生物样品分析测定幻灯片.ppt

第1页，共17页，编辑于2022年，星期一第一节第一节 概述概述 生物药物分析的特点生物药物分析的特点n生物样品中被测组分的存在形式多样w原型药（游离型）、结合型、代谢物、缀合物等n被测组分浓度低（10-6-10-9g/ml），变化幅度大n样品干扰物质多，部分样品稳定差n样品量少n要求较快提供结果n测定数据的处理和阐明有时不太容易第2页，共17页，编辑于2022年，星期一第二第二节节 药物在生物体内的存在状态与生物转化药物在生物体内的存在状态与生物转化药物在生物体内的存在状态药物在生物体内的存在状态药物代谢药物代谢保证临床用药的安全、合理和有效n药物代谢的部位：药物代谢的部位：肝脏、肾、脾、肺、肠粘膜、胎盘等n药物代谢反应药物代谢反应w第一阶段（一相）：第一阶段（一相）：P450等催化下的氧化、还原、水解等反应，增大极性w第二阶段（二相）：第二阶段（二相）：与葡萄糖醛酸、硫酸盐等结合，进一步增大极性，随尿排出第3页，共17页，编辑于2022年，星期一第三第三节节 生物生物样样品的制品的制备备 常用生物样品常用生物样品n生物样品的选取原则生物样品的选取原则w能够反映出浓度与药效之间的关系能够反映出浓度与药效之间的关系w易于获得易于获得w便于处理便于处理w根据不同目的和要求进行选取根据不同目的和要求进行选取第4页，共17页，编辑于2022年，星期一第三第三节节 生物样品的制备生物样品的制备 常用生物样品常用生物样品n常用生物样品的种类、特点与采集常用生物样品的种类、特点与采集 血浆(plasma)w血样血样 血清(serum)全血(whole blood)w尿液尿液(urine)用于药物剂量回收、药物肾清除率及生物利用度的研究 尿液药物浓度变化大，应测定一定时间内尿中药 物总量。尿液与血液中药物的相关性差。尿中药物大多呈缀合状态。第5页，共17页，编辑于2022年，星期一第三第三节节 生物样品的制备生物样品的制备 常用生物样品常用生物样品n常用生物样品的种类、特点与采集常用生物样品的种类、特点与采集w唾液唾液(saliva)用于药物浓度监测和药代动力学研究w其他其他动物脏器组织匀浆等n样本的代表性样本的代表性力求取样条件标准化n样品的贮存样品的贮存w血样离心，冷冻保存w尿液立即测定，否则应冷藏或加防腐剂第6页，共17页，编辑于2022年，星期一第三第三节节 生物样品的制备生物样品的制备 样品预处理样品预处理n提取方法的选择依据提取方法的选择依据w药物的理化性质药物的理化性质-酸碱度、极性、挥发性、可能的生物转化途径等w药物的浓度范围药物的浓度范围w药物测定的目的药物测定的目的w生物样品的类型生物样品的类型w样品处理与分析技术的关系样品处理与分析技术的关系第7页，共17页，编辑于2022年，星期一第三第三节节 生物样品的制备生物样品的制备 样品预处理样品预处理n药物的提取药物的提取w蛋白质处理蛋白质处理n利用蛋白质脱水沉淀利用蛋白质脱水沉淀n有机溶剂、中性盐等n利用蛋白质形成不溶性盐沉淀利用蛋白质形成不溶性盐沉淀n酸性沉淀剂酸性沉淀剂（TCA、高氯酸、苦味酸等）n重金属盐重金属盐（Zn2+、Cu2+）n其他方法其他方法n加热、离心、超滤和透析、酶消化法加热、离心、超滤和透析、酶消化法第8页，共17页，编辑于2022年，星期一第三第三节节 生物样品的制备生物样品的制备 样品预处理样品预处理n药物的提取药物的提取w缀合物（结合物）水解缀合物（结合物）水解n酸水解酸水解无机酸无机酸 简便快速，但专属性差，有可能造成被测物分解。n酶水解酶水解n葡萄糖醛酸苷酶葡萄糖醛酸苷酶(glucuronidase)n芳基硫酸酯酶芳基硫酸酯酶(arylsulfatase)专属性强，一般不会造成被测物分解，但水解时间长，费用高。n溶剂解溶剂解第9页，共17页，编辑于2022年，星期一第三第三节节 生物样品的制备生物样品的制备 样品预处理样品预处理n药物的提取药物的提取w冷冻干燥冷冻干燥n适用于适用于-大批量的生物样品大批量的生物样品-水溶性很强的样品水溶性很强的样品-挥发性样品挥发性样品-对热不稳定的样品对热不稳定的样品第10页，共17页，编辑于2022年，星期一第三第三节节 生物样品的制备生物样品的制备 样品预处理样品预处理n药物的分离与净化药物的分离与净化w液液-液萃取液萃取萃取率：不低于萃取率：不低于50%n影响提取率的因素影响提取率的因素npH值值n提取溶剂提取溶剂n离子强度离子强度n离子对提取离子对提取第11页，共17页，编辑于2022年，星期一第三第三节节 生物样品的制备生物样品的制备 样品预处理样品预处理n药物的分离与净化药物的分离与净化w液液-固萃取固萃取n固相提取柱（使用硅藻土、氧化铝、离子交换固相提取柱（使用硅藻土、氧化铝、离子交换树脂、活性炭等填充剂）树脂、活性炭等填充剂）n“干混合物干混合物”萃取萃取n待测组分的富集待测组分的富集w真空挥发或通气流挥发真空挥发或通气流挥发n衍生化处理衍生化处理第12页，共17页，编辑于2022年，星期一第三第三节节 生物样品的制备生物样品的制备 样品预处理样品预处理n待测物的损失待测物的损失w吸附、化学降解、衍生化反应、络合、蒸发吸附、化学降解、衍生化反应、络合、蒸发n样品玷污样品玷污w增塑剂增塑剂w脂肪酸和酯类脂肪酸和酯类w其他其他第13页，共17页，编辑于2022年，星期一第四第四节节 生物生物样样品内品内药药物分析方法物分析方法 分析方法建立的一般步骤分析方法建立的一般步骤 n以纯品进行测定以纯品进行测定 确定线性范围、最适测定浓度、灵敏度、最佳测定条件等n空白样品测定空白样品测定n以水代替空白样品，添加对照品后测定以水代替空白样品，添加对照品后测定 了解提取回收率和最低检测浓度的大致情况n空白样品中添加对照品后测定（回收率实验）空白样品中添加对照品后测定（回收率实验）n实际样品测定实际样品测定第14页，共17页，编辑于2022年，星期一第四第四节节 生物生物样样品内品内药药物分析方法物分析方法 方法的评价方法的评价n准确度（准确度（accuracy）w回收率回收率相对稳定w与参比方法相比较与参比方法相比较相关系数r 0.95n精密度（精密度（precision）各浓度点RSD不应大于15%，最低定量限不应大于20%。n灵敏度灵敏度w检测限(LOD)、定量限(LOQ)、最低检测浓度第15页，共17页，编辑于2022年，星期一第四第四节节 生物生物样样品内品内药药物分析方法物分析方法 方法的评价方法的评价n方法的专属性（方法的专属性（specificity）注重考虑代谢物、内源性物质和同时服用药注重考虑代谢物、内源性物质和同时服用药物的干扰物的干扰n线性范围线性范围-相关系数r 0.99 n样品稳定性考察样品稳定性考察w长期贮存长期贮存(-20/-70)、短期室温贮存w冷冻冷冻-解冻循环稳定性解冻循环稳定性w贮备液稳定性贮备液稳定性第16页，共17页，编辑于2022年，星期一第四第四节节 生物生物样样品内品内药药物分析方法物分析方法常用测定方法常用测定方法 光谱法光谱法n紫外可见分光光度法n荧光分光光度法色谱法电泳法免疫分析法第17页，共17页，编辑于2022年，星期一