细胞技术方法和传代方法.ppt

关于细胞技术方法和传代关于细胞技术方法和传代方法方法现在学习的是第1页，共10页细胞的传代方法细胞的传代方法培养细胞的方法培养细胞的方法主要讲主要讲2方面问题：方面问题：现在学习的是第2页，共10页细胞计数n n培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。相同。n n血细胞计数器：手工计数细胞血细胞计数器：手工计数细胞n nCoulterCoulter计数仪：人工计数现在学习的是第3页，共10页细胞计数：1、将血球计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上。2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。3、静置3分钟。现在学习的是第4页，共10页n n4、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：计算：细胞数细胞数/ml4大格细胞总数大格细胞总数/410000注意：镜下偶见由两个以上细胞组成注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占占10%以上，说明分散不好，需重新制备以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。细胞悬液。现在学习的是第5页，共10页n n根据细胞生长的恃点，传代方法有3种：n n1悬浮生长细胞传代n n 离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。n n 直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l2一23，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。细胞传代方法细胞传代方法现在学习的是第6页，共10页n n2半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）n n 此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹n n打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。n n3贴壁生长细胞传代n n 采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25的胰蛋白酶液。现在学习的是第7页，共10页贴壁生长细胞传代方法：贴壁生长细胞传代方法：n n1 1 吸光培养瓶中的培养液吸光培养瓶中的培养液n n2 2 加入加入1-2 ml 0.251-2 ml 0.25的胰蛋白酶液的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖以消化液能覆盖整个瓶底为准）整个瓶底为准）n n静置2-10 min2-10 min（显微镜下动态监测）。（显微镜下动态监测）。n n3 吸去胰蛋白酶液，加入培养液。吸去胰蛋白酶液，加入培养液。n n4 用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液。细胞悬液。现在学习的是第8页，共10页n n5 离心，细胞沉淀用培养液制成悬液。n n5 吸取1/101/40细胞悬液，接种于新的培养瓶内。n n6 加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。n n7 将后者放入培养箱中培养。现在学习的是第9页，共10页感感谢谢大大家家观观看看现在学习的是第10页，共10页