分子生物学实验精选PPT.ppt

关于分子生物学实验第1页，讲稿共18张，创作于星期日基因多态性多态性是指在一个生物群体中，同时和经常存在两种或多种不连续的变异型或基因型(genotype)或等位基因(allele)，亦称遗传多态性(genetic polymorphism)或基因多态性。DNA片段长度多态性基因多态性DNA重复序列多态性单核苷酸多态性 第2页，讲稿共18张，创作于星期日DNA片段长度多态性(FLP)：即由于单个碱基的缺失、重复和插入所引起限制性内切酶位点的变化，而导致DNA片段长度的变化，又称限制性片段长度多态性。DNA重复序列的多态性(RSP)：主要表现于重复序列拷贝数的变异，如小卫星DNA和微卫星DNA。单核苷酸多态性(SNP)：即散在的单个碱基的不同，基因组中单核苷酸的缺失,插入与重复序列不属於SNP，但更多的是单个碱基的置换。第3页，讲稿共18张，创作于星期日CLEC 是是C type lectin（C型凝集素）家族基因型凝集素）家族基因 CLEC4M基因是基因是19号染色体上号染色体上C型凝集素家族中的一员，它型凝集素家族中的一员，它被证明是多种传染性疾病病毒的受体，如被证明是多种传染性疾病病毒的受体，如HIV-1,SARS-Cov,HCV等。等。该基因的第该基因的第4外显子的外显子的VNTR(Variable Number of Tandem Repeats，VNTR)在全球人类群体中存在在全球人类群体中存在3-9次重复的多态现象，次重复的多态现象，并被认为这种不同长度的多态可能和宿主对病毒的易感性有关。并被认为这种不同长度的多态可能和宿主对病毒的易感性有关。第4页，讲稿共18张，创作于星期日第5页，讲稿共18张，创作于星期日CLEC4M CLEC4M 与与SARSSARS体内存在一种SARS冠状病毒的受体L-SIGN，由CLEC4M基因所编码。该基因第4 4外显子存在3-93-9个6969bp的重复片段，人群中超过50%的人以7个重复为主，常见的基因型为7/77/7，5/55/5，7/5 7/5 等不同的纯合或杂合状态，这个重复区编码位于胞外受体的颈部。研究表明，纯合型如7/7或 5/5的个体较杂合型7/5的个体较少感染SARS病毒。第6页，讲稿共18张，创作于星期日CLEC 4MCLEC 4M基因序列基因序列第7页，讲稿共18张，创作于星期日实验原理原理：用裂解液和蛋白酶K裂解口腔黏膜细胞，释放DNA，用浓盐法沉淀蛋白质，离心去除蛋白质，再用异丙醇沉淀DNA。裂解液配方：10mM Tris-HCl，10mM KCl,10mM MgCl2,2mM EDTA,0.4M NaCl,1%SDS.第8页，讲稿共18张，创作于星期日第9页，讲稿共18张，创作于星期日2PCR mixddH2O引物1，引物22PCR mix 10l引物引物1，引物，引物2 各各0.4lddH2O 6.2l DNA样品样品 3l PCR反应体系，反应体系，总共总共20 l第10页，讲稿共18张，创作于星期日在在PCRPCR管盖上标记号码，便于辨认管盖上标记号码，便于辨认第11页，讲稿共18张，创作于星期日放入放入PCRPCR仪，并设置程序仪，并设置程序变性变性 95 5min 5min 95 20s 20s30循环循环 59 30s 30s 72 45s 45s延伸延伸 72 5min 5min第12页，讲稿共18张，创作于星期日PCR过程大概100分钟第13页，讲稿共18张，创作于星期日PCR仪器界面和参数第14页，讲稿共18张，创作于星期日紫外透射分析第15页，讲稿共18张，创作于星期日点 样将PCR扩增产物加入琼脂糖凝胶孔内，点样量10l第16页，讲稿共18张，创作于星期日100bp DNA marker，最亮的为500bp500bp杂合子，根据位置判断为589和727bp。杂带，分子量小，或是引物二聚体结果分析同学们，你们的基因是纯合还是杂合呢？第17页，讲稿共18张，创作于星期日感谢大家观看2022/10/12第18页，讲稿共18张，创作于星期日