UPLC现场培训教程.pdf

Empower 2 软件现场培训教材软件现场培训教材 目录目录 一一 登录登录 1 二二 编辑仪器方法和方法组编辑仪器方法和方法组(以以ACQUITY UPLCTM PDA 为例为例)2 三编辑仪器方法和方法组三编辑仪器方法和方法组(以以ACQUITY UPLCTM TUV 为例为例)8 四四 进样进样 12 1在控制面板上设置溶剂灌注及洗针程序。在控制面板上设置溶剂灌注及洗针程序。12 2平衡系统平衡系统/监视基线监视基线 13 3单进样单进样 13 4使用向导建立样品组和样品组方法使用向导建立样品组和样品组方法 14 五建立数据处理方法五建立数据处理方法 21 12D数据处理方法数据处理方法 21 2建立建立3D数据处理方法数据处理方法 30 六查看结果和视图筛选六查看结果和视图筛选 41 七预览结果并创建报告方法七预览结果并创建报告方法 41 八八 方法组的建立方法组的建立 44 九九 数据管理数据管理 47 1.项目的备份项目的备份 47 2项目的还原项目的还原 50 十项目管理十项目管理 54 1新建项目新建项目 54 2察看及更改项目属性察看及更改项目属性 57 3系统配置系统配置 58 1一一 登录登录 1 双击电脑桌面上的 Empower 快捷图标 出现 Empower 登录界面，输入用户名和密码。注：出厂设置的默注：出厂设置的默认认用用户帐号户帐号为为system，密码，密码为为manager。建。建议每个议每个系统系统都都建立建立自自己己的用的用户帐号户帐号和和密码密码。2.单击高级高级键,选择用户类型和 QuickStart 界面 3选择 QuickStart 界面，点击“确定”,然后选择待选定的操作项目以及色谱系统（仅查看数据可选择色谱系统中的“没有系统”），单击“确定”。2 4登录 Empower 的 QuickStart 界面。二二 编辑仪器方法和方法组编辑仪器方法和方法组(以以 ACQUITY UPLCTM PDA 为例为例)1监视区单击方法组编辑向导。3 2 选择选项。3弹出仪器方法编辑器。4单击 ACQUITY 二元溶剂管理器(BSM)常规选项栏：1）单击编辑溶剂 A 和溶剂 B 的名称；2)输入压力上限、下限，建议上限设为 10000psi；3）泵模式设置：等度设置：在梯度表内初始值行输入总流速及流动相配比；梯度设置：在梯度表内输入梯度流程及梯度曲线。4 5单击数据栏选取系统压力选项（可监视压力波动）。56单击 ACQUITY 样品管理器(ACQ-SM)进入通用栏编辑进样方法：7选择进样类型：1）不充满环针溢出（使用针溢出）-使用不充满定量环模式推荐进样模式。需额外消耗样品，进样准确范围为定量环体积的 25 75%。如果需要，单击标识出不充满环针溢出几样模式。62）不充满环定量环-压力辅助-适用于高通量和样品量很少进样，其不充满定量环默认设置为使用气泡的几样方式。3）充满定量环-压力辅助-这种进样方式准确，重现性好，但是需要 4 倍定量环体积的样品量。8.单击 ACQUITY_PDA 进入 PDA 编辑界面。1)3D 数据采集：在通用栏中选择其用 3D 数据，输入检测波长的范围；2)2D 数据采集：在通用栏中选择 2D 通道，最多可同时采集 8 通道 2D 数据。7 注：注：ACQUITY PDA检测检测器器“快速快速”时分辨率需时分辨率需设置设置到到1.2nm；采；采样样速率速率以一以一个色谱个色谱峰峰上的上的采采样样点不少于点不少于15个点个点为为准准。9.点击“文件”，选择“另存为”，输入仪器方法名称，点击“保存”；点击“文件”，选择“退出”。10.在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击 11在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择“无处理”、“无报告”），点击下一步。12输入方法组名称，单击“完成”。8三三 编辑仪器方法和方法组编辑仪器方法和方法组(以以 ACQUITY UPLCTM TUV 为例为例)1监视区单击方法组编辑向导 2.选择选项 3弹出仪器方法编辑器。4单击 ACQUITY 二元溶剂管理器(BSM)常规选项栏：9 1）单击编辑溶剂 A 和溶剂 B 的名称；2)输入压力上限、下限，建议上限设为 10000psi；3）泵模式设置：等度设置：在梯度表内初始值行输入总流速及流动相配比；梯度设置：在梯度表内输入梯度流程及梯度曲线。5.单击数据栏选取系统压力选项，在数据采集时可以监视压力波动。106ACQUITY 样品管理器(ACQ-SM)进入通用栏编辑进样方法：7选择进样类型 1）不充满环针溢出（使用针溢出）-使用不充满定量环模式推荐进样模式。需额外消耗 4ul 样品，进样准确范围为定量环体积的 25 75%。2）不充满环定量环-压力辅助-适用于高通量和样品量很少进样（不需要额外 4ul 样品）-其不充满定量环默认设置为使用气泡的几样方式。3）充满定量环-压力辅助-这种进样方式准确，重现性好，但是需要 4 倍定量环体积的样品量。8单击 ACQUITY TUV 进入 TUV 编辑界面。1）在中选择相应得波长模式；11 a.单波长模式如下图所示：b.双波长模式如下图所示：12注：注：ACQUITY TUV检测检测器器滤波常滤波常数数“快速快速”选项选项仅适仅适用用于于单单波长模式；采波长模式；采样样速率速率以以一一个色谱峰个色谱峰上的上的采采样样点不少于点不少于15个点个点为为准准。9.点击“文件”，选择“另存为”，输入仪器方法名称，点击“保存”；点击“文件”，选择“退出”。10.在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击 11在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择“无处理”、“无报告”），点击下一步。12.输入方法组名称，单击“完成”。四四 进样进样 1在控制面板上设置溶剂灌注及洗针程序。1）更换洗针溶剂后，鼠标右键点击样品管理器界面，选择灌注注射器。为了避免溶剂的交叉污染，建议运行 5 个循环。2）更换流动相后，鼠标点击二元溶剂管理器，选择灌注 A/B 溶剂。选中 A 和 B 两路流动 13相，建议灌注时间为 2 分钟。2点击进入平衡系统平衡系统/监视基线监视基线界面，选择相应的仪器方法，点击平衡平衡/监视器监视器，在监视窗口监视基线至系统平衡,点击。3单进样：点击，进入定义单进样参数定义单进样参数编辑界面，输入样品名、功能、方法组等参数。点击 144使用向导建立样品组和样品组方法。1）选择，然后单击，进入样品列表。2）单击新建样品组向导建立样品组。3）选择创建样品组方法类型为“LC 或或 PDA/MS”，然后点击 15 4）在列表中按下图所示选择样品表类型和样品板布局位置。点击下一步。5）“选择标准进样在那里开始”时选择“在样品组开始时”。检查开始加载样品瓶的位置是否正确，如表示第一个 plate 1，A1 位置。点击“下一步”16 6)选择标样的校正选项：7）在描述标样中需要设置一下内容：样品组中的标样数：x；每瓶标样进样次数:x；进样体积:x；运行时间：xx；方法组 xxx；点击“选项”：输入下一进样延迟时间 x；17点击下一步 8）样品数:x；每瓶样品进样次数:x;进样体积:x;运行时间:x 方法组 x;点击选项:输入下一进样延迟时间 x;点击下一步.9）在识别标准样界面中，输入标样名称，增量后缀使用 1。在识别样品界面中，输入 18样品名称，增量后缀使用 a。点击下一步。运行模式选项中选择“只测试”。查看摘要，点击下一步。注：弹出组分编辑器，输入标样中每个组分的名称（内标不需要输入含量）。可以直接关闭该窗口，在处理数据的时候再添加。10）查看摘要，估算运行时间等参数，点击下一步。19 11）点击完成，在菜单栏中选择文件，保存样品组方法并为方法组命名。12）从文件下拉菜单中选择保存样品组方法。13）为样品组方法命名，点击保存。20 14）选择需运行的样品组名称，点击运行。2115）样品组运行过程中，在“正在运行”栏中正在运行以及运行完毕的样品以红色显示。注：以向导建立的样品组注：以向导建立的样品组首行功能首行功能一一般般为为清除校正，清除校正，一一般删除该行或般删除该行或改为平衡改为平衡 五建立数据处理方法五建立数据处理方法 12D 数据处理方法 1）单击键，在中选择目标样品组 2）在样品组上点击鼠标右键选择查看相关通道，样品组在单个通道中显示。223）选择定最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看，会显示未处理的色谱图形。4)点击处理方法快捷键，选择创建新处理方法，点击确定。5)确认处理类型为 LC，积分方式可选择为传统，再点击使用处理方法向导，选择确定。注：使用注：使用Apextrack积分积分方法方法时不要时不要选选择跨通道内标择跨通道内标样样，这个功能仅适，这个功能仅适用用于于MS 6)常按鼠标左键，选择色谱图上最窄缝。注：在注：在色谱色谱图图区域区域方方可可以以放大某个需要放大某个需要监监测测的的峰峰。点击鼠标右键点击鼠标右键选选择全择全视图视图可可以以还原还原色谱色谱图。图。23 7)在色谱图的积分界面选择一段典型基线作为积分的阈值，点击下一步。248)常按鼠标左键，在基线上选取积分的起始时间点。9)建议选择最小峰高，选择所要积分的高度最小峰（或键入相应数值）。小于此峰高90%的峰将不被积分。点击下一步。2510)定量方法选择面积，组分面积选择含量，校正类型选择线形。点击下一步。11)跨通道内标样界面点击否。12)因为选择的是标样，点击峰 1 可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或者键入 运行样品相应的名称。26 添加于组分名称相匹配的标准含量，然后点击下一步。13)如果是多组分的混合样品，跳过添加含量的窗口直接点击下一步。（单组分需要在这 27里添加含量）。14)选择外标法：15)选择单一内标样，需要在下拉菜单中选择或键入内标相应得名称，然后点击下一步。16)选择多重内标需要输入所有内标的名称。28 17)为处理方法命名，点击完成。色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结果，包括积分。18)如需为积分方法添加积分事件，鼠标右键点击色谱图窗口，选择添加积分事件。积 29分事件所示功能会立刻应用于处理方法中。19)编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键。有任何更改均需再次保存处理方法。20)点击峰表底部可预览 2D 通道和峰。21)点击键，选择键，选择或或标签栏，右键点击目标样品组或通道并选择处理。22)在处理界面，选择使用指定的处理方法，选择相应的处理方法名称，点击清除校正，选择校正并定量。30 23)点击确定，数据处理，产生结果。可在结果栏中查看。2建立 3D 数据处理方法 1）单击键，在中选择目标样品组 2）在样品组上点击鼠标右键选择查看相关通道，样品组中各个数据在单个通道中显示。3）选择定最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看。314）在预览界面选择标签栏，会显示未处理的轮廓图。5）从处理处理下拉菜单中选择提取色谱选项。6）键入所需要提取得波长，点击回车键，得到该波长的色谱图。32 7）点击处理方法快捷键，选择创建新处理方法，确认处理类型为 PDA，积分方式可选择为传统，再点击使用处理方法向导，点击确定。8）常按鼠标左键，选择色谱图上最窄缝。注：在注：在色谱色谱图图区域区域方方可可以以放大某个需要放大某个需要监监测测的的峰峰。点击鼠标右键点击鼠标右键选选择全择全视图视图可可以以还原还原色谱色谱图。图。33 9）在色谱图的积分界面选择一段平滑的基线作为积分的阈值，点击下一步。3410）常按鼠标左键，在基线上选取积分的起始时间点。11）建议选择最小峰高，选择所要积分的高度最小峰（或键入相应数值）。小于此峰高 90%的峰将不被积分。点击下一步。3512）定量方法选择面积，组分面积选择含量，校正类型选择线形。点击下一步。13）跨通道内标样界面点击否。14）因为选择的是标样，点击峰 1 可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或者键入 运行样品相应的名称。36 添加于组分名称相匹配的标准含量，然后点击下一步。15）如果是多组分的混合样品，跳过添加含量的窗口直接点击下一步。（单组分需要在这里添加含量）。3716）选择外标法：17）选择单一内标样，需要在下拉菜单中选择或键入内标相应得名称，然后点击下一步。3818）选择多重内标需要输入所有内标的名称。19）PDA 纯化及匹配选项：3920）为处理方法命名，点击完成。色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结果，包括积分。21）在“文件”下拉菜单中选择“另存为”，将该方法另存为方法组。注：注：3D数据数据必须必须用方法组处理用方法组处理 4022）如需为积分方法添加积分事件，鼠标右键点击色谱图窗口，选择添加积分事件。积分事件所示功能会立刻应用于处理方法中。23）编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键。24)点击键，选择键，选择或或标签栏，右键点击目标样品组或通道并选择处理。25)在处理界面，选择使用指定的处理方法，选择相应的处理方法名称，点击清除校正，选择校正并定量。41 26)点击确定，数据处理，产生结果。可在结果栏中查看。六六 查看结果和视图筛选查看结果和视图筛选 1选择标签栏，使用视图筛选器从下拉菜单中选择今天。2选择需查看的结果，右键点击选择预览 3查看结果点击快捷键，查看每个组分的校正曲线。切换至主窗口点击。七预览结果并创建报告方法七预览结果并创建报告方法 1点击切换回结果表预览状态。2选中一个或多个结果，点击鼠标右键选择预览。42 3若选取一个结果，在预览窗口选择使用以下方法：使用缺省单个报告，单击确定。4.预览报告并查看数据。点击键修改报告。5.双击色谱图或峰结果表编辑报告属性。43 6.点击文件，选择保存，为新建的报告方法命名。点击预览报告。7.如需将报告保存为 PDF 格式，点击。44 八八 方法组的建立。方法组的建立。以上我们讲解了如何建立仪器方法、处理方法和报告方法，组合可以得到一个方法组。1监视区单击方法组编辑向导：452.弹出新方法组：选择仪器方法界面。选择相应的仪器方法，点击下一步。3选择缺省方法界面选择相应得处理方法和报告方法，导出方法缺省。点击下一步。4命名方法组，点击完成。46 5在运行样品时，方法组/报告方法中调用该方法组，可以自动完成采集、处理、报告数据流程。47九九 数据管理数据管理 1.项目的备份 1）在QuickStart界面，选择菜单“管理-备份当前项目”。2）出现“项目备份向导”，单击下一步。3）出现“项目备份向导-选择目的地”48 通过浏览选择目的地。建议选择在非操作系统安装的硬盘分区内。一旦选择完成，单击“确定”关闭后，回到项目备份窗口，单击“下一步”。494）出现“项目备份向导-备份显示”。确认数据的复制已经成功，再单击“下一步”。5）出现备份数据向导-开始画面。502项目的还原 1）在QuickStart界面，选择菜单“管理”，下拉菜单中选择“还原项目”。2）出现“还原项目向导”。51 3）通过“浏览”选择被还原的项目所在的路径，单击“确定”。4）单击下一步。525）如出现类似以下内容的对话框，则需为还原的项目另起一个名字。6）在“输入磁盘空间配额”页中，输入项目名，并注意此处的“表空间配额”应不得小于欲还原的项目原有的配额（数据文件大小），然后单击“下一步”。7）如果需要，可以在此页面中，选择该项目是否属于某个父项目。8）在“还原显示”中，如果出现如下对话框，单击“确定”。注：注：当当还原还原由由 Millennium 或或 Empower 的的先前版本先前版本创建的项目创建的项目时，需要时，需要为为该该项目选项目选择时区择时区。53 在选择时区的画面，如果是在中国大陆地区，建议选择“PRC”时区。然后单击“确定”。9）在“还原显示”中，等待数据还原结束后，单击“完成”。注：注：提示提示：在：在重装重装Empower软件之后，可软件之后，可以以通过通过还原项目还原项目将相关将相关的项目数据进的项目数据进行复行复原。原。54十项目管理十项目管理 1 新建项目新建项目 1）进入到Emopwer 2 的QuickStart界面。在菜单中选择“管理创建新项目管理创建新项目”。2）出现“新项目向导新项目向导”的对话框，选择新建项目的父项目：55 3）单击“下一步下一步”，弹出“新建项目向导表空间新建项目向导表空间”，表空间50MB为默认设置，可根据需要增减。4）出现“新建项目向导选项”页。选择用于本项目的选项，如果无法确定适当的设置，请接受默认选项。单击“下一步”。56 5）新建项目向导访问控制新建项目向导访问控制：根据需要选择设置对您所创建的项目具有访问权限的用户和用户组，或者接受缺省的选项，然后单击“下一步下一步”。6）新建项目向导新建项目向导-复制所选项复制所选项：需要选择复制的项目，一般选择Defaults项目。57注：注：此页此页的的复复制制是指从另是指从另一一个个项目项目复复制制现有现有设置设置，可，可以以复复制项目的制项目的“视图筛选器视图筛选器”、“自自定义定义字段字段”、“方法方法”和和“参参数数”。所所以以，一一般不般不允许允许更改更改或或使用使用Defaults项目项目中中的的任何任何数据。数据。7）新建项目向导输入名新建项目向导输入名：为新项目命名。2.查看及更改项目属性查看及更改项目属性 在建立了新项目以后，可以根据需要在不同的项目之间进行切换。1)进入Empower 2的QuickStart界面，选择菜单“管理改变系统/项目”。58 2)改变项目改变项目/系统系统：根据需要进行选择项目或者选择系统（如果存在二个或者二个以上的系统）。选择完毕后，单击确定。如果选择了“在该窗口切换项目/系统”，当前的项目/系统会被新选中的项目/系统所代替，如果选择了“为项目/系统打开新窗口”，则会为选中的项目重新打开另外一个QuickStart的界面。3)在新的项目/系统的QuickStart界面内即可进行下一步的操作。3系统配置系统配置 1）在QuickStart界面，选择菜单“视图视图-系统系统”，察看系统。592）出现系统信息窗口。在该窗口中，可以在地址栏中可以查看显示的地址是否与仪器的设置相同。此外，可从“仪器”选项卡里的“正常？”一栏中查看仪器状态，在正常情况下，应显示“是”字样。如有仪器在“正常？”一栏出现“否”，可单击“扫描仪器”进行检查。如检查后显示“是”，即恢复正常。注：注：当当仪器仪器联机联机出出现错误现错误，或，或者者出出现现“仪器出仪器出错错”字字样的样的时时候候，即即可通过采可通过采集服务集服务器属性器属性来来查看仪器查看仪器状态状态，判断判断可能可能引起引起该该问题问题的原的原因因。3)创建或连接到新的色谱系统 a.在QuickStart界面，选菜单“管理管理-新建系统新建系统”。60 b.出现“新建色谱系统向导-输入类型”页面，选择系统类型为“新建系统”。然后单击“下一步”。c.出现“新建色谱系统向导-选择系统”页面，在“可用仪器”组中，选中新系统的组件，然后用鼠标拖拽至右侧“新系统仪器”组中。选择完毕，单击“下一步”。如有误选，则如法，将误选的新系统仪器，用鼠标拖拽回“可用仪器”组中。61 注：注：可重复可重复使用使用已已配置系统配置系统中中的仪器的仪器，但但一一次只次只能能有有一一个个使用使用共享共享仪器的系统仪器的系统可可以在线。以在线。d.出现“新建色谱系统向导-访问控制”页面。注：注：您您创建系统创建系统时，时，您即您即为系统的为系统的所有者所有者。系统创建系统创建后，可后，可以以修修改系统的属性及更改改系统的属性及更改所所有者、访问权限有者、访问权限和配置和配置等详细信息等详细信息。4)删除色谱系统 a 在“配置配置”目录区，单击“系统系统”。62 b 在“系统系统”表中，右键单击要删除系统的行号，然后在菜单中选择“编辑编辑-删除删除”。c 出现“确认删除确认删除”提示框，单击“是是”。63d 再次出现“删除色谱系统删除色谱系统”提示框，此时需要选择“删除全部删除全部”。删除全部 从 Empower 数据库、Empower 节点和 Empower 数据库上的所有用户帐号中删除选定色谱系统。当不再配置实际系统时，请使用此选项。删除 从此数据库上的所有用户帐号中删除选定色谱系统，但保留采集服务器上配置的系统。Empower 节点继续运行该系统，可于稍后重新与其连接。当您不再需要该系统但其他用户仍需要它时，请使用此选项。e 如果出现如下对话框，请单击“确定确定”。待仪器空闲后，即可通过前述步骤，将系统删除。规则：规则：不能删除 MS 系统。即使该系统不再出现在列表中，它仍会出现在“仪器”选项卡中。物理连接到 Empower 节点的所有仪器将出现在该节点的仪器列表中。注：注：当当应应用程序用程序不不再再需要色谱需要色谱系统系统或或 Empower 节节点点上上不不再再配置配置实际实际系统系统时，时，请务请务必删除必删除该色谱该色谱系统。系统。删除色谱删除色谱系统系统前，前，以以确定确定要删除要删除的系统的系统是否是否正正在使用。在使用。否则否则，可能，可能会会导导致致数据数据丢失丢失。恭喜！您已经掌握了恭喜！您已经掌握了登录登录Empower 2 QuickStart界界面及在面及在该该界界面面下运下运行行、处理并报告数据的基处理并报告数据的基本功能本功能。