维生素类药物的分析 (6)讲稿.ppt

关于维生素类药物的分析(6)第一页，讲稿共七十三页哦基本要求基本要求一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法的关系。一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法的关系。二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。三三、掌掌握握维维生生素素D D的的HPLCHPLC含含量量测测定定法法和和维维生生素素E E的的GCGC含含量量测测定法。定法。四四、掌掌握握维维生生素素B B1 1非非水水溶溶液液滴滴定定法法与与维维生生素素C C碘碘量量法法的的测测定原理、方法与注意事项。定原理、方法与注意事项。五、熟悉本类药物其他的含量测定方法。五、熟悉本类药物其他的含量测定方法。六、熟悉本类药物杂质检查方法。六、熟悉本类药物杂质检查方法。返 回第二页，讲稿共七十三页哦概述概述维生素：维生素：是维持人体正常代谢机能所必是维持人体正常代谢机能所必需的需的 微量营养物资。微量营养物资。人体不能合成维生素。人体不能合成维生素。第三页，讲稿共七十三页哦 VitA、D2、D3、E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。、叶酸、烟酸、泛酸等。分类分类按溶解度分按溶解度分第四页，讲稿共七十三页哦-H VitA醇醇-COCH3 VitA醋酸酯醋酸酯-COC15H31 VitA棕榈酸酯棕榈酸酯R:第一节第一节 维生素维生素A结构：结构：性质：性质：1.溶解性：脂溶性溶解性：脂溶性2.不稳定性：氧化成醛酸、脱水成脱水维生素、不稳定性：氧化成醛酸、脱水成脱水维生素、3.紫外吸收：紫外吸收：325-328 nm，可用于鉴别与含量测定，可用于鉴别与含量测定4.与三氯化锑显色：产生不稳定的蓝色与三氯化锑显色：产生不稳定的蓝色第五页，讲稿共七十三页哦（一）三氯化锑反应（一）三氯化锑反应反应条件：反应条件：无水无醇（水可使三氯化锑水解成氯化氧锑）无水无醇（水可使三氯化锑水解成氯化氧锑）CHCl3鉴别试验鉴别试验二、二、第六页，讲稿共七十三页哦max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UV法法（二）（二）max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰第七页，讲稿共七十三页哦去水去水VitA（VitA3）VitA第八页，讲稿共七十三页哦立体异构体立体异构体氧化降解产物氧化降解产物合成中间体合成中间体UV法法（一）（一）含量测定含量测定三、三、维生素维生素A A2 2维生素维生素A A3 3环氧化物环氧化物维生素维生素A A醛醛维生素维生素A A酸酸第九页，讲稿共七十三页哦三氯化锑比色法三氯化锑比色法（二）（二）优点优点 简便快速简便快速max 618nm620nm标准曲线法标准曲线法缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定（5 10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差1专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性（二）（二）蓝色蓝色+3SbClVitA返 回第十页，讲稿共七十三页哦氨基嘧啶环氨基嘧啶环CH2噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱)第二节第二节 维生素维生素B1HClCl-第十一页，讲稿共七十三页哦（一）（一）溶解性溶解性1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性（二）（二）UV共轭双键共轭双键max=246nm结构与性质结构与性质一、一、第十二页，讲稿共七十三页哦与生物碱与生物碱（三）（三）硫色素反应硫色素反应（四）（四）嘧啶环嘧啶环 噻唑环噻唑环 （五）盐酸根（五）盐酸根 呈氯化物的反应，用于鉴别。呈氯化物的反应，用于鉴别。第十三页，讲稿共七十三页哦ChP鉴别试验鉴别试验二、二、（一）（一）硫色素反应硫色素反应第十四页，讲稿共七十三页哦第十五页，讲稿共七十三页哦硫色素硫色素2H第十六页，讲稿共七十三页哦VitB1H+H+H+H+（二）（二）沉淀反应沉淀反应第十七页，讲稿共七十三页哦Cl-反应反应（三）（三）其他反应其他反应第十八页，讲稿共七十三页哦三、三、含量测定含量测定喹那啶红亚甲蓝（紫红喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）天蓝）（一）（一）非水溶液滴定法非水溶液滴定法第十九页，讲稿共七十三页哦反应摩尔比为反应摩尔比为1：2第二十页，讲稿共七十三页哦l（二）紫外分光光度法l原理l维生素B1片的测定l讨论第二十一页，讲稿共七十三页哦（三）（三）硫色素荧光法硫色素荧光法原理原理1、荧光荧光硫色素硫色素异丁醇异丁醇铁氰化钾铁氰化钾1 1VitBNaOH第二十二页，讲稿共七十三页哦特点特点2、（1）灵敏度高，线性范围宽）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于）代谢产物不干扰，适用于 体液分析体液分析第二十三页，讲稿共七十三页哦第三节第三节 维生素维生素CL抗坏血酸抗坏血酸水溶性：水溶性：酸性：酸性：旋光性：旋光性：还原性：还原性：糖的性质：呋喃环糖的性质：呋喃环紫外吸收：紫外吸收：稀盐酸中稀盐酸中max为为243，中性或碱性中红移至中性或碱性中红移至265第二十四页，讲稿共七十三页哦1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性结构与性质结构与性质一、一、（一）（一）溶解性溶解性第二十五页，讲稿共七十三页哦二烯醇结构二烯醇结构二酮基结构二酮基结构二烯醇结构二烯醇结构（二）（二）还原性还原性第二十六页，讲稿共七十三页哦糖类的显色反应糖类的显色反应50结构与糖类相似结构与糖类相似（三）（三）糖类的性质糖类的性质第二十七页，讲稿共七十三页哦C3OH的的pKa=4.17C2OH的的pKa=11.57酸性酸性（四）（四）一元酸一元酸第二十八页，讲稿共七十三页哦L(+)抗坏血酸抗坏血酸活性最强活性最强手性手性C（C4、C5）（五）（五）光学活性光学活性*第二十九页，讲稿共七十三页哦与碱反应与碱反应（六）（六）水解性水解性第三十页，讲稿共七十三页哦第三十一页，讲稿共七十三页哦与氧化剂的反应与氧化剂的反应（一）（一）鉴别试验鉴别试验二、二、去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸OVitC第三十二页，讲稿共七十三页哦1、与、与AgNO3反应反应2、与、与2，6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应(ChP2005)氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色还原型还原型蓝色蓝色OH(ChP2005)第三十三页，讲稿共七十三页哦（玫瑰色）玫瑰色）（无色）（无色）第三十四页，讲稿共七十三页哦UV（二）（二）BP0.01mol/L HCl第三十五页，讲稿共七十三页哦三、杂质检查三、杂质检查 1.1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质溶液的澄清度与颜色：有色杂质 分光光度法分光光度法2.2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法铁、铜离子：原子吸收分光光度法第三十六页，讲稿共七十三页哦指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液原理原理1、碘量法碘量法（一）（一）含量测定含量测定四、四、第三十七页，讲稿共七十三页哦H+第三十八页，讲稿共七十三页哦 取本品约取本品约0.2g，精密称定，加新，精密称定，加新沸过的冷水沸过的冷水100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴，立即用碘滴定液（定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝）滴定，至溶液显蓝色，在色，在30秒内不褪。每秒内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg的的C6H8O6方法方法2、第三十九页，讲稿共七十三页哦（1）酸性环境）酸性环境 HAC （2）新沸冷新沸冷H2O减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度讨论讨论3、（3）立即滴定）立即滴定 赶走水中赶走水中O2减少减少O2的干扰的干扰第四十页，讲稿共七十三页哦（4）附加剂干扰的排除）附加剂干扰的排除片剂片剂 滑石粉滑石粉 过滤过滤注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 第四十一页，讲稿共七十三页哦CHHOOaS3a S O+H2N H ON2252HO NH COS3a第四十二页，讲稿共七十三页哦2，6-二氯靛酚钠滴定法法二氯靛酚钠滴定法法（二）（二）USPJP原理原理1、酚亚胺酚亚胺二氯靛酚二氯靛酚，-6 62 2VitCVitC第四十三页，讲稿共七十三页哦自身指示终点法自身指示终点法方法方法2、第四十四页，讲稿共七十三页哦第四节第四节 维生素维生素D维生素维生素D2一、结构与性质一、结构与性质第四十五页，讲稿共七十三页哦维生素维生素D3第四十六页，讲稿共七十三页哦开环的甾体开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。可用于鉴别。手性碳原子手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。：具有旋光性，可用于鉴别。多烯多烯：可进行紫外检测。：可进行紫外检测。第四十七页，讲稿共七十三页哦二、鉴别试验二、鉴别试验1.显色反应显色反应醋酐醋酐-硫酸反应硫酸反应 D2 黄黄 红红 紫紫 绿绿 D3 黄黄 红红 紫、蓝绿紫、蓝绿 绿绿 三氯化锑反应三氯化锑反应 橙红色渐变粉红橙红色渐变粉红三氯化铁反应三氯化铁反应 橙黄色橙黄色二氯丙醇和乙酰氯反应二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色绿色第四十八页，讲稿共七十三页哦2.比旋度鉴别比旋度鉴别维生素维生素D D2 2维生素维生素D D3 3溶溶 剂剂 浓浓 度度 比旋度值比旋度值无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇40mg/ml40mg/ml5mg/ml5mg/ml+102.5+102.5+107.5+107.5+105+105+112+112注意事项注意事项：应于容器开启：应于容器开启3030分钟内取样，分钟内取样，在溶液配制后在溶液配制后3030分钟内测定。分钟内测定。第四十九页，讲稿共七十三页哦 3.3.区别反应：区别反应：以以96%96%乙醇为溶剂，加乙醇和乙醇为溶剂，加乙醇和85%85%硫酸，硫酸，D D2 2显红色，在显红色，在570nm570nm处有最大吸收，处有最大吸收，D D3 3显黄色，显黄色，在在495nm495nm处有最大吸收。处有最大吸收。4.4.其他方法其他方法：TLCTLC、HPLCHPLC、制备衍生物测熔点、制备衍生物测熔点第五十页，讲稿共七十三页哦三、杂质检查三、杂质检查维维生生素素D D2 2中中麦麦角角甾甾醇醇的的检检查查：加加洋洋地地黄黄皂皂苷苷溶溶液液，混混合合，放放置置18h18h不不得得发发生生浑浑浊浊或沉淀。或沉淀。前维生素前维生素D D的光照产物的光照产物第五十一页，讲稿共七十三页哦四、含量测定方法四、含量测定方法 中国药典（中国药典（20052005年版）采用年版）采用正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法测定测定维生素维生素D D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为酯，该法分为三个方法三个方法。固定相：硅胶固定相：硅胶流动相：正己烷流动相：正己烷-正戊醇（正戊醇（997997：3 3）第五十二页，讲稿共七十三页哦第二法第二法：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：1 1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙 醚、制备供试液醚、制备供试液A A。2 2净化：供试液净化：供试液A A经液相色谱分离，准确收集含有维经液相色谱分离，准确收集含有维 生素生素D D及前维生素及前维生素D D混合物的全部流出液，制混合物的全部流出液，制 备成供试液备成供试液B B。固定相：固定相：ODSODS 流动相：甲醇流动相：甲醇-乙腈乙腈-水（水（5050：5050：2 2）3 3含量测定：取供试液含量测定：取供试液B B按第一法测定。按第一法测定。第一法第一法：用于无维生素：用于无维生素A A醇及其它杂质的干扰的情况醇及其它杂质的干扰的情况第五十三页，讲稿共七十三页哦第三法第三法：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下：如下：1 1制备供试液：取供试液制备供试液：取供试液A A，净化，水浴加热，得供，净化，水浴加热，得供 试液试液C C。制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。2 2含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样 对照液和供试液，按外标法定量。对照液和供试液，按外标法定量。返 回第五十四页，讲稿共七十三页哦苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇第五节第五节 维生素维生素E 第五十五页，讲稿共七十三页哦名名 称称R1R2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*第五十六页，讲稿共七十三页哦dl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯第五十七页，讲稿共七十三页哦结构与性质结构与性质一、一、苯环苯环+二氢吡喃环二氢吡喃环+饱和烃链饱和烃链1、UV2、乙酰化的酚羟基、乙酰化的酚羟基 易水解易水解緘緘緘緘O醌型化合物醌型化合物生育酚生育酚-+or OHHVitE杂质，需检查杂质，需检查第五十八页，讲稿共七十三页哦O生育红生育红（一）（一）硝酸反应硝酸反应橙红色橙红色鉴别鉴别二、二、7515HNO3VitE生育酚生育酚第五十九页，讲稿共七十三页哦（橙红色）（橙红色）生育红生育红生育酚生育酚HNO3强氧化剂强氧化剂第六十页，讲稿共七十三页哦三氯化铁联吡啶反应三氯化铁联吡啶反应（二）（二）第六十一页，讲稿共七十三页哦生育酚生育酚对对-生育醌生育醌O弱氧化剂弱氧化剂第六十二页，讲稿共七十三页哦血红色血红色第六十三页，讲稿共七十三页哦 =41.045.5max=284nmmin=254nm0.01%无水乙醇中无水乙醇中UV法法（三）（三）第六十四页，讲稿共七十三页哦薄层板薄层板 硅胶硅胶G展开剂展开剂 环己烷环己烷-乙醚（乙醚（4 ：1）显色剂显色剂 硫酸（硫酸（105 5）VitE Rf =0.7-生育酚生育酚 Rf =0.5-生育醌生育醌 Rf =0.9TLC法法（四）（四）第六十五页，讲稿共七十三页哦2.游离生育酚游离生育酚 杂质检查杂质检查 三、三、原理原理1.酸度酸度 以以NaOHNaOH滴定液（滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）体积控制。）体积控制。第六十六页，讲稿共七十三页哦四、四、含量测定含量测定GC法（法定方法）法（法定方法）（一）（一）GC特点特点1、选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不稳挥发性低、不稳定、极性强定、极性强衍衍生化易受样品蒸生化易受样品蒸气压限制气压限制第六十七页，讲稿共七十三页哦载气载气N2固定液固定液硅酮（硅酮（OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标内标正三十二烷正三十二烷 n 500 R2VitE测定的色谱条件测定的色谱条件2、内标法加校正因子内标法加校正因子第六十八页，讲稿共七十三页哦内标法内标法供试液（样品供试液（样品+内标）内标）内标物内标物对照液（对照对照液（对照+内标）内标）是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近第六十九页，讲稿共七十三页哦（二）（二）HPLC法法 外标法外标法 此外，还有铈量法、比色法此外，还有铈量法、比色法和荧光法和荧光法返 回第七十页，讲稿共七十三页哦练习与思考练习与思考AA型题型题 1.1.维生素维生素B B1 1的鉴别方法是的鉴别方法是A.A.三氯化铁反应三氯化铁反应 B.B.硫色素反应硫色素反应 C.C.柯柏反应柯柏反应 D.D.与碱性酒石酸铜试液反应与碱性酒石酸铜试液反应 E.E.双缩脲反应双缩脲反应第七十一页，讲稿共七十三页哦2.2.维生素维生素E E中国药典中国药典规定的含量规定的含量 测定方法为测定方法为A.A.非水溶液滴定法非水溶液滴定法 B.B.旋光法旋光法 C.HPLCC.HPLC法法 D.D.紫外分光法紫外分光法 E.GCE.GC法法第七十二页，讲稿共七十三页哦感谢大家观看第七十三页，讲稿共七十三页哦