《富贵榕组培快繁技术规程》.doc

富贵榕组培快繁技术规程（征求意见稿）编 制 说 明 富贵榕组培快繁技术规程标准起草小组二二二年六月富贵榕组培快繁技术规程编制说明一、标准项目来源富贵榕组培快繁技术规程是泉州市市场监督管理局关于印发2021年泉州市地方标准制修订计划项目的通知（泉市监2021 160号）下达的标准制定任务，泉州市林业局提出并技术归口，由泉州市丰泽区艺华源花卉中心主持起草，泉州市林木种苗站、泉州市标准化研究所、泉州市国有林场发展中心、泉州市林业技术推广中心、泉州市泉美生物科技有限公司等单位参加起草。 二、标准制定意义富贵榕(Ficus elastica Schryveriana)，主产于印度和马来西亚等地，属于园艺栽培品种，其性喜高温多湿气候,耐贫瘩和干旱,抗风、污染能力强。生长迅速,移栽容易成活，生长较粗放，适应范围广，适合公园、庭院种植，颇受广大消费者喜爱,市场上对于富贵榕优质苗木的需求不断增长。近年来，随着矮化技术的推广，盆栽富贵榕也受到了市场的广泛接受。目前，富贵榕常见的繁殖方法有扦插繁殖，也可播种，或高压繁殖。随着组培快繁技术的发展，富贵榕组培快繁也得到广泛应用，但是由于缺乏技术标准、操作不规范等问题，在富贵榕组培过程中容易出现无菌体获得率低、外植体易褐化死亡、增殖繁殖系数低、组培变异高等问题。本项目的立项实施，目的在于提供一套富贵榕组培快繁育苗方法,其可有效解决富贵榕组织培养中存在问题,在短期内获得大量优质的富贵榕种苗，有利于富贵榕产业的发展，将为我市推广应用富贵榕组培快繁技术，发展富贵榕产业起到重要的指导作用。三、标准制定的可行性本项目组有多年从事富贵榕组培快繁的工作经验，本技术主要以组培苗为对象，从范围、规范性引用文件、术语和定义、培养基配制、愈伤组织诱导培养、愈伤组织分化培养、继代增殖培养、壮苗培养、生根培养、种植、档案管理等方面，并构建了1套富贵榕组培快繁的技术体系，并以富贵榕组培快繁育苗方法申请国家发明专利。该快繁体系技术规范、可操作性强；该快繁体系效果好，苗木适应性强且成活率高；该培育体系具有可行性，应用效果好。因此，项目组起草编制及提交审查发布富贵榕组培快繁技术规程地方标准，对其加以推广应用是可行的。四、标准制定的工作过程 1.本标准制定承担单位对富贵榕组培快繁技术规程制定工作极为重视，2021年5月组建了以从事富贵榕科学研究、组织培养、技术推广和标准化工作的专业人员为主的标准起草小组。制订了工作方案，开展了编写标准资料调查收集，起草小组多次深入我市富贵榕组织快繁生产企业、栽培产区调查，召集组培生产企业、专业合作社、栽植示范户、示范场相关技术人员进行座谈，征询建议，核实数据，确保有关指标科学合理。 2.在对相关资料进行分析认证的基础上，起草小组于2021年6月完成了标准草案（一稿）起草工作，并向泉州市市场监督管理局申请制定该标准，按照泉州市市场监督管理局的修改要求，并进行材料补充和完善，分别于2021年7月完成了标准草案（二稿）起草工作，2021年12月列入泉州市市场监督管理局标准制修订项目。 3.起草小组从2021年7月至2022年5月对标准的各项指标进行实地试验验证，于2022年5月完成了标准征求意见稿。 4.在标准征求意见稿编制过程中，起草小组成员为保障标准的科学性、准确性、实践性和可操作性，通过数据分析、产区调查、咨询专家等途径，力求使指标先进、合理，适宜生产、经营实际，争取达到国内领先水平。一是对有关富贵榕组培快繁技术资料进行全面整理，系统分析总结，作为标准编制的依据。二是深入生产企业、栽培产区调查，召集组培生产企业、专业合作社、栽植示范户、示范场相关技术人员进行座谈，征询建议，核实数据，确保有关指标科学合理。四、标准制定的原则1.科学实用原则。标准的各项内容、术语定义、方式方法、评定指标、成果格式等具有科学性，对引导和规范富贵榕组培快繁栽培技术具有实用价值；2.可操作性原则。标准制定从实际出发，注重实效，使其具有较强的可操作性，各项要求规定能得到实施。3.协调统一原则。充分考虑与有关标准、法规、条例及有关文件的相互协调，注意与行业标准相衔接。4.规范性原则。符合“GB/T1.12000标准化工作导则第一部分：标准的结构和编写规则”要求。5.可扩展性原则。标准具有前瞻性，保证在未来几年富贵榕组培过程中可扩展。6.完整性原则。标准内容涵盖富贵榕组培快繁的培养基配置、愈伤组织诱导培养、愈伤组织分化培养、继代增殖培养、壮苗培养、生根培养等关键技术的每个环节，在标准制定、实施、修订过程中，不断完善与提高，保持技术标准的完整性。 五、标准编制主要技术指标的说明1.本标准规范性引用文件说明引用规范性文件有LY/T 2289 林木种苗生产经营档案、 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程2.关于基本培养基的说明主要参照花卉种苗组培快繁技术规程NY/T 2306和栽培过程调整的实验数据。选择改良MS培养基为基本培养基。改良MS培养基是将标准培养基中KNO3的用量改为950mg/L，NH4NO3的用量改为825mg/L。在项目组单位泉美生物科技有限公司组培车间和实验室反复实验，将培养基中KNO3和NH4NO3的用量做相应的改动，更适合富贵榕组培苗木的质量和成活率。3.关于愈伤组织诱导培养基的说明主要参照花卉种苗组培快繁技术规程NY/T 2306和栽培过程调整的实验数据。培养基配方：改良MS6-BA 0.1-5.0 mg/LNAA 0.1-0.5 mg/L 益培灵0.01-2.0 mg/L蔗糖 20-35 g/L卡拉胶6.5 g/L。愈伤组织是在离体培养条件下，经植物细胞脱分化和不断增殖所形成的无特定结构的组织。植物外植体在培养基和外界环境的作用下，经过一个复杂的过程形成愈伤组织。实验表明，此阶段添加的6-BA浓度明显要高于其他阶段，有利于诱导形成富贵榕芽尖愈伤组织。益培灵是一种长效、广谱、高活性、新型组织培养专用防污染杀菌剂。它能够穿透微生物的细胞壁进入细胞内部，与核酸碱基结和，干扰复制；或通过断开微生物关键蛋白质的键而起杀菌作用。它与微生物接触后，可使细胞死亡，从而迅速杀灭或抑制其生长。它的活性成分环境无残留，具有操作安全、方便配伍性好、不破坏培养基活性成分、耐高压灭菌、稳定性高、使用成本低等特点。此阶段添加益培灵可以有效杀灭外植体携带的病菌，为后续的组织培养起到很好的杀菌作用。4.关于分化培养基的说明主要参照花卉种苗组培快繁技术规程NY/T 2306和栽培过程调整的实验数据。培养基配方：改良MS维生素C30-100mg/L6-BA 0.1-3.0 mg/LCPPU0.1-2.0mg/L NAA 0.1-0.4 mg/ml 蔗糖 20-30g/L卡拉胶 6.5 g/L。维生素作为维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用。实验表明，此阶段添加维生素C能为细胞提供有机营养，维持细胞活性，促进愈伤组织分化。CPPU（氯吡苯脲）是一种具有细胞分裂素活性的苯脲类植物生长调节剂，其作用机理与嘌呤型细胞分裂素相同，其生物活性比6- BA高10 100倍，其主要生理作用是加速有丝分裂，增加细胞数量，加速细胞增大和分化，促进器官形成、蛋白质合成。此阶段添加CPPU，且浓度明显高于其他阶段，更能加快富贵榕愈伤组织分化。主要参考文献有： CPPU应用研究概况（张桂芬、常开忠，2010年）。5.关于继代增殖培养基的说明主要参照花卉种苗组培快繁技术规程NY/T 2306和栽培过程调整的实验数据。培养基配方：改良MS6-BA0.1-3.0 mg/LCPPU0.01-0.1mg/L NAA 0.01-0.3 mg/L 蔗糖 20-35 g/L 卡拉胶 6.5 g/L。实验表明，此阶段的培养基与分化阶段培养基类似，只是缺少维生素C，NAA和CPPU浓度降低，更适合继代增殖培养。重点说明的是此阶段的继代增殖代数控制在6代以内。6.关于壮苗培养基的说明主要参照花卉种苗组培快繁技术规程NY/T 2306和栽培过程调整的实验数据。培养基配方：改良MSNAA 0.1-1 mg/LAC（活性炭）0.5 g/L蔗糖 15-35 g/L 卡拉胶 6.5 g/L。活性炭是一种具有极丰富空隙构造的多孔径炭化物，有良好的吸附性。活性炭已被广泛应用于植物组织培养中，可吸附培养基中的有害物质，包括琼脂中所含的杂质，外植体在培养过程中分泌的酚醍类等对外植体自身有害的物质以及蔗糖在高压灭菌时产生的5羟甲基糠醛，同时也能吸附生长调节物质，维牛素B6,叶酸和烟酸等有益物质。AC (活性炭)在植物组织培养生根过程中，主要的作用有三个：一是防止褐变，提高初代培养成活率；二是促进芽增殖和苗生长；三是可提供植物生根的暗环境，促进生根。主要参考文献有：活性炭在植物组织培养中的应用（王红梅，2011年）。此阶段只添加NAA一种生长调节剂，所以浓度要高，达到0.1-1 mg/L。7. 关于生根培养基的说明主要参照花卉种苗组培快繁技术规程NY/T 2306和栽培过程调整的实验数据。培养基配方：改良MSIBA 1-3 mg/LNAA 0.01-0.5 mg/LAC（活性炭）0.1-1 g/L 蔗糖 15-35g/L 卡拉胶 6.5 g/L。IBA（吲哚丁酸），它是一种常用的植物生长调节剂，主要作为生根促进剂使用，尤其是促进不定根的生长。此阶段的培养基添加IBA（吲哚丁酸）和AC（活性炭），更能进一步促进富贵榕组培苗根系的生长。8.关于外植体获取的说明主要参照花卉种苗组培快繁技术规程NY/T 2306和栽培过程调整的实验数据。选择具有优良母本性状多年生、优良、健壮、无病虫害的富贵榕为母株,在生长旺季48月份新芽萌动时先用一的按常规用量进行叶面喷施,隔天一次共3次后,去顶芽,防止水分进入,光强控制在510mol·m-2·s-1,母株停止浇肥；约1020天后从枝条新长出小芽,待新芽长至2-5cm且芽叶片有黄绿斑即可剪下12cm作为外植体。为什么选择侧芽，原因一是去除顶芽，有助侧芽生长，侧芽数量较多有利于获取较多的外植体数量。原因二是侧芽较顶芽更易进行愈伤组织诱导培养。9.关于组培快繁技术条件的说明外植体接种后，连续培养 32 d38d，培养温度为 2527，光照1315H/D,光强3570mol·m-2·s-1,湿度4065%。切口部分首先产生愈伤组织，进而形成芽眼，并分化成芽。第一代无菌材料培养后当新芽叶片展开,待芽长到10mm时从芽基部切除,保留顶芽5-8mm,如有丛生芽按1-3芽/团进行方向性切割,只保留芽叶片黄绿相间的芽,纯黄的芽和纯绿的芽淘汰；将切割好的芽团转接到分化培养基上继续培养上，光强加强到3570mol·m-2·s-1,继续培养2733D。进入扩繁阶段的材料长成6-10芽/团,按2-3芽/团切割,若团块芽高度大于10mm,则去顶留5-8mm；只保留芽叶片黄绿相间的芽,纯黄的芽和纯绿的芽淘汰,将切割好的芽团接种至继代增殖培养基上，继续培养2535D。将经扩繁培养后的芽团按3-4芽/团方向性切割后,接种到壮苗培养基上继续培养，培养温度降低为 2325，光强加强到60120mol·m-2·s-1, 继续培养2228D。当团块上的芽长度达15-25mm、茎粗度1mm、具有片完整叶时,按单芽进行切割,切下来的单芽接种到接种到生根培养基上继续培养，此时培养温度降低为 2224，光强加强到70150mol·m-2·s-1, 继续培养1317D。当植株根数28条，高2555mm，植株健壮、叶片黄绿相间，便可炼苗。将培养瓶放置在温度2030，光强80160mol·m-2·s-1，湿度6080%的温室中，把培养瓶盖全部打开或半打开炼苗。炼苗37D后就可进行温室种植，种植温度为 2230，湿度8095%，种植时间48m。10