蛋白质的性质实验优秀课件.ppt

蛋白质的性质实验第1页，本讲稿共13页一、实验目的一、实验目的n1、了解蛋白质的两性解离性质。n2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。n3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。n4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。n5、了解蛋白质变性与沉淀的关系。第2页，本讲稿共13页二、二、实验原理实验原理n蛋白质的两性解离性质n蛋白质等电点的概念n测蛋白质溶解度最低时的溶液pH值为其等电点n稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素n蛋白质沉淀反应的类型第3页，本讲稿共13页n蛋白质是由AA组成的高分子化合物，具有许多游离的氨基、羧基、咪唑基、胍基、巯基、酚基等，因此与AA一样，能象酸一样解离，也能象碱一样解离，也是两性电解质。蛋白质的两性电离性质第4页，本讲稿共13页蛋白质的两性解离性质第5页，本讲稿共13页 当溶液在某一 pH 值时，蛋白质所带正、负电荷相等，即总净电荷为零，此时溶液的 pH 称该蛋白质的等电点(isoelectric point)。蛋白质的等电点第6页，本讲稿共13页第7页，本讲稿共13页稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素第8页，本讲稿共13页蛋白质的变性蛋白质的性质与它们的结构密切相关。某些物理或化学因素，能够破坏蛋蛋白质的性质与它们的结构密切相关。某些物理或化学因素，能够破坏蛋白质的结构状态，引起蛋白质理化性质改变并导致其生理活性丧失。这种现白质的结构状态，引起蛋白质理化性质改变并导致其生理活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性象称为蛋白质的变性(denaturation)(denaturation)。第9页，本讲稿共13页蛋白质的变性n变性蛋白质通常都是固体状态物质，不溶于水和其变性蛋白质通常都是固体状态物质，不溶于水和其它溶剂，也不可能恢复原有蛋白质所具有的性质。它溶剂，也不可能恢复原有蛋白质所具有的性质。所以，蛋白质的变性通常都伴随着不可逆沉淀。引所以，蛋白质的变性通常都伴随着不可逆沉淀。引起变性的主要因素是热、紫外光、激烈的搅拌以及起变性的主要因素是热、紫外光、激烈的搅拌以及强酸和强碱等。强酸和强碱等。第10页，本讲稿共13页三、实验操作三、实验操作 具体参见实验指导书n蛋白质的盐析 n重金属离子沉淀蛋白质n某些有机酸沉淀蛋白质n有机溶剂沉淀蛋白质 n乙醇引起的变性与沉淀 第11页，本讲稿共13页四、四、结果处理结果处理 用、+、+、+等符号表示各管的混浊度。根据混浊度判断酪蛋白的等电点。最混浊的一管的pH值即为酪蛋白的等电点。五、五、注意事项注意事项 缓冲液的pH值必须准确。第12页，本讲稿共13页六、思考题六、思考题n1、稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素有哪些？n2、蛋白质变性与沉淀的关系。n3、解释蛋白质两性反应中颜色及沉淀变化的原因。n4、该方法测定蛋白质等电点的原理是什么？第13页，本讲稿共13页