火龙果炭疽病病原菌的鉴定及生物学特性研究.doc

火龙果炭疽病病原菌的鉴定及生物学特性研究【摘要】：p 】：【目的】明确火龙果果实炭疽病病原菌的种类及其生物学特性，为火龙果炭疽病病害防控提供理论根据。【方法】通过致病性测定、形态学特征观察及rDNA-ITS序列和系统发育树分析p 的方法对引起火龙果果实炭疽病的病原菌进展鉴定，并初步研究其生物学特性。【结果】供试菌株ITS序列为576 bp，与平头炭疽菌登录号：HQ896482、AF451899、辣椒炭疽菌登录号：J_910365、HQ271465的同性均达100%；系统发育分析p 结果说明，该菌株与平头炭疽菌和辣椒炭疽菌具有很近的遗传关系。该菌菌丝生长的适宜温度为2030 ，产孢适宜温度为2535 ，最适生长和产孢温度为30 ，致死温度为60 处理10 min；菌丝适宜生长pH为49，最适pH为8，产孢适宜pH为47，最适产孢pH为4；最适碳为蔗糖和D-果糖，最适氮为牛肉膏和蛋白胨，可溶性淀粉和硝酸铵有利于该菌产孢；连续光照和光暗交替有利于菌丝生长，黑暗那么有利于该菌产孢。【结论】引起海南省火龙果果实炭疽病的另一种病原菌是平头炭疽菌C.truncatum Schw. Andrus & Moore，该菌不仅侵染火龙果果实，还能侵染大豆豆荚和番茄果实。【关键词】：p 】： 火龙果；炭疽病；平头炭疽菌；rDNA-ITS；生物学特性中图分类号： S436.67 文献标志码：A 文章编号：2095-119120_01-0059-080 引言【研究意义】火龙果Hylocereus undulatus又称红龙果，为仙人掌科量天尺属植物，是典型的热带水果郑良永，20_4。火龙果果实外形独特，含丰富的植物性蛋白、矿物质、抗氧化物质等，口味佳，深受人们喜欢。近年来，随着火龙果栽培面积的不断扩大，其病害问题更加明显，严重影响了火龙果的产量和品质胡美姣等，2022；李敏等，20_a。炭疽病是火龙果上的一种重要病害，具有埋伏侵染性，主要危害火龙果果实，常在采后贮运时发生，造成重大经济损失袁诚林等，20_4；李茂和蒋昌顺，2022；Phoulivong et al.，2022。因此，对火龙果果实炭疽病病原菌进展别离、鉴定，并初步探究其生物学特性，对火龙果炭疽病的综合防治具有重要意义。【前人研究进展】关于火龙果病害，前人的研究主要集中在采前田间病害防治方面，在果实采后病害方面的研究报道较少。胡美姣等2022对火龙果采后病害研究发现，胶孢炭疽菌Collectotrichum gloeosporioides是引起火龙果果实炭疽病的主要病原菌。李敏等20_b对火龙果采后病害发生种类及病原菌种类进展调查，发现胶孢炭疽菌C.gloeosporioides和辣椒炭疽菌C.capsici是引起海南省火龙果果实炭疽病的两种病原菌，且不同的病原菌所引起的病害病症不同。郑伟等20_对从火龙果炭疽病病株上别离得到的病原菌进展形态特征、致病性及核糖体DNA-ITS序列分析p ，结果发现胶孢炭疽菌C.gloeosporioides和平头炭疽菌C.truncatum均能引起贵州火龙果果实炭疽病，但未对病原菌的生物学特性进展研究。Guo等20_对火龙果果实病害进展分析p ，初步鉴定认为平头炭疽菌C.truncatum能引起云南省火龙果果实炭疽病，并认为该病原菌最适生长温度为25 。【本研究切入点】大多数的研究认为胶孢炭疽菌是引起火龙果炭疽病的主要病原菌，而对其他病原菌引起的火龙果炭疽病及其生物学特性研究的报道较少。【拟解决的关键问题】通过对海南省火龙果果实炭疽病病原菌进展别离，发现除胶孢炭疽菌C.gloeosporioides外，还有其他种类炭疽菌Collectotrichum sp.也能引起炭疽病，因此，本研究在前人研究的根底上，采用组织别离、形态学特征结合分子鉴定的方法对所别离的病原菌进展种类鉴定，并初步研究其生物学特性，以期为火龙果炭疽病的防治提供理论根据。1 材料与方法1.1 试验材料从海南省海口市各超市、水果市场采集发病火龙果果实；安康火龙果果实购于海口市南北水果市场。1.2 试验方法1.2.1 菌株别离及纯化 对典型炭疽病病症进展描绘，并采用组织别离法对病原菌进展别离纯化。将所获得菌株进展初步挑选，剔除胶孢炭疽菌，其余菌株于4 保存待用。1.2.2 菌株致病性测定1.2.2.1 对火龙果的致病性测定 采用损伤接种法。取28 恒温培养5 d的菌饼=5 mm，下同接种于安康火龙果果实上，每个果实接种2点，每处理3个果实，以无菌PDA培养基块为对照，置于保鲜盒中28 恒温保湿培养，每天观察发病情况，明确该病原菌对火龙果的致病性。1.2.2.2 对其他作物的致病性测定 采用损伤接种法。取28 恒温培养5 d的菌饼接种于安康大豆豆荚和番茄果实上，置于保鲜盒中28 恒温保湿培养，每天观察发病情况，明确该病原菌对大豆豆荚和番茄的致病性。1.2.3 病原菌形态学观察及鉴定 将纯化后的菌株接种于PDA培养基上，28 倒置培养，每天观察菌落特征，在显微镜下观察菌丝体形态、产孢构造、刚毛及孢子形态、颜色、大小等特征，同时参考已有文献戚佩坤，20_0；陆家云，20_1进展病原菌形态学鉴定。1.2.4 病原菌rDNA-ITS区扩增和序列分析p 1.2.4.1 病原菌基因组DNA提取及rDNA-ITS区PCR扩增 用灭菌小药勺轻轻刮取约100 mg新颖菌丝于研钵中，用液氮充分研磨成粉状，采用植物基因组DNA提取试剂盒购于天根生化科技北京对病原菌基因组DNA进展提取。参照White等1990设计的真菌rDNA-ITS通用引物上游引物ITS1：5"-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3"，下游引物ITS4：5"-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3"对病原菌rDNA-ITS区进展PCR扩增。PCR反响体系50.0 L：1.0 L病原菌DNA，2.0 L 10 mol/L ITS1，2.0 L 10 mol/L ITS4，25.0 L 2×HSTaq-Mi_ture，20.0 L ddH2O。扩增程序：94 预变性5 min；94 30 s，50 30 s，72 10 s，进展35个循环；72 延伸10 min。第 6 页 共 6 页