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改变烟叶储存环境条件从理论上讲影响烟叶醇化有物理因素和生物因素等方面，其中一些烟草科技工作者就从环境温度、湿度和陈化时间以及烟叶含水率等物理因素开展了对烟叶陈化质量的研究。研究结果22表明：烟叶自然陈化的适宜含水率为10-13温度为035，陈化期约13年，但主要的内在化学成分变化在前12个月内进行，以后的时间变化缓慢。宋纪真等25认为福建Z05-98片烟在温度较低、相对湿度较高的环境条件下贮存，片烟的外观质量较差，也不利于片烟吸味品质的改善；温度为自然温度，湿度5565环境条件下贮存的片烟外观质量较好，更有利于片烟吸味品质的改善。PEROVOIC D等26指出自然陈化过程中空气温度和湿度这两个基本因素对复烤叶片的影响。分析了3年陈化过程中，复烤叶片物理和化学特性。结果发现，烟叶的平衡水分增加，烟碱、还原糖含量以及pH下降，蛋白质和总氮含量分别有轻微减少和增加。一些卷烟工业发达国家比较重视仓储温湿度对陈化质量的影响。为缩短陈化时间，美国北部的卷烟厂把烟叶运到气温较高的南方搞异地陈化21巴西的烟厂实行烟叶标准化库房贮存，仓库温度常年保持19度，相对湿度恒定在60陈化效果很好。意大利的Carotenuto R27为了探索仓储温度和贮存时间对烟叶陈化的影响，经过多年试验，初步探讨了温度一时间效应与烟叶亮度、还原糖含量、烟丝填充力以及相对湿度之间的函数关系式，为有效调控烟叶陈化的进程奠定了数理基础。KIM等28探讨了储存期间不同高温高湿模式下，对已加工烤烟和白肋烟的pH、颜色和某些化学成分有重要的影响。韩锦峰等29对烤烟发酵过程中生物和化学变化规律研究结果以及评吸结果综合表明；烤烟陈化作用主要是在1218个月中完成的。在现有的技术条件下，烤烟达到最佳吸昧品质的最佳自然陈化时间为2430个月。于校芳等30研究认为：上桔二为1220个月，上桔三为1523个月。郭俊成等31指出：中三中四为2年，上二为3年。各等级烟叶的陈化时间一般不应超过3年，否则，烟叶的香气将有损失，同时还发现，随着陈化时间的延长，烟叶的填充值有增加的趋势。通过改变烟叶自然醇化库的条件，适时适当增加仓库湿度、温度，使自然醇化仓库的温湿度在春秋两季时基本能达到夏季的温湿度条件，使微生物的活动性和酶的活性得到增加，从而使自然醇化的速度得到加快，缩短自然醇化的时间：也可以改进人工发酵的温度、湿度、时间等工艺条件，采用较低温如35-45度、适当延长发酵时间如50天到两个月，使发酵缓和一些，使微生物和酶的作用时间加长，与自然醇化靠近，从而使烟叶的化学成分向有利的方向转化得更充分。142打叶复烤环节添加酶和微生物醇化剂在深入研究了酶的类型和微生物的种类对烟叶化学成分氧化降解作用的基础上，采取有效的生化调控措施，如使烟包内增加某种适宜的微生物、施加催化性强大的某种酶等，对烟叶纤维素、半纤维素、果胶、木质素的细胞壁物质及淀粉、蛋白质等的降解有明显作用，并缩短烟叶自然醇化时间，提高烟叶人工发酵的效果。这方面的内容是目前国内烟草行业研究最多，利用最广的技术措施，并且也是以后发展潜力最大的技术措施。自19世纪至今，研究人员在烟叶发酵期间，对烟叶叶面微生物进行了一系列分离、鉴定工作，同时也进行了大量的向烟草中加入微生物及其酶制剂来提高烟叶质量的尝试性研究32、33Izquierdo TamayoA等人34发现，用微生物接种的烟叶，香气和性状均得到改善，尤其是当采用微球菌属(Micrococcus)或杆菌属(Bacllus)或两者的混合物接种烟叶时，烟叶蛋白质含量降低，可溶性氮尤其是氨态氮和酰胺氮含量增加，发酵期间生物碱(主要是烟碱)含量降低，发酵后pH值大幅度增加。GiovannozziSermanni G35在实验室内采用微生物Deharyomycos nicrotianace、Micrococcus nicotianae、Mnicotianae val'1iquefaciens、Bacillussp和Arthrobacter nicotianae对雪茄烟用的肯塔基烟叶进行发酵处理，结果由于柠檬酸、苹果酸、马来酸和琥珀酸的分解，导致烟叶变为碱性。其中可使烟叶中游离氨基酸的含量增加，而Micrococcus nicotianae可利用这些氨基酸进行代谢，产生C02、氨、丙烷和丙烯。GiovannozziSermanni G.31的后续研究进一步表明，用上述微生物制剂处理的烟叶总氮、可溶性氮和烟碱含量均大幅度降低，分别由3574697和336降至987291和89而蛋白质氮含量在所有情况下均增大。Ray E Dawson37的研究表明，嗜热性放线菌属(thermophilic actinomyces)在湿度非常低的陈化烟中生长缓慢，并可使陈化烟叶产生一种令人喜欢的香气，尤其是水果香气和壤香等。English等38认为，烟叶接种枯草芽孢杆菌和羧状芽孢杆菌后能迅速地产生一种使人愉快的香气，随着微生物的生长，烟叶中的总碳水化合物和还原糖降低，pH值提高。Gaisch等39将蛋白酶加入烟草和水的混合体系中降解烟草中的蛋白质，通过微生物代谢作用去除水溶液中的多肽等，去掉了烟草中50以上的蛋白质。Rossi等40用由土壤中分离出的假单孢菌属第41小种处理烟碱溶液24 h，降低65的起始烟碱。此外，布朗&威廉森公司41从Puerto Rican雪茄烟叶上分离出可降解烟碱的Pseudomonas Putida及可同时除去烟碱和硝酸盐的CelluLomonas：Teague等42用酶制剂处理烟梗，通过多种市售酶制剂作用效果比较发现，这些酶均可以在不同程度上分解烟梗中的果胶、纤维素和半纤维素，且以纤维酶35和果酸酶R10效果最为突出。由于利用酶制剂来生产烟草薄片并提高其质量的方法存在着生产成本高、在处理时要求有严格的pH范围、生产过程中需补充酶等问题，Gravely等43提出用Ecaratavora培养液降解烟草中的果胶和用Asetgillus及Aspemlusoryzae降解烟梗中的纤维素的微生物消化方法。Geisis44将能产生果酸酶的Ecaratevera和能产生纤维酶的T.Longirrachiatum在两者共同需要的培养基中进行混合培养，来同时降解烟梗中的果胶和纤维素。中国烟草科技工作者在利用微生物进行烟叶发酵方面也做了一些研究，如陈福星等45用从烤烟烟叶上分离鉴定的4个优势菌株的菌液处理烟叶，试验结果表明，处理烟叶比人工或自然发酵的均好，不仅大大缩短了发酵时间，而且使烟叶品质及色香味均有一定的提高。最近，周瑾等46将从优质烤烟叶上分离筛选得到的微生物菌Yu-1制备成菌恳液，每500克烟叶用1mL菌悬液喷施于灭菌后的低次烤烟碎片上，结果表明，发酵后的烟叶碎片中的可溶性还原糖含量明显降低，同时有机酸性成分增多，酸值提高。列夫理论及周冀衡认为21烟叶发酵是由烟叶本身所含有的氧化酶类引起的，并指出引发发酵的酶主要是氧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶。早在1965年，美国菲利浦·莫里斯公司的BMSpann等47就对烟草薄片的酶处理进行过研究。他们将烟梗含量约50的烟末制成固形物含量为1218的稠浆，加入0075075按干烟末重量计)的纤维素酶35，用乙酸或柠檬酸调节pH值到45(在pH=45下此酶的活性最高)于室温下放置过夜发酵，然后按稠浆法制成再造烟叶。化学分析表明，此种薄片的水溶性物质、总还原性物质和还原糖的含量均高于原来的烟草原料，草酸铵可溶物、氯化钠和纤维素的量均较低，总灰分、苯乙醇可溶物和半纤维素的量不变。评吸结果表明，用低量酶、甘油和乙酸处理的烟草薄片，刺激性较小，甜味较重，但缺乏“万宝路卷烟中的生物碱劲头。Bemasek等48用蛋白酶降低烟草蛋白质含量并制成低蛋白质含量的烟草薄片。Bablers49在研究干烟叶中蛋白水解酶时发现，人工调制的烟叶没有蛋白质酶活性，而晾制的烟叶具有蛋白质酶的活性，半胱氨酸能激活这些酶的活性。league等用酶制剂处理烟梗，通过多种市售酶制剂作用效果比较发现，这些酶均可以在不同程度上分解烟梗中的果胶、纤维素和半纤维素，且以纤维酶35和果酸酶R10效果最为突出。Henri CSilbeman51发明了一种改善烟梗品质的方法，即在压梗前，先将烟梗浸入含一定量多糖水解酶的水溶液中，用乙酸调节pH值至3560的最佳范围内，浸入时间为530min，然后排出剩余的溶液。烟梗于20800C温度下陈化15min至24h，温度越高，陈化时间越短。近两年，中国在利用酶制剂改善烟叶品质方面也进行了一些探索性的研究。如张立昌52报道了用从酵母菌B13分离陈化的酶制剂处理烟丝，评吸结果显示，酶制剂处理烟丝可明显改善卷烟香气，减轻青杂气和刺激性，使低等级的烟叶提升了12个等级。姚光明等53研究了采用酶解法来降低烟叶中的蛋白质含量，作用时间为4小时的条件下喷洒120ug可降解蛋白质12左右，且烟叶的燃吸质量得到了明显改善；李晓等54在一定条件下向烟叶中施加一定量的淀粉酶和糖化酶，实验得出，淀酶粉糖化酶的最佳用量分别为8(ug)80(ug)可降解烟叶中的淀粉80烟叶中水溶性糖增加214左右。李晓、刘风珠等55选择多种酶进行协同作用条件的研究，将蛋白酶与a淀粉酶、糖化酶混合同时施加在烤烟烟叶上，酶解后烟叶中的蛋白质含量均有不同程度的降低，水溶性糖含量有所提高而且效果较为明显。任军林等56也进行了类似试验，将高活性微生物转化酶包括糖化酶、纤维素酶、淀粉酶等用空气压缩罐喷洒于烟丝上，改善了烟丝的品质。马林57报道了将酶解和微生物发酵综合用于改变低次烤烟化学组分，评吸结果表明，处理后的烟叶香气增加，刺激性显著降低，余味干净，杂气轻微。陈洪、许平等58利用微生物酶法进行了降解烟草烟碱试验。结果表明：酶处理烟草烟碱的降低速度比自然陈化的提高了几十倍至几百倍。刘维涓、宋刚等59采用先进的固定化酶技术自行研制开发生物改性添加剂，结果表明，新型烟草添加剂可明显改善膨胀烟草的品质。陈洪等60将磨碎后的烟叶分别加入a淀粉酶和蛋白酶后置于培养箱中，发现除了给加酶后的烟叶提供适宜的温湿度条件外，还需要提供足够的储存时间使其充分反应，储存的时间越长，淀粉和蛋白质的降解越充分。闰克玉61研究了淀粉酶、糖化酶、蛋白酶的不同用量对烤烟内部化学成分和评吸质量的影响。结果表明：1)酶的加入，使得总糖含量增加，总氮、蛋白质含量降低。2)烟叶评吸结果表明，当酶用量分别为：淀粉酶10mLkg，糖化酶160ug，蛋白酶80teg时，可提高烟叶的评吸质量。143加工过程中工艺控制条件醇化过程是一个存在酶促反应的生化变化过程，与酶活性有关的片烟水分，通气性及环境温度等均会对其产生影响。因此，研究片烟加工过程中水分，温度以及装箱密度等工艺控制条件的变化对醇化的影响，对于建立以提高烤烟醇化质量为主的复烤加工工艺控制参数指标也具有积极的指导意义。这方面的应用几乎国内的卷烟企业都进行过深入的研究，并且形成了完善的加工技术指标，取得了良好的经济效益。144包装方式和包装材料随着打叶复烤技术的推广应用，原料片烟化改变了烟叶的包装方式，在新的包装方式下，如何能将烟叶的醇化效果达到最好的状态又成了专家们新的研究课题。近年来，宋纪真62等人利用龙岩烟厂陈化库研究比较了片烟包装方式(纸箱加牛皮纸与纸箱加无孔塑料内袋)对福建，云南烤烟片烟醇化效果的影响，研究结果取得了良好的效果。在片烟包装材料的选择上，目前通常使用的有纸箱装箱加盖牛皮纸、纸箱内套塑料袋或微孔塑料袋包装等多种方式。但是，不同包装形式对片烟醇化的影响尚无定论，包装材料直接影响到片烟与环境中的水、热、气交换，从而对醇化过程产生相应的影响。因此，研究不同包装材料和包装方式下，片烟与环境中的水、热、气交换的特点，对于选用合适的包装材料促进烤烟片烟醇化过程具有直接的指导作用。145其他措施刘石63等依据在生物体内Cu2+是一种特别强的助氧化剂，是烟叶中多酚氧化酶的辅基，对酶有激活作用，在烤烟发酵中加入该物质提高了发酵质量。余永茂等6为了加速烟叶发酵，降低能源消耗，进行了紫外线加速烟叶发酵的试验。静电催陈是近几年发展起来的一项新技术，是静电化学这一新兴学科领域中的一个分支，其应用已经渗透到生物和食品工业等领域。刘维涓64等利用现代物理技术及生物技术的研究思路，采用高压静电场，在不同的电场强度下，对复烤后还未陈化的烟叶进行电场处理，并根据对烟叶中致香成分的变化、微生物活性变化及氨基酸理化指标的分析，对高压静电的催化作用机理进行初步探讨。烟叶化学成分、主要致香成分等均达到较理想的效果，在香气及吃味品质上明显优于未处理的对照样，烟香中的青杂味和刺激感均有明显的改善。高压静电场在一定范围内能活化酶，其机理可能是电场激发了烟叶表面酶更多的活性位点，或是增大了酶现存活性位点起催化作用的范围，因此提高了反应的速率。同时，高频电场也可能影响了维持酶三维结构的作用力，从而导致了烟叶中部分酶的活性得以激发。由于高压静电场对烟叶进行了物理与化学变化的作用，打破和减弱了烟叶内在化学成分中的某些化学键，加快了缔合一分离再缔合的速度，有利于烟叶中的氧化、酯化、缩合和Maillard反应的进行，因而加速了烟叶陈化的进程，使烟叶吸味更醇和、香气更丰浓。