微生物监测环境学时讲稿.ppt

微生物监测环境学时第一页，讲稿共三十二页哦第十章 微生物监测环境（2学时）pp一、环境污染的指示微生物pp二、污染物毒性的微生物检测第二页，讲稿共三十二页哦一、环境污染的指示微生物pp（一）一般污染指示微生物pp（二）粪便污染指示菌pp（三）其他指示微生物第三页，讲稿共三十二页哦（一）一般污染指示微生物pp环境中一般性的污染物：化学性污染，如糖类、含氮有机物、脂肪、有机酸等天然有机物以及无机磷、钾、硫等无机物；生物性污染，细菌、真菌、病毒等pp指示微生物（指示菌）：是指在环境监测中，用以指示环境样品污染性质与程度，并评价环境卫生状况的具有代表性的微生物第四页，讲稿共三十二页哦1、细菌总数pp细菌总数（total bacteria count）：是指环境中被测样品，在一定条件下培养后所得到的 1ml 或1g 样品中的细菌菌落总数pp计算单位：cfu/ml或cfu/g；cfu（colony forming unit）是指菌落形成单位第五页，讲稿共三十二页哦部分卫生标准清洁程度清洁程度细菌总数细菌总数cfu/mcfu/m3 3饮用水饮用水100100罐装矿泉水罐装矿泉水5050游泳池水游泳池水10001000图书馆、普通餐馆图书馆、普通餐馆 2500 2500影剧院、音乐厅影剧院、音乐厅 4000 4000候车室、候船室候车室、候船室 7000 7000第六页，讲稿共三十二页哦项目多污带甲型中污带乙型中污带 寡污带 细菌数(cfu/ml)105至106 105 104 少于 104 有机物 含大量有机物；主要是蛋白质和碳水化合物有机物含量少；主要是氨和氨基酸有机物含量很少有机物含量极微溶解氧 极低或几乎没有，厌氧性 少量，半厌氧性 较多，需氧性 很多，需氧性 BOD非常高 较高 较低 很低 第七页，讲稿共三十二页哦（1）液体、固体样品的细菌总数测定pp倾注平板培养法：将待测样品梯度稀释后，取一定量菌悬液，与融化好的营养肉汤培养基（50左右）混匀，马上倒平板，凝固后37培养48h，计算形成的菌落数目pp平板涂布培养法：将待测样品梯度稀释后，取一定量菌悬液，均匀涂布于琼脂平板表面，风干后37培养48h，计算形成的菌落数目第八页，讲稿共三十二页哦第九页，讲稿共三十二页哦（2）空气样品的细菌总数测定pp平板暴露沉降法：采用9cm平皿，将营养琼脂平板在1.2m高处暴露5min，37培养48h，计算生长的菌落数pp仪器法：固体撞击式采样器的抽气装置以恒定气流量，使含有微生物粒子的空气通过狭小的喷嘴，与营养琼脂平板相撞并吸附其上，37培养48h，计算生长的菌落数第十页，讲稿共三十二页哦第十一页，讲稿共三十二页哦2、霉菌与酵母菌总数pp霉菌与酵母菌总数（fungi and yeast count）：是指环境中被测样品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含的霉菌和酵母菌菌落数pp计算单位：cfu/ml或cfu/gpp检测方法：倾注平板培养法，多采用孟加拉红培养基、高渗察氏培养基或含抗生素的马铃薯葡萄糖培养基；2528 培养35d后计算生长的菌落数第十二页，讲稿共三十二页哦一、环境污染的指示微生物pp（一）一般污染指示微生物pp（二）粪便污染指示菌pp（三）其他指示微生物第十三页，讲稿共三十二页哦（二）粪便污染指示菌pp粪便污染指示菌：环境中的肠道病原菌主要来自人畜粪便，但其存在数量少，检测比较复杂；故选用粪便中的其他微生物为代表，以间接指示肠道病原菌的存在第十四页，讲稿共三十二页哦粪便污染指示菌的理想条件pp大量存在于人的粪便中，且数量比病原菌多pp受粪便污染的水中易检测出该指示菌，未受污染的水中无此菌pp在水体中不会自行繁殖pp存活时间略长于致病菌，对消毒剂的抵抗略强于致病菌第十五页，讲稿共三十二页哦微生物名称cfu/g粪便拟杆菌109-1010乳酸杆菌108-109大肠埃希氏菌107-108粪链球菌107-108柠檬酸杆菌105-106梭菌105-106葡萄球菌105-106克雷伯氏菌104-105肠杆菌104-105芽孢杆菌属104-105变形菌102-103铜绿假单胞菌102-103第十六页，讲稿共三十二页哦1、大肠菌群pp大肠菌群（coliform group）：又称总大肠菌群；它们一群能在37C，24h内发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧性的G-无芽孢杆菌；在伊红美兰培养基生成紫红色、不带或带有金属光泽的菌落pp种类：埃希氏菌、柠檬酸杆菌、肠杆菌和克雷伯氏菌pp指标：大肠菌群数，个/ml或个/g；大肠菌群值，1000ml/大肠菌群数或1kg/大肠菌群数第十七页，讲稿共三十二页哦（1）最大可能数法pp初发酵初发酵：将不同稀释度的检样，接种于乳糖培养液中，经：将不同稀释度的检样，接种于乳糖培养液中，经37C37C培养培养24h24h，观察产酸产气情况以初步判断是否有大肠菌群存在，观察产酸产气情况以初步判断是否有大肠菌群存在pp平皿分离平皿分离：将初发酵管的菌液接种于伊红美兰培养基上，：将初发酵管的菌液接种于伊红美兰培养基上，37C37C培养培养24h24h，观察菌落形态；挑取疑似菌落涂片，革兰氏染色、镜检，观察菌落形态；挑取疑似菌落涂片，革兰氏染色、镜检pp复发酵复发酵：将上述疑似菌落再次转接入乳糖培养液中，经：将上述疑似菌落再次转接入乳糖培养液中，经37C37C培养培养24h24h，产酸产气者最后确证为大肠菌群，产酸产气者最后确证为大肠菌群pp统计结果统计结果：根据肯定有大肠菌群存在的初发酵管的数目及不同稀：根据肯定有大肠菌群存在的初发酵管的数目及不同稀释度的检样，查阅专用统计表得出每毫升检样中大肠菌群的最可释度的检样，查阅专用统计表得出每毫升检样中大肠菌群的最可能数目能数目第十八页，讲稿共三十二页哦第十九页，讲稿共三十二页哦MPN三管法测数统计表第二十页，讲稿共三十二页哦（2）滤膜法pp水样过滤：选用孔径为0.45m的滤膜过滤检样，细菌截留在无菌滤膜上pp培养：将滤膜有菌面朝上贴于伊红美兰培养基平板上，37C培养1618hpp结果观察：挑选疑似菌落进行革兰氏染色；G-接入乳糖培养液中复发酵，产酸产气者最后确证为大肠菌群pp结果计算：根据滤膜上经证实的大肠菌群数及滤过水量，求出每升水中的大肠菌群数量第二十一页，讲稿共三十二页哦2、粪大肠菌群pp粪大肠菌群（fecal coliform）：能在4445发酵乳糖的大肠菌群，又称耐热性大肠菌群；以埃希氏菌属为主，其他3个属数量较少pp粪大肠菌群是理想的粪便指示菌：在人的粪便中粪大肠菌群细菌占总大肠菌群的96%，而且在体外环境中粪大肠菌群不易繁殖第二十二页，讲稿共三十二页哦3、粪链球菌pp粪链球菌：短链状球菌，G+，含量仅次于大肠菌群细菌，在水中不自行繁殖，抵抗力弱差pp人粪便中粪大肠菌群数大于粪链球菌数，动物中则相反：粪大肠菌群数/粪链球菌数4，污染主要为人粪；0.7，污染主要动物粪；24，混合污染，以人粪为主；0.71，混合污染，以动物粪为主第二十三页，讲稿共三十二页哦一、环境污染的指示微生物pp（一）一般污染指示微生物pp（二）粪便污染指示菌pp（三）其他指示微生物第二十四页，讲稿共三十二页哦（三）其他指示微生物pp致病指示菌：主要包括沙门氏菌、志贺氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、破伤风梭菌pp肠道病毒指示微生物：脊椎灰质炎病毒、大肠杆菌噬菌体第二十五页，讲稿共三十二页哦1、沙门氏菌pp沙门氏菌（Salmonella）：G-，杆菌，周生鞭毛，无芽胞；好气性或兼性厌氧；不耐热，煮沸5min可将其杀死pp检测方法：将待测样品梯度稀释后，取适量涂布于伊红美兰培养基上，37培养48h，计算形成的菌落数目第二十六页，讲稿共三十二页哦第二十七页，讲稿共三十二页哦2、脊椎灰质炎病毒pp病毒的浓缩方法：微孔滤膜吸附洗脱法、氢氧化铝吸附沉淀法、聚乙二醇脱水透析法pp检测方法：蚀斑实验；将浓缩的含病毒样品，接种于Hep-2或RD细胞培养瓶中，经35培养1周，观察蚀斑形成情况，并进行蚀斑计数第二十八页，讲稿共三十二页哦二、污染物毒性的微生物检测pp（一）发光细菌毒性试验pp（二）Ames致突变试验第二十九页，讲稿共三十二页哦（一）发光细菌毒性试验pp发光细菌：一类能产生生物发光的细菌，主要是从海洋分离，特别是从海鱼体表分离得到；G-，兼性厌氧，有鞭毛pp发光细菌检测法：在环境不良或存在有毒物质时，发光细菌的发光能力减弱，其衰减程度与毒物的毒性和浓度成一定的比例关系；通过灵敏的光电测定装置，检查发光细菌受毒物作用时的发光强度变化，可以评价待测物的毒性大小第三十页，讲稿共三十二页哦二、污染物毒性的微生物检测pp（一）发光细菌毒性试验pp（二）Ames致突变试验第三十一页，讲稿共三十二页哦（二）Ames致突变试验pp沙门氏菌/阿姆斯（Ames）试验：是由美国阿姆斯（Ames）等1975年创立的一种致突变测定法；利用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）可发生回复突变的性能pp准确性：烷化剂、亚硝胺类、联苯胺、黄曲霉毒素、氯乙烯等175种已知致癌物的试验结果发现其中157种呈阳性反应，吻合率达 90；将 108 种已知非致癌物进行测定，结果其中 94 种呈阴性反应，吻合率为 87第三十二页，讲稿共三十二页哦