鱼类生理学实验幻灯片.ppt

鱼类生理学实验第1页，共37页，编辑于2022年，星期三实验一鱼类生理学实验常用仪器鱼类生理学实验常用仪器实验基本操作技术实验基本操作技术第2页，共37页，编辑于2022年，星期三一、鱼类生理学实验的地位一、鱼类生理学实验的地位本课程共本课程共2020学时，属专业基础课程。学时，属专业基础课程。成绩计算：报告及修改（用红笔）成绩计算：报告及修改（用红笔）90%90%，考勤，考勤10%10%。二、鱼类生理学实验方法二、鱼类生理学实验方法第3页，共37页，编辑于2022年，星期三三、鱼类生理学实验目的三、鱼类生理学实验目的1.1.掌握基本实验方法；掌握基本实验方法；2.2.掌握主要仪器的操作方法；掌握主要仪器的操作方法；3.3.掌握生理实验基本技能；掌握生理实验基本技能；4.4.独立分析实验结果、写出规范的实验报告。独立分析实验结果、写出规范的实验报告。第4页，共37页，编辑于2022年，星期三四、鱼类生理学实验要求四、鱼类生理学实验要求1.1.实验前：教师和学生均做好实验准备工作。实验前：教师和学生均做好实验准备工作。2.2.实验中：教师简要讲解实验原理、关键步骤、实验要实验中：教师简要讲解实验原理、关键步骤、实验要求等。学生领取器材，归还时复核，损坏登记，丢失求等。学生领取器材，归还时复核，损坏登记，丢失赔偿。赔偿。3.3.实验后：归还实验用品，动物尸体按指定位置放置，轮流打实验后：归还实验用品，动物尸体按指定位置放置，轮流打扫清洁卫生；转录、整理实验结果，及时上交实验报告。扫清洁卫生；转录、整理实验结果，及时上交实验报告。第5页，共37页，编辑于2022年，星期三五、常用生理仪器的使用五、常用生理仪器的使用 （一）刺激系统（一）刺激系统 1.1.刺激器刺激器 2.2.刺激电极刺激电极（1 1）普通电极（）普通电极（2 2）保护电极（）保护电极（3 3）Zn-CuZn-Cu弓弓（二）引导、换能系统（二）引导、换能系统 1.1.压力换能器压力换能器 2.2.张力换能器张力换能器第6页，共37页，编辑于2022年，星期三（三）放大系统（信号调节）（三）放大系统（信号调节）放大器：可将生物电信号放大放大器：可将生物电信号放大10001000倍以上。倍以上。（四）显示、记录系统（四）显示、记录系统1.1.生理记录仪生理记录仪 常用有二道、四道及八道生理记录仪等，一个通道可记录常用有二道、四道及八道生理记录仪等，一个通道可记录一个信号。一个信号。2.2.计算机生物信号采集处理系统计算机生物信号采集处理系统 PCLAB-UEPCLAB-UE计算机生物信号采集处理系统。计算机生物信号采集处理系统。第7页，共37页，编辑于2022年，星期三六、鱼类生理实验基本操作技术六、鱼类生理实验基本操作技术（一）手术器械（一）手术器械1.1.刀：姿势有指压式、执笔式及反挑式等。刀：姿势有指压式、执笔式及反挑式等。2.2.剪：手术剪与毛剪。剪：手术剪与毛剪。3.3.镊：用于剥离、剪断和缝合。镊：用于剥离、剪断和缝合。4.4.钳：止血钳。钳：止血钳。5.5.其他：探针、玻璃分针、蛙板、锌铜弓、蛙心夹、其他：探针、玻璃分针、蛙板、锌铜弓、蛙心夹、动脉导管、气管插管等。动脉导管、气管插管等。（二）实验动物选择：选择健康动物。（二）实验动物选择：选择健康动物。第8页，共37页，编辑于2022年，星期三实验二实验二 计算机生物信号采集处理系统计算机生物信号采集处理系统 一、系统组成与工作原理一、系统组成与工作原理 PCLAB-UEPCLAB-UE由硬件和软件两部分构成，硬件主要完由硬件和软件两部分构成，硬件主要完成对各种生物电信号与非电生物信号进行调理、放大，成对各种生物电信号与非电生物信号进行调理、放大，并对信号进行模并对信号进行模/数（数（A/DA/D）转换，使之进入计算机。软）转换，使之进入计算机。软件主要对已经数字化了的生物信号进行显示、记录、存储、件主要对已经数字化了的生物信号进行显示、记录、存储、处理及打印输出，同时对系统各部分进行控制，与操作者处理及打印输出，同时对系统各部分进行控制，与操作者进行人机对话。进行人机对话。第9页，共37页，编辑于2022年，星期三二、主界面二、主界面 从上到下依次分为：标题栏、菜单栏、工具栏、状态提从上到下依次分为：标题栏、菜单栏、工具栏、状态提示栏及采样窗、控制面板和数据窗等其他多个相应的子窗口组示栏及采样窗、控制面板和数据窗等其他多个相应的子窗口组成。成。第10页，共37页，编辑于2022年，星期三三、使用方法三、使用方法1.1.设置：标准配置，恢复出厂时的配置。设置：标准配置，恢复出厂时的配置。2.2.新建：选择实验项目，填写实验信息，进入实验窗口，新建：选择实验项目，填写实验信息，进入实验窗口，开始实验。开始实验。3.3.采样：记录实验数据。采样：记录实验数据。4.4.控制面板参数调节：控制面板参数调节：（1 1）通道功能调节；）通道功能调节；（2 2）刺激参数调节。）刺激参数调节。5.5.存储：文件保存位置：存储：文件保存位置：F F：/，文件名：，文件名：0707水养水养3-3-呼吸呼吸 （左（左2 2）。）。6.6.编辑：编辑：打开原文件打开原文件选择选择复制复制打开打开“工具工具”下的下的“画图画图”处理文件处理文件复制图片复制图片存盘到存盘到F F：/。第11页，共37页，编辑于2022年，星期三实验三实验三影响血液凝固的因素影响血液凝固的因素红细胞脆性的测定红细胞脆性的测定血红蛋白的测定血红蛋白的测定第12页，共37页，编辑于2022年，星期三影响血液凝固的因素影响血液凝固的因素 表表1 1 血液凝固及其影响因素血液凝固及其影响因素试试管号管号实验处实验处理理凝血凝血时间时间（秒）（秒）1 1空白空白2 2液体石蜡液体石蜡4 4滴滴3 3棉花少棉花少许许4 4冰水冰水环环境境5 5肝素肝素4 4滴滴6 6草酸草酸钾钾4 4滴滴7 7肺肺组织组织浸液浸液4 4滴滴5 5号管加号管加CaClCaCl2 24 4滴滴6 6号管加号管加CaClCaCl2 24 4滴滴第13页，共37页，编辑于2022年，星期三【注意事项注意事项】l.l.采血过程要尽量快，以减少计时误差，对比采血过程要尽量快，以减少计时误差，对比实验的采血时间要紧接着进行。实验的采血时间要紧接着进行。2.2.每支试管口径大小及采血量要相对一致，不每支试管口径大小及采血量要相对一致，不可相差太大。可相差太大。3.3.判断凝血的标准要一致，一般以倾斜试管达判断凝血的标准要一致，一般以倾斜试管达4545时试管内血液不见流动为准。时试管内血液不见流动为准。第14页，共37页，编辑于2022年，星期三红细胞脆性的测定红细胞脆性的测定 1.1.溶液配置溶液配置表表2 2 不同浓度不同浓度NaClNaCl溶液配制溶液配制管管 号号1 12 23 34 45 56 67 78 89 910101%NaCl1%NaCl（mLmL）7.07.06.56.56.06.05.55.55.05.04.54.54.04.03.53.53.03.02.52.5蒸蒸馏馏水水(mL)(mL)3.03.03.53.54.04.04.54.55.05.05.55.56.06.06.56.57.07.07.57.5NaClNaCl浓浓度度（%）0.700.700.650.650.600.600.550.550.500.500.450.450.400.400.350.350.300.300.250.25第15页，共37页，编辑于2022年，星期三2.2.结果观察结果观察未溶血试管：液体下层有大量红细胞下沉，上层为无色透明，未溶血试管：液体下层有大量红细胞下沉，上层为无色透明，表明无红细胞破裂。表明无红细胞破裂。不完全溶血试管：液体下层有红细胞下沉，上层出现透不完全溶血试管：液体下层有红细胞下沉，上层出现透明淡红色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血。明淡红色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血。完全溶血试管：液体完全变成透明红色，管底无红细胞下沉。完全溶血试管：液体完全变成透明红色，管底无红细胞下沉。第16页，共37页，编辑于2022年，星期三【注意事项注意事项】1.1.试管要干净，加抗凝血的量要一致。试管要干净，加抗凝血的量要一致。2.2.配制配制NaCINaCI溶液时应力求准确、无误。溶液时应力求准确、无误。3.3.混匀时，轻轻倾倒混匀时，轻轻倾倒1 12 2次，损少机械震动，次，损少机械震动，避免人为溶血。避免人为溶血。4.4.静置时间足够，应在光线明亮处判定结果。静置时间足够，应在光线明亮处判定结果。第17页，共37页，编辑于2022年，星期三血红蛋白测定血红蛋白测定先检查血红蛋白吸管和测定管是否清洁，如不清洁则依次用自先检查血红蛋白吸管和测定管是否清洁，如不清洁则依次用自来水来水蒸馏水蒸馏水无水乙醇清洗。无水乙醇清洗。将将0.1N0.1N盐酸加入测定管中至刻度盐酸加入测定管中至刻度“2”2”处。处。用血红蛋白吸管吸取血液至刻度用血红蛋白吸管吸取血液至刻度20l20l处，用脱脂棉擦净外壁血液处，用脱脂棉擦净外壁血液后，立即将血液缓缓吹入测定管的盐酸中，并利用上层盐酸将吸后，立即将血液缓缓吹入测定管的盐酸中，并利用上层盐酸将吸管反复洗涤多次（避免起泡），使吸管中的血液全部进入盐酸液管反复洗涤多次（避免起泡），使吸管中的血液全部进入盐酸液层中，混匀。层中，混匀。酸化酸化10min10min后，逐滴加入蒸馏水使液体颜色变浅，边加边混匀并与标准后，逐滴加入蒸馏水使液体颜色变浅，边加边混匀并与标准比色板比较，至二者颜色相同为止。比色板比较，至二者颜色相同为止。读出测定管内液体凹面最低处的刻度，即为每读出测定管内液体凹面最低处的刻度，即为每100ml100ml血液中血红蛋白血液中血红蛋白的克数。的克数。第18页，共37页，编辑于2022年，星期三【注意事项注意事项】1.1.吹血入测定管时，不宜用力过猛，避免起泡吹血入测定管时，不宜用力过猛，避免起泡以影响读数。以影响读数。2.2.稀释时应逐滴加入，防止稀释过量。稀释时应逐滴加入，防止稀释过量。3.3.血液与盐酸作用时间不能少于血液与盐酸作用时间不能少于10min10min，否则血，否则血红蛋白不能充分转变为高铁血红蛋白，使结红蛋白不能充分转变为高铁血红蛋白，使结果偏低。果偏低。4.4.用血红蛋白吸管吸血时要准确，比色应在自用血红蛋白吸管吸血时要准确，比色应在自然光下进行。然光下进行。第19页，共37页，编辑于2022年，星期三实验报告的撰写实验报告的撰写1 1 实验原理实验原理2 2 材料与方法材料与方法2.1 2.1 主要器材主要器材2.2 2.2 主要药品主要药品2.3 2.3 实验动物实验动物2.4 2.4 实验方法实验方法2.4.1 Hb2.4.1 Hb测定：按鱼类生理学实验方法进行测定：按鱼类生理学实验方法进行11。2.4.2 RBC2.4.2 RBC脆性测定：按鱼类生理学实验方法进行脆性测定：按鱼类生理学实验方法进行11。2.4.3 2.4.3 影响血凝因素：按鱼类生理学实验方法进行影响血凝因素：按鱼类生理学实验方法进行11。第20页，共37页，编辑于2022年，星期三3 3 实验结果实验结果3.1 Hb3.1 Hb含量及含量及RBCRBC脆性测定脆性测定表表1 1 鳙鱼鳙鱼HbHb含量及含量及RBCRBC脆性测定脆性测定分分组组HbHb测测定定含量（含量（g/Lg/L）RBCRBC脆性脆性测测定（定（NaCl%NaCl%）最小抵抗最小抵抗最大抵抗最大抵抗实验组实验组对对照照组组75750.480.480.400.400.330.330.210.21第21页，共37页，编辑于2022年，星期三3.2 3.2 不同因素对血液凝固时间的影响不同因素对血液凝固时间的影响表表2 2 血液凝固及其影响因素血液凝固及其影响因素试试管号管号实验处实验处理理凝血凝血时间时间（秒）（秒）1 1空白空白2 2液体石蜡液体石蜡4 4滴滴3 3棉花少棉花少许许4 4冰水冰水环环境境5 5肝素肝素4 4滴滴6 6草酸草酸钾钾4 4滴滴7 7肺肺组织组织浸液浸液4 4滴滴5 5号管加号管加CaClCaCl2 24 4滴滴6 6号管加号管加CaClCaCl2 24 4滴滴第22页，共37页，编辑于2022年，星期三4 4 分析与探讨分析与探讨4.1 Hb4.1 Hb测定结果比对照高（或低、或基本一致），从操作过程测定结果比对照高（或低、或基本一致），从操作过程 方面说明原因：方面说明原因：。4.2 RBC4.2 RBC脆性测定结果，比对照组相比，最小抵抗高（或低、脆性测定结果，比对照组相比，最小抵抗高（或低、或基本一致），最大抵抗或基本一致），最大抵抗，从操作过程方面说明，从操作过程方面说明 原因：原因：。4.3 4.3 凝血时间测定结果表明，凝血时间测定结果表明，处理能加快（抑制或不处理能加快（抑制或不 凝）血液凝固，为什么？凝）血液凝固，为什么？管加管加CaClCaCl2 2后凝固，为什么？后凝固，为什么？（从凝血机制分析）（从凝血机制分析）5 5 参考文献参考文献1 1 杨秀平杨秀平.动物生理学实验动物生理学实验M.M.北京：高等教育出版社，北京：高等教育出版社，2004.85-99.2004.85-99.第23页，共37页，编辑于2022年，星期三实验四实验四 心肌收缩的特点心肌收缩的特点【实验目的实验目的】学习蟾蜍心脏活动描记的方法，观察心肌收缩的特点。学习蟾蜍心脏活动描记的方法，观察心肌收缩的特点。【实验原理实验原理】心肌的有效不应期特别长，几乎占据了整个收缩心肌的有效不应期特别长，几乎占据了整个收缩 期和舒张早期。在此期内任何刺激均不能引起心肌收期和舒张早期。在此期内任何刺激均不能引起心肌收 缩。因此心肌不会产生强直收缩，心脏总是有节律的缩。因此心肌不会产生强直收缩，心脏总是有节律的 舒缩。在心脏舒张早期之后，给心肌一次有效刺激，舒缩。在心脏舒张早期之后，给心肌一次有效刺激，会引起心脏一次期前收缩，紧接着出现一次较长的间会引起心脏一次期前收缩，紧接着出现一次较长的间 歇歇代偿间隙。代偿间隙。第24页，共37页，编辑于2022年，星期三【实验对象实验对象】蛙或蟾蜍蛙或蟾蜍【实验药品实验药品】任氏液任氏液【实验方法与步骤实验方法与步骤】1.1.实验准备实验准备（1 1）在体蛙心制备：取蛙一只，破坏脑、脊髓，仰卧固）在体蛙心制备：取蛙一只，破坏脑、脊髓，仰卧固定于蛙板上。左手持镊子提起胸骨后端的皮肤剪一小定于蛙板上。左手持镊子提起胸骨后端的皮肤剪一小口，然后向左、右两侧锁骨外侧剪开皮肤、肌肉，剪口，然后向左、右两侧锁骨外侧剪开皮肤、肌肉，剪断左右锁骨，使创口呈一倒三角形，充分暴露心脏部断左右锁骨，使创口呈一倒三角形，充分暴露心脏部位，并用眼科剪剪开心包膜，彻底暴露心脏。位，并用眼科剪剪开心包膜，彻底暴露心脏。第25页，共37页，编辑于2022年，星期三（2 2）观察心脏的结构）观察心脏的结构 识别蛙心脏。自心脏腹面可观察到心室、识别蛙心脏。自心脏腹面可观察到心室、心房、动脉球和主动脉。用玻璃分针向前翻转心房、动脉球和主动脉。用玻璃分针向前翻转 蛙心，暴露心脏背面可观察到静脉窦和心房。蛙心，暴露心脏背面可观察到静脉窦和心房。（3 3）连接实验装置）连接实验装置 将蛙心夹上的细线与张力换能器相连，让将蛙心夹上的细线与张力换能器相连，让 心脏搏动信号传入计算机生物信号采集处理系心脏搏动信号传入计算机生物信号采集处理系 统。将铜丝与心室接触良好并固定稳妥后，与统。将铜丝与心室接触良好并固定稳妥后，与 刺激器的输出连接。刺激器的输出连接。第26页，共37页，编辑于2022年，星期三2.2.实验项目实验项目（1 1）描记正常曲线，观察曲线的收缩相和舒张相。）描记正常曲线，观察曲线的收缩相和舒张相。（2 2）用中等强度的单个阈上刺激在收缩期刺激心室，）用中等强度的单个阈上刺激在收缩期刺激心室，有何变化？为什么？有何变化？为什么？（3 3）用中等强度的单个阈上刺激在舒张中后期刺激心）用中等强度的单个阈上刺激在舒张中后期刺激心 室，有何变化？为什么？室，有何变化？为什么？（4 4）心肌）心肌“全或无全或无”反应：用丝线在静脉窦与心房之反应：用丝线在静脉窦与心房之 间作一结扎，心脏停止跳动。然后给予阈下及不间作一结扎，心脏停止跳动。然后给予阈下及不 同强度的阈上刺激，观察蛙心收缩强度的变化。同强度的阈上刺激，观察蛙心收缩强度的变化。第27页，共37页，编辑于2022年，星期三【结果及分析结果及分析】1.1.心缩期单个阈上刺激，心脏有何变化，为什么？心缩期单个阈上刺激，心脏有何变化，为什么？2.2.心舒期单个阈上刺激，心脏有何变化，为什么？心舒期单个阈上刺激，心脏有何变化，为什么？3.3.第一结扎后，心房、心室活动有何变化，为什么？第一结扎后，心房、心室活动有何变化，为什么？4.4.阈下刺激心脏的收缩曲线幅度有何变化，为什么？阈下刺激心脏的收缩曲线幅度有何变化，为什么？5.5.不同强度的单个阈上刺激刺激，心脏的收缩曲线幅度有何变化，为不同强度的单个阈上刺激刺激，心脏的收缩曲线幅度有何变化，为什么？什么？第28页，共37页，编辑于2022年，星期三【注意事项注意事项】1.1.破坏蛙的大脑和脊髓要彻底。破坏蛙的大脑和脊髓要彻底。2.2.经常给心脏滴加任氏液，以保持心脏适宜的经常给心脏滴加任氏液，以保持心脏适宜的环境。环境。3.3.张力传感器与蛙心夹之间的丝线应保持适宜张力传感器与蛙心夹之间的丝线应保持适宜的紧张度。的紧张度。4.4.铜丝与心室接触良好的同时，还应尽量不让铜丝与心室接触良好的同时，还应尽量不让其阻碍心脏的自发收缩。其阻碍心脏的自发收缩。第29页，共37页，编辑于2022年，星期三实验四实验四 心血管活动的神经体液调节心血管活动的神经体液调节1 1 原理：心血管功能活动的稳定受神经及体液调节。原理：心血管功能活动的稳定受神经及体液调节。2 2 材料：家兔、采集系统、压力换能器、材料：家兔、采集系统、压力换能器、AchAch、846846。3 3 方法：参照方法：参照动物生理学实验动物生理学实验和实验录像进行和实验录像进行。结果：见图。结果：见图。第30页，共37页，编辑于2022年，星期三实验五实验五 呼吸运动的调节呼吸运动的调节1 1 原理：呼吸运动受内、外环境刺激的影响。原理：呼吸运动受内、外环境刺激的影响。2 2 材料：家兔、采集系统、压力换能器、材料：家兔、采集系统、压力换能器、AchAch、2%2%乳酸、乳酸、COCO2 2、“846846”。3 3 方法：参照方法：参照动物生理学实验动物生理学实验和实验录像进行和实验录像进行。4 4 结果：见图。结果：见图。第31页，共37页，编辑于2022年，星期三实验六实验六 离体小肠平滑肌的生理特性离体小肠平滑肌的生理特性1 1 原理：平滑肌具有特定的生理特性，对化学、温度和原理：平滑肌具有特定的生理特性，对化学、温度和 牵拉刺激非常敏感。牵拉刺激非常敏感。2 2 材料：家兔、采集系统、张力换能器、材料：家兔、采集系统、张力换能器、AchAch。3 3 方法：参照方法：参照动物生理学实验动物生理学实验和实验录像进行和实验录像进行。4 4 结果：见图。结果：见图。第32页，共37页，编辑于2022年，星期三实验七实验七 影响尿生成的因素影响尿生成的因素1 1 原理：观察不同生理因素对动物尿液量的影响。原理：观察不同生理因素对动物尿液量的影响。2 2 材料：家兔、垂体后叶素、材料：家兔、垂体后叶素、10%NaCl10%NaCl、20%G.S20%G.S、AchAch、“846”846”。3 3 方法：参照方法：参照动物生理学实验动物生理学实验和实验录像进行。和实验录像进行。4 4 结果：记录结果：记录3min3min尿量。尿量。4.1 4.1 正常尿量记录（正常尿量记录（3min3min）；）；4.2 4.2 静脉注射静脉注射0.9%NaCl 20mL0.9%NaCl 20mL（3737）；）；4.3 4.3 静脉注射静脉注射0.01%AD 0.30.01%AD 0.30.5mL0.5mL；4.4 4.4 静脉注射静脉注射20%G.S 10mL20%G.S 10mL（3737）；）；4.5 4.5 静脉注射垂体后叶素静脉注射垂体后叶素0.3mL0.3mL；第33页，共37页，编辑于2022年，星期三实验八实验八 刺激与反应的关系刺激与反应的关系 1 1 原理：用蛙的坐骨神经原理：用蛙的坐骨神经-腓肠肌标本研究刺激与反应腓肠肌标本研究刺激与反应 的关系和肌肉收缩的特性。的关系和肌肉收缩的特性。2 2 材料：蟾蜍。材料：蟾蜍。3 3 方法：参照方法：参照动物生理学实验动物生理学实验和实验录像进行。和实验录像进行。第34页，共37页，编辑于2022年，星期三第35页，共37页，编辑于2022年，星期三第36页，共37页，编辑于2022年，星期三4 4 结果结果第37页，共37页，编辑于2022年，星期三