纤维蛋白原测定.ppt

关于纤维蛋白原测定现在学习的是第1页，共14页v纤维蛋白原（Human Fibrinogen）一种由肝脏合成的具有凝血功能的蛋白质，是纤维蛋白的前体。分子量340，000，半衰期46日。血浆中参考值24克/升。纤维蛋白原由、三对不同多肽链所组成，多肽链间以二硫键相连。现在学习的是第2页，共14页v在凝血酶作用下，链与链分别释放出A肽与B肽，生成纤维蛋白单体。在此过程中，由于释放了酸性多肽，负电性降低，单体易于聚合成纤维蛋白多聚体。但此时单体之间借氢键与疏水键相连，尚可溶于稀酸和尿素溶液中。进一步在Ca+2与活化的因子作用下，单体之间以共价键相连，则变成稳定的不溶性纤维蛋白凝块，完成凝血过程。肝功能严重障碍或先天性缺乏，均可使血浆纤维蛋白原浓度下降，严重时可有出血倾向。现在学习的是第3页，共14页v血浆纤维蛋白原水平的变化与凝血障碍、出血、DIC、应激（因为它也是一种急性期蛋白）有关，而且由于不断有文献报道它与冠心病，心肌梗塞也有关系，因此临床上越发受到重视。不仅工作量增大而且对方法准确性的要求也越来越高。但至今WHO（世界卫生组织）、ICSH（国际血液学标准委员会）仍未明确提出一个纤维蛋白原的标准化或推荐方法，供临床常规使用。现在学习的是第4页，共14页v现有的方法大体上分三大类：v（1）物理化学测定法；v（2）免疫学测定法；v（3）基于凝血酶的作用，形成纤维蛋白的方法。现在学习的是第5页，共14页（1）物理化学测定法：这类方法又可分为盐析法（包括用亚硫酸钠、硫酸铵或氯化钠盐析，用蛋白质显色或比浊法测定），热变性沉淀法和电泳法等几种。这类方法都比较简单、快速，尤其适于急诊检验，但缺点是本法的特异性不强。所测的不是有凝固功能的纤维蛋白原，可能包括部分的降解产物和/或其它蛋白。而电泳法又太繁琐，不适于常规工作。现在学习的是第6页，共14页v（2）免疫学测定法：将纯纤维蛋白原作为抗原免疫动物，制成多克隆或单克隆抗体。然后用免疫胶乳、被动血凝或反向血凝、单向免疫扩散、火箭电泳以及ELISA等方法测定。优点是大部分方法简便，但缺点是所测的不仅是可凝固的纤维蛋白原，可能包括了它的降解产物（因为它们有共同抗原），也可能包括了障碍性纤维蛋白原（dysfibrinogens即N端谷氨酸位未羧化的无功能的纤维蛋白原,又称缺维生素K引起的蛋白质，PIVKA）。但免疫法也有一个好处，就是可用来测定PIVKA。如果一个患者总纤维蛋白原（用免疫学测定结果）不低，甚至增高，而功能性（即可凝固性）纤维蛋白原却明显减少，即可判断为存在PIVKA。肝病、维生素K缺乏等均可导致PIVKA升高，有临床诊断价值。总的说来，免疫学方法用于临床常规实验室仍存在一定问题。现在学习的是第7页，共14页v（3）基于凝血酶的作用，形成纤维蛋白的方法：v凝血酶凝固法（Clauss法），将凝血酶加到血浆中，使纤维蛋白原变成纤维蛋白，使出现凝固。在有足量的凝血酶时，与不同含量的纤维蛋白原作用，其出现凝固的时间与纤维蛋白原含量呈负相关。本法的干扰因素主要是肝素。在高浓度时可造成假的低值（可通过加入硫酸鱼精蛋白而消除）。v克劳斯法（Clauss法）是美国国家临床检验标准委员会（NCCLS）推荐的纤维蛋白原常规测定方法。现在学习的是第8页，共14页v现在的全自动凝血分析仪大部分在测PT时往往能够同时报告纤维蛋白原。其原理和理论根据是：当PT测定完成时，全部纤维蛋白原均变成纤维蛋白（相当于Clauss法血浆中加入了凝血酶），其形成的浊度与纤维蛋白的含量成正比。因此，不需另加任何试剂，即可由浊度直接推算出纤维蛋白原的含量。故本法又称为PT导出（或衍生）纤维蛋白纤维蛋白原测定原测定法，简称PT-Der法。由于此法使用的是比浊法，因此受到测定杯透光性能与血浆状态的影响比较大，对于溶血，黄疸，乳糜的标本，此方法会出现较大的结果偏差。现在学习的是第9页，共14页v我们科室现在使用的SYSMEX-CA1500全自动凝血仪与贝克曼贝克曼 ALC-ELITE-PRO全自动凝血仪都可以同时用Clauss法与PT-Der法对FIB进行测定。其中贝克曼贝克曼 的仪器可以在定标PT的同时自动得到PT-Der法测定FIB的比浊曲线，而SYSMEX的仪器则必须定标PT后使用仪器测出标准品各种浓度下的OD值与Clauss法测出的FIB值，然后自行设定曲线对应关系。现在学习的是第10页，共14页vPT-Der法与Clauss法结果对比现在学习的是第11页，共14页v比较这两种方法，PT衍生法其结果是在检测PT过程中演算而来的，更快速、简便，但其结果高于Clauss法的检测结果，有时失去可靠性，特别是在疾病状态下和溶栓治疗中。因为溶栓过程中，早、中期FDPs产物X、Y片段可产生一定的浊度影响比浊，而晚期产生的D、E片段虽不产生浊度变化，但影响凝血酶时间(TT)的结果。当血浆FIB含量正常时，两方法无显著差异或略高于Clauss法，但当FIB减低或增高时，PT-der法往往略高。相比之下，Clauss法在准确度与精密度以及检测速度方面都是很理想的选择。现在学习的是第12页，共14页v因此结合实际因素，我们在工作中为了方便节约时间与节约试剂成本可以使用PT-der法来进行FIB的测定，但是对于PT-der法测定后得到的异常结果标本必须用Clauss法进行复查，这样才能得到比较可靠的结果。现在学习的是第13页，共14页感感谢谢大大家家观观看看现在学习的是第14页，共14页