原抗体浓度不匹配，出现弱在高浓度的反应素导致抗原抗体浓度不匹配，出现弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又像早期阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又像早期梅毒（一期和二期），此时将血清稀释后再进行试验，梅毒（一期和二期），此时将血清稀释后再进行试验，可出现阳性结果的现象。可出现阳性结果的现象。第59页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)血清固定血清固定 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。阴转。早期的血清固定常与治疗不足或不规则治疗、复发、再感早期的血清固定常与治疗不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。染或有神经系统梅毒等因素有关。病期不明的潜伏梅毒患者血清固定发生率显著增高，应加强病期不明的潜伏梅毒患者血清固定发生率显著增高，应加强对潜伏梅毒的筛查和及时治疗。对潜伏梅毒的筛查和及时治疗。第60页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)RPR用于脑脊液的检测，近年来也有不少研究。用于脑脊液的检测，近年来也有不少研究。有作者在对有作者在对154例各期梅毒患者及例各期梅毒患者及90例非梅毒神经系统疾病患例非梅毒神经系统疾病患者的脑脊液进行试验并作统计分析：者的脑脊液进行试验并作统计分析：RPR 脑脊液敏感性为脑脊液敏感性为99.1%、特异性为、特异性为77.8%VDRL 脑脊液敏感性为脑脊液敏感性为98.6%、特异性为、特异性为70.4 结论：结论：RPR可以代替可以代替VDRL用于神经梅毒的诊断。用于神经梅毒的诊断。但是？但是？第61页，此课件共112页哦快速血浆反应素环状卡片试验（RPR)注意事项注意事项1 1、使用无菌生理盐水；标本无严重脂血、溶血和细菌污染、使用无菌生理盐水；标本无严重脂血、溶血和细菌污染2 2、正确操作，移液器吸头保证在血清、正确操作，移液器吸头保证在血清/血浆液面以下但不能接触反血浆液面以下但不能接触反应纸板；防止产生气泡；应纸板；防止产生气泡；3 3、每批次标本数量不宜过多，防止干燥或血清水分挥发，、每批次标本数量不宜过多，防止干燥或血清水分挥发，4 4、实验前应检查水平旋转仪转速，常规进行质量控制；、实验前应检查水平旋转仪转速，常规进行质量控制；5 5、稀释后摊开液面是顺序应从低浓度向高浓度进行；、稀释后摊开液面是顺序应从低浓度向高浓度进行；6 6、反应完毕应及时观察结果。、反应完毕应及时观察结果。第62页，此课件共112页哦梅毒螺旋体抗原血清学试验试验原理：试验原理：以梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患者血中特异以梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者几感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者几乎终生阳性。乎终生阳性。第63页，此课件共112页哦梅毒螺旋体抗原血清学试验试验方法：试验方法：（1 1）梅毒螺旋体血球凝集试验（）梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHATPHA）（2 2）梅毒螺旋体颗粒凝集试验（）梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPATPPA）（3 3）梅毒酶联免疫吸附试验（）梅毒酶联免疫吸附试验（ELISAELISA）（4 4）梅毒免疫层析法）梅毒免疫层析法梅毒快速检测（梅毒快速检测（RTRT）（5 5）荧光螺旋体抗体吸收试验（）荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABSFTA-ABS）（6 6）化学发光免疫分析法（）化学发光免疫分析法（CLIACLIA）（7 7）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WBWB）第64页，此课件共112页哦TPPA/TPHATPPA/TPHA 感染梅毒螺旋体后感染梅毒螺旋体后2-42-4周内，机体会产生特异的梅毒螺旋体周内，机体会产生特异的梅毒螺旋体抗体。抗体。TPPATPPA具有较高的敏感性和特异性。具有较高的敏感性和特异性。是目前是目前WHOWHO公认的梅毒抗原血清学试验的金标准。公认的梅毒抗原血清学试验的金标准。第65页，此课件共112页哦TPPA试验原理图第66页，此课件共112页哦TPPATPPA试验仪器耗材试验仪器耗材（1 1）试剂盒）试剂盒 “A”A”溶解液：用于溶解致敏颗粒溶解液：用于溶解致敏颗粒“C”C”和非致敏颗粒和非致敏颗粒“D”D”“B”“B”血清稀释液：用于血清标本的稀释血清稀释液：用于血清标本的稀释 “C”C”冻干的致敏颗粒冻干的致敏颗粒 “D”D”冻干的非致敏颗粒冻干的非致敏颗粒 “E”E”阳性质控血清：为含梅毒抗体的兔血清制品，最终滴度阳性质控血清：为含梅毒抗体的兔血清制品，最终滴度1:3201:320，（2 2）微量振荡器）微量振荡器（3 3）移液器及吸头）移液器及吸头（4 4）保湿盒）保湿盒 第67页，此课件共112页哦TPPATPPA试验检验流程试验检验流程（1 1）试剂准备：试验前复温）试剂准备：试验前复温3030分钟分钟（2 2）加稀释液（）加稀释液（B B液）液）（3 3）标本稀释）标本稀释（4 4）加致敏、未致敏颗粒）加致敏、未致敏颗粒（5 5）混合：微量振荡器震荡）混合：微量振荡器震荡3030秒秒（6 6）反应：置湿盒，）反应：置湿盒，15-3015-30至少至少2小时小时（7 7）观察凝集反应强度）观察凝集反应强度第68页，此课件共112页哦TPPATPPA试验检验流程试验检验流程稀释液100ul标本25ul1:5稀释液25ul1:10稀释液25ul1:20稀释液25ul1:40吸取25ul吸取25ul吸取25ul弃掉25ul未致敏粒子未致敏粒子致敏粒子致敏粒子第69页，此课件共112页哦TPPATPPA试验结果判读试验结果判读 首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集（第首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集（第3 3孔）孔）如出现凝集，则为无效试验。如出现凝集，则为无效试验。如无凝集，则根据致敏粒子反应孔标本与致敏粒子是否如无凝集，则根据致敏粒子反应孔标本与致敏粒子是否产生产生1+-4+1+-4+凝集反应，判断结果。凝集反应，判断结果。第70页，此课件共112页哦TPPATPPA凝集反应分级凝集反应分级4+4+：粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠；：粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠；3+3+：粒子光滑覆盖大部分孔底；：粒子光滑覆盖大部分孔底；2+2+：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环；：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环；1+1+：粒子光滑聚集覆盖孔子，周围有一明显细胞环；：粒子光滑聚集覆盖孔子，周围有一明显细胞环；：粒子沉集孔底，中央形成一小点；：粒子沉集孔底，中央形成一小点；：粒子紧密沉积孔底中央。：粒子紧密沉积孔底中央。第71页，此课件共112页哦第72页，此课件共112页哦TPPATPPA结果报告结果报告 未致敏粒子反应孔不出现凝集，致敏粒子反应孔出现凝集反未致敏粒子反应孔不出现凝集，致敏粒子反应孔出现凝集反应报告阳性（应报告阳性（+）；）；未致敏粒子与致敏粒子反应孔均未出现凝集反应报告阴性（未致敏粒子与致敏粒子反应孔均未出现凝集反应报告阴性（-）第73页，此课件共112页哦TPPATPPA重吸收试验重吸收试验 如标本与非致敏和致敏颗粒均产生凝集者，标本需作重吸收试验：如标本与非致敏和致敏颗粒均产生凝集者，标本需作重吸收试验：（1 1）加）加0.95ml0.95ml非致敏颗粒溶液于小试管内；非致敏颗粒溶液于小试管内；（2 2）加入）加入0.05ml0.05ml血清充分混匀，置室温吸收血清充分混匀，置室温吸收3030分钟以上；分钟以上；（3 3）2000r/min2000r/min离心离心5 5分钟，吸取上清液分钟，吸取上清液0.05ml0.05ml加入第加入第3 3孔；孔；（4 4）第）第4 4孔加血清稀释液孔加血清稀释液25ul25ul；（5 5）孔）孔3 3吸取吸取25ul25ul至孔至孔4 4，混匀后弃去，混匀后弃去25ul25ul；（6 6）分别加致敏与未致敏颗粒（试验方法同上）分别加致敏与未致敏颗粒（试验方法同上）第74页，此课件共112页哦TPPATPPA临床意义临床意义1 1、特异性高（、特异性高（98%98%），阳性可确证为现症或既往感染。），阳性可确证为现症或既往感染。2 2、终生阳性，不能作为疗效观察的指标。、终生阳性，不能作为疗效观察的指标。3 3、不能区分现症或既往感染。、不能区分现症或既往感染。第75页，此课件共112页哦梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（TP-ELISATP-ELISA）是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和酶是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和酶标记的单克隆羊抗人免疫球蛋白抗体或酶标记的梅毒螺旋体基因标记的单克隆羊抗人免疫球蛋白抗体或酶标记的梅毒螺旋体基因重组抗原，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶标仪判定重组抗原，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶标仪判定阳性反应。阳性反应。可用于大样本的血清检测可用于大样本的血清检测。第76页，此课件共112页哦TP-ELISATP-ELISA（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）试验原理：是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上试验原理：是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上待检血清或血浆和酶标记的梅毒螺旋体基因重组抗原，形成抗待检血清或血浆和酶标记的梅毒螺旋体基因重组抗原，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶标仪判定阳性反应。原抗体复合物与酶标记物结合，用酶标仪判定阳性反应。第77页，此课件共112页哦TP-ELISATP-ELISA（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）检测流程：与其他检测流程：与其他ELISAELISA检测方法相同，按试剂盒检测方法相同，按试剂盒说明书进行对照的设置及检测。说明书进行对照的设置及检测。结果判读及报告：结果判读及报告：1 1、根据阳性、阴性对照的、根据阳性、阴性对照的ODOD值是否在规定的数值范值是否在规定的数值范围内以判断试验的有效性，并根据阳性、阴性围内以判断试验的有效性，并根据阳性、阴性ODOD值设值设定阈值（定阈值（cut-off);cut-off);2 2、标本、标本ODOD值大于或等于值大于或等于cut-offcut-off值报告阳性，否则值报告阳性，否则报告阴性。报告阴性。第78页，此课件共112页哦TP-ELISATP-ELISA（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）（双抗原夹心酶联免疫吸附试验）临床意义：临床意义：1 1、同、同TPPATPPA，可用于非梅毒螺旋体血清试验阳性标本的确证试验；，可用于非梅毒螺旋体血清试验阳性标本的确证试验；2 2、可用于大样本筛查检测，但阳性标本需进一步进行非梅毒、可用于大样本筛查检测，但阳性标本需进一步进行非梅毒螺旋体血清试验复检，确证是否为梅毒现症感染者；螺旋体血清试验复检，确证是否为梅毒现症感染者；3 3、如对结果存在疑问，可用、如对结果存在疑问，可用TPPATPPA或其他方法进行重复检测。或其他方法进行重复检测。第79页，此课件共112页哦关于TP重组抗原v 目前已重组的TP抗原20多种，包括：TP15KD、4D、TP24、G17等。G17的反应性比较高，目前的检测试剂盒趋向于将2种或2种以上重组抗原联合使用，综合其特性，从而获得更高的特异性和敏感性。第80页，此课件共112页哦梅毒螺旋体抗体快速免疫层析检测法（梅毒螺旋体抗体快速免疫层析检测法（TP-RTTP-RT）检测原理：检测原理：以硝酸纤维素膜为载体，将重组的梅毒螺旋体抗原固定在膜上，以硝酸纤维素膜为载体，将重组的梅毒螺旋体抗原固定在膜上，待检标本与标记的梅毒螺旋体特异性抗原结合并沿着固相载体迁移，待检标本与标记的梅毒螺旋体特异性抗原结合并沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位形成重组抗原阳性结果在膜上抗原部位形成重组抗原-特异性抗体特异性抗体-标记的特异性标记的特异性抗原复合物，显示出有色条带，可直接判读结果。抗原复合物，显示出有色条带，可直接判读结果。第81页，此课件共112页哦TP-RTTP-RT检测流程：检测流程：全血和血清全血和血清/血浆标本检测步骤不一样，但基本流血浆标本检测步骤不一样，但基本流程为：程为：1 1、加样、加样 2 2、加缓冲液、加缓冲液 3 3、反应、反应 4 4、判读结果、判读结果第82页，此课件共112页哦TP-RTTP-RT临床意义：临床意义：1 1、同、同TPPATPPA、ELISAELISA。可采用全血检测，适合于单样本快。可采用全血检测，适合于单样本快速筛查；速筛查；2 2、简单、快速，如结果存在疑问，可用、简单、快速，如结果存在疑问，可用TPPATPPA或其他方或其他方法进行重复试验。法进行重复试验。第83页，此课件共112页哦TP-RTTP-RT注意事项：注意事项：1 1、如出现无效结果，应再次仔细阅读说明书，并用新的试条重、如出现无效结果，应再次仔细阅读说明书，并用新的试条重新测试，如问题仍然存在，应停止使用该批号产品；新测试，如问题仍然存在，应停止使用该批号产品；2 2、注意试剂盒的储存条件，以及反应的温度条件；、注意试剂盒的储存条件，以及反应的温度条件；3 3、按试剂盒说明书，反应时间应足够、加样量也要准确。、按试剂盒说明书，反应时间应足够、加样量也要准确。第84页，此课件共112页哦梅毒螺旋体抗原血清学试验第85页，此课件共112页哦梅毒螺旋体荧光抗体吸收试验（梅毒螺旋体荧光抗体吸收试验（FTA-ABSFTA-ABS）检测原理：检测原理：以梅毒螺旋体作为抗原，与经吸收剂吸收的梅毒血清以梅毒螺旋体作为抗原，与经吸收剂吸收的梅毒血清抗体反应形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（抗体反应形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FITCFITC）标记的抗人免疫球蛋白，形成带有荧光的抗原抗体复合标记的抗人免疫球蛋白，形成带有荧光的抗原抗体复合物，在荧光显微镜下螺旋体显出绿色荧光。物，在荧光显微镜下螺旋体显出绿色荧光。第86页，此课件共112页哦FTA-ABS FTA-ABS 临床意义：临床意义：FTA-ABSFTA-ABS是梅毒螺旋体抗原血清试验的是梅毒螺旋体抗原血清试验的“金标准金标准”，其临，其临床意义同床意义同TPPATPPA试验。试验。脑脊液的脑脊液的FTA-ABSFTA-ABS试验阴性可排除神经梅毒，但特异性不高，试验阴性可排除神经梅毒，但特异性不高，存在假阳性。存在假阳性。操作繁琐、费时，需要高质量荧光显微镜和技术熟练的操作操作繁琐、费时，需要高质量荧光显微镜和技术熟练的操作人员，一般不作为常规临床实验室检测方法。人员，一般不作为常规临床实验室检测方法。第87页，此课件共112页哦v梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析法（梅毒螺旋体抗体化学发光免疫分析法（CLIA)CLIA)检测原理：检测原理：利用双抗原夹心法化学发光免疫分析原理，采用多利用双抗原夹心法化学发光免疫分析原理，采用多种梅毒螺旋体特异抗原包被固相发光微孔板，用辣根过种梅毒螺旋体特异抗原包被固相发光微孔板，用辣根过氧化物酶标记相同蛋白抗原作为标记抗原，与样本中梅氧化物酶标记相同蛋白抗原作为标记抗原，与样本中梅毒螺旋体毒螺旋体 抗体形成双抗原夹心复合物后，加入