食用菌、园林树木、花卉栽培技术.doc

2022年-2023年建筑工程管理行业文档 齐鲁斌创作食用菌、园林树木、花卉栽培技术目 录第一部分 食用菌栽培技术1第一章 概述1第一节 食用菌的营养和药用价值1第二节 食用菌生产的发展前景3第二章 菌种生产5第一节 菌种生产流程5第二节 菌种生产常用设备仪器6第三节 培养基质配制技术7第四节 灭菌与消毒10第五节 菌种分离和提纯14第六节 菌种接种与扩大培养18第七节 菌种保藏方法19第三章 蘑 菇21第一节 对生活条件的要求21第二节 栽培技术22第四章 草菇27第一节 草菇对生活条件的要求27第二节 栽培技术28第五章 平菇（凤尾菇）33第一节 对生活条件的要求33第二节 平菇栽培料的配制34第三节 栽培技术36第六章 香菇39第一节 对生活条件的要求39第二节 栽培技术40第七章 食用菌的保鲜与加工45第一节 食用菌的保鲜贮藏45第二节 食用菌的加工45第三节 食用菌产品的分级49第二部分 园林树木花卉栽培技术51第一章 树木的繁殖方法51第二章 植树工程施工54第三章 常见树木的栽培56第四章 果品生产60第五章 林业生产65第六章 花卉生产68第一节 花卉概述68第二节 基础知识花卉分类71第三节 花卉与环境因子76第四节 露地花卉88第五节 水生花卉99第六节 花卉植物组织培养100第一部分 食用菌栽培技术第一章 概述食用菌是真菌中能形成大型子实体或菌核类组织，并能供食用（兼有药用）的种类。在真菌分类学上大多数属于担子菌亚门，少数属于子囊菌亚门。全世界在25万种真菌之中，约有1万余种为大型真菌，其中有近2000个种基本上可食用的菌。但目前约有80个种驯化栽培成功，其中有20多种具有商品生产价值。其中只有45种在很多国家中进行工业规模生产。食用菌生产发展迅速，栽培的国家发展到80多个，全世界食用菌年生产鲜菇量逐年递增。我国已成为世界食用菌生产的主要国家。19881989年间我国大陆生产鲜菇量，平菇80万吨，木耳36万吨，香菇32万吨，双孢蘑菇17万吨，草菇11万吨，银耳10万吨，猴头菇6万吨，金针菇4万吨，滑菇3.2万吨。此外还有金耳、灰树花、竹荪等栽种培菌和松口蘑、美味牛肝菌、蒙古口蘑，羊肚菌等野生菌。全国食用菌年产量达到200万吨。我国食用菌产品深加工能力也有较大发展。近年来，随着党在农村的一系列方针政策的落实，食用菌生产正成为一些地方的支柱产业，并成为广大农村脱贫致富的一项重要门路。因此，大力发展食用菌生产，对繁荣城乡经济，满足市场需要，增加出口商品，扩大对外贸易，支援国家建设等方面都有着重大的意义。第一节 食用菌的营养和药用价值一、蛋白质世界各国商业栽培的四种食用菌为双孢蘑菇、香菇、平菇和草菇。它们的蛋白质含量一般占其子实体鲜重的1.753.63%，最高为5.9%，然而典型的平均值为3.54%，按干重计算蛋白质含量为1935%。食用菌的蛋白质含量分别比芦笋和卷心菜高2倍；比柑桔高4倍，比苹果高12倍，虽低于动物肉类，但却高于其它大多数食物甚至包括牛奶。所以食用菌有“素中之荤”和“植物肉”的美称。二、必需氨基酸食用菌蛋白质中的氨基酸组成较全面，如双孢蘑菇含有19种氨基酸，香菇、平菇含有18种氨基酸。人体虽能把某些氨基酸转化为另一些氨基酸，但有9种氨基酸是人体不能自身合成的，它们被称为必需氨基酸，有赖氨酸、甲硫氨酸、色氨酸，苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、组氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸。通常栽培的食用菌含有人类所必需的9种氨基酸，其中赖氨酸含量最丰富，赖氨酸对促进记忆，增进智力有独特的作用，对婴幼儿和老年人健康十分重要。三、脂肪不同食用菌的脂肪含量占其干重的1.18.3%，平均含量为4%，基本不饱和脂肪酸至少占总脂肪酸的72%。这些非饱和脂肪酸主要为亚油酸，这种脂肪酸在总脂肪酸含量中的比例为：香菇为76%，草菇70%，双孢蘑菇为69%。在人们日常饮食中，非饱和酸是必需的营养物质。动物脂肪中所含的大量饱和脂肪酸，则可能对过多摄入的人不利。四、维生素食用菌中含有多种维生素，如含有硫氨素（维生素B1），核黄素（维生素B3），泛酸（维生素B3），烟酸（维生素B5），吡哆醇（维生素B6），叶酸（维生素B11），钴胺素（维生素B12），抗坏血酸（维生素C），麦角甾醇（维生素D原），生物素（维生素H）等。如双孢蘑菇每克干子实体中含有硫胺素1.14毫克，核黄素为5.0毫克。食用菌中抗坏血酸含量以香菇为最高达9.4毫克（每I00克干菇），凤尾菇7.4毫克双孢蘑菇为1.8毫克，草菇为1.4毫克，麦角甾醇（维生素D原）的含量以草菇为最高（0.47%）其次是香菇（0.27%）和双孢蘑菇（0.23%）银耳含量低（0.01%）。经紫外光照射，食用菌中的麦角甾醇可转化为维生素D。五、碳水化合物与纤维素戊糖、甲基戊糖、已糖，双糖氨基糖、糖醇、糖酸都是食用菌多糖的成分，平菇类的多糖含量为干重的46.681.8%，双孢蘑菇干重的60%为多糖。近年来，发现从食用菌中提取的水溶液性多糖成分可抑制肿瘤的生长。食用菌所含的纤维素为粗纤维，包括木质素，半纤维素，多缩戊糖和胶质等，如双孢蘑菇为10.40%香菇为11.5%12%。食物纤维素对人体健康很有益，可以减少胆盐的沉积和降低血液中胆固醇的含量，从而防止胆结石和高血压等。六、核酸据测定，双孢蘑菇的核酸含量在每百克干样品中为266克（其中RNA占有249克），凤尾菇为4.06克（RNA占385克），香菇为3.73克（RNA占3.6克），草菇为3.88克（RNA占3.59克）。双孢蘑菇、香菇含有一种特殊的双链RNA，称为蘑菇核糖核酸，能刺激机体产生干扰素，抑制病毒增殖，而且有一定抗肿瘤作用。所以经常食用一些香菇蘑菇等食用菌，可以预防流行性感冒、麻疹，肝炎等。食用菌除对身体有营养滋补作用外，还有很高的药用价值，能够调节人体的新陈代谢，降低血压，减少胆固醇，增进人体的健康。如木耳有润肺、通便、治痔、黑发和消化纤维的作用；银耳能提神生津，滋补强身、润肺、滋阴养胃、益气和血、补脑强心等；猴头菌可治疗消化不良，消化道溃疡和慢性胃炎等；马勃鲜嫩时可食，老熟后可止血，治疗胃出血；密环菌能治疗风湿、腰膝痛、四肢痉挛、小儿惊厥等；发光假蜜环菌能治疗急性胆囊炎；茯苓有利尿、养身等功效。食用菌用为一类药源，已引起各国医药工作者的重视，新的“食用菌药物”正在不断地研制出来。已经开发的如云芝肝泰、健肝片、云芝多糖、猪苓多糖、香菇多糖、猴菇菌片、灵芝糖浆、密环菌糖浆、猴头菌口服液等。第二节 食用菌生产的发展前景一、食用菌生产是发展生态农业的中心环节食用菌不仅在自然界能促进生物学降解和物质循环，而且在农业生态系统中，能加速物质再生，增加产品输出，提供人类所需要的营养物质和能量，使生物界形成良性循环。由于食用菌分解纤维素，木质素的能力很强能更好地利用木屑、秸杆、棉壳等农副产品。收获量营养丰富的食用菌外，种植食用菌后的培养料（菌渣），还可以多层次利用，或用为猪牛等家畜的饲料添加剂，或作为肥料肥田，或用为培养甲烷细菌产生沼气的原料等等。所以在农业生态系统中，有了食用菌生产这一环节，就可以建立一个生物能量和物质的良性循环网（图11）。肥料农业生产农副产品牲畜饲料畜牧水产业食用菌排泄物种菇后的培养料沼气池能源图11 食用菌在农业生态系统中的作用这样，食用菌在农业生态系统中，起了桥梁和纽带的作用，把农、林、牧、副、渔各行各业紧密联系起来，互相促进，形成了一个无废料生产，变废为宝，多层次利用物质和能量的生产体系，从而大大地提高了整个生态系统的生产能力。二、食用菌生产的发展前景食用菌是人类开发蛋白质资源的一项重要产业。随着现代生物技术的发展和应用，食用菌在人类生活和国民经济中的地位和作用日益显著，从而引起世界广泛的关注和重视，许多国家都采取措施积极加以发展。据有关资料报导，目前全世界食用菌产量正以每年10%的幅度增长，推动食用菌日益成为重要的国际性产业。特别是随着人类食物结构的改变和生活水平的提高，对低脂肪高蛋白的食用菌，更是越来越广泛地受到人们的喜爱，需求量与日俱增，欧美不少国家甚至把人平均食用菌的消费量，作为衡量生活水平高低的一个重要标准。所以发展食用菌生产是富有生命力的，前途极为广阔。为了进一步发展我国食用菌生产，开发新种，增加用途，扩大国内外市场，提高产值，要求发展新技术来扩大生产，提高质量。新技术的发展，不仅需要于优质野生菌的驯化栽培，开发资源潜力，提高选种，育种和栽培效果，保证高产优质，也需要在产后的加工精制，开发食用菌的食品、饮料、调味品、化妆品以及药用菌有效成分的提取和精制，提高经济效益。复习思考题：1什么叫食用菌？发展食用菌生产有何重大意义？2为什么食用菌有“素中之荤”和“植物肉”的美称？3食用菌含有哪些防癌抗癌的成分？4用图表示食用菌在农业生态系统中的作用？第二章 菌种生产在自然界中，食用菌繁衍后代依靠孢子，孢子借助风力传播到适宜的环境中，萌发成菌丝体。菌丝体生长繁衍达到生理成熟后，在一定的环境下，就可形成子实体。菌种，相当于农作物的种子，是食用菌生产最基本最重要的生产资料，是指供繁殖而分级制作的菌丝体培养物。第一节 菌种生产流程一、菌种生产类型根据菌种来源和生产目的，通常将菌种分为母种、原种、栽培种三级。（一）母种实验室内，经过孢子分离或组织分离提纯出来的菌株，它是生产其他菌种类型的原始种。母种俗称一级种，是生产上作为扩大培养的母株，一般用玻璃试管作为容器，按不同配方制成斜面培养基上进行接种，经过培养筛选提纯，转管扩大培养的过程。（二）原种俗称二级种。原种来自母种的扩大培养，待母种培育好后，接入瓶装的原种培养基上繁育，称为原种。（三）栽培种俗称三级种，是由原种扩大而来，待原种培育好后，接入瓶装或塑料袋的栽培种培养基上繁育，称为栽培种。二、菌种生产流程母种、培养基制备分离高压灭菌接种培养筛选原始母种确定母种中试后转管扩接·保贮原种、培养基制备常压或高压灭菌接种培养原种栽培种、培养基制备常压或高压灭菌接种培养栽培种第二节 菌种生产常用设备仪器一、制种设备（一）接种室与接种箱1接种室应设在厂房中心的背风干燥处，体积以57m3为宜。接种室外面应设一小间缓冲室，门不宜对开，要求装推拉门，必要时安装一个双层小型玻璃橱窗，便于内外物品传递，减少进出接种室的次数。接种室与缓冲室安装30瓦紫外灯及日光灯各一盏。有条件的可在接种室内放一台超净工作台，这样接种效果更好，2接种箱主要用木材和玻璃制成，有单人操作与双人操作箱两种。一般以双人相对操作的接种箱为好。箱长145cm，宽85cm，高160cm。箱内顶部安装一支20瓦日光灯和一支30瓦紫外灯。如图21。图21接种箱3超净工作台是一种局部层流（平行流）装置。它能在局部造成高洁度的工作环境。使用超净工作台进行接种分离有效可靠，操作方便，使人感到舒适。（二）培养室培养室是培养菌种的场所，房间要严实，每间不宜过大，以培养50006000瓶为宜，室内应设能开关的高低窗，并装有纱窗，以便调节空气，防止害虫进入。室内装多层培养架，以充分利用空间。装有控温设备，以满足菌种生长的要求。（三）灭菌设备1高压蒸汽灭菌锅目前工厂生产的灭菌锅有手提式、直立式、卧式三种。2常压蒸汽灭菌锅（土蒸锅）用土蒸锅灭菌时，要注意防止漏气及锅内水分烧干，要定时注入开水。（四）电热烘干箱用于璃璃器具的干热灭菌和测定基质的含水量，需制作盛装培养皿的铁质带盖的盒子盒的大小以能容810套培养皿为宜。（五）电热恒温箱主要用于培养母种。（六）冰箱用于低温保存菌种。二、仪器（一）显微镜用于观察、鉴别菌丝和孢子的形态和特征。（二）天平一般用架盘天平（感量0.10.5克）。要求精确称量时则用台式扭力天平或万分之一的电动分析天平。（三）温湿度计观察培养室与栽培室温度和湿度用。1最高最低温度计可以表示出一天中最高与最低的温度。2干湿球温度计用于观察培养室的温度和空气相对湿度。3自动温湿度计可以在纸上记录24小时或一周内温湿度的变化。（四）电炉用于加热溶解琼脂等培养基原料，可设置2000瓦电炉一个。第三节 培养基质配制技术一、母种培养基的配制（一）培养基的配方1广泛采用基础配方为马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（PDA）或将葡萄糖改为蔗糖即PSA培养基。其成分如下：马铃薯200克，葡萄糖或蔗糖20克，琼脂1825克，水1000毫升。根据菌类腐解类型用1%盐酸、乳酸或氢氧化钠调节PH值。2培养香菇、黑木耳、草菇、平菇，猴头、凤尾菇、蘑菇、银耳等食用菌的较适宜的培养基。（1）马铃薯200克，蔗糖20克，玉米粉30克，黄豆粉10克，酵母膏2克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫克。PH值自然。（2）马铃薯200克，蔗糖20克，玉米粉50克，石膏10克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升。PH值5.5。制作时应注意，加入黄豆粉的应与马铃薯同煮沸30分钟，待煮至25分钟时才能加入玉米粉，以免起糊，影响过滤，加入石膏的应在过滤后分装时加入，不要参加煮沸过滤，以免影响培养基的凝固。（3）马铃薯200克，蔗糖20克，琼脂20克，麦芽糖10克，栓皮栎木屑20克，水1000毫升。PH值6。（4）马铃薯200克，黄豆粉20克，蔗糖20克，麦芽糖15克，味精0.5克，维生素B1 10毫克，琼脂20克，水1000毫升。本配方适合黑木耳、平菇、草菇生长。（5）马铃薯200克，蔗糖20克，黄豆粉20克，石膏10克，琼脂20克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升。PH值自然。本配方适合香菇、蘑菇生长。（6）麸皮50克，米糠50克，甘薯200克，黄豆粉20克，蔗糖20克，琼脂20克，水1000毫升。PH值自然。本配方适合香菇、蘑菇生长。（7）麸皮100克，麦芽糖10克，蔗糖10克，蛋白质2克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁0.5克，过磷酸钙1克，琼脂30克，水1000毫升，PH值自然。本配方适合银耳芽孢萌发菌丝体。（8）麸皮50克，米糠50克，蔗糖20克，硫酸铵1克，琼脂20克，水1000毫升。本配方适合黑木耳、猴头，灵芝、金针菇、蜜环菌及安络小皮伞菌丝生长。（二）此外，还有众多培养基配方，制作过程基本相同，大致为：原料称取（溶解马铃薯切片，加1000毫升水煮）过滤液添加琼脂溶解加糖及其他分装试管塞棉塞高压灭菌凝固成斜面1溶液的配制按配方要求称出原料以常用配方为例。将马铃薯切片，厚度0.5厘米，加清水1000毫升，加热煮沸，直到马铃薯片能用指头戳破，用二层纱布过滤，取其滤液继续加热添加琼脂边加边搅拌，再过滤添加葡萄糖等，然后调试溶液的PH值。2装管母种培养基煮成后，趁热倒入分装的漏斗中，然后分装试管。装管时要使培养基直接流入管内。不得沾污上段试管壁，以免浸湿棉塞，引起污染。试管选用口径1.82.0厘米长约1820厘米，培养基在试管中的分装为管长度的四分之一为宜。3塞棉塞试管装好培养基后要立即塞好棉塞，用普通干净棉花制棉塞。对棉塞的要求：棉塞要求两头光滑。没有毛茬；棉塞要紧贴管壁，松紧适度；长短适度，棉塞长度以34厘米为宜，应将其三分之二旋入管口内，然后捆成把，外包一层报纸再放入灭菌锅进行灭菌。4高压蒸气灭菌一般采用手提式高压灭菌锅，蒸汽压1.1公斤厘米2，121温度经30分钟即可达到灭菌目的。5摆斜面灭菌后试管内培养基冷却50一60左右时将试管倾斜为试管长度的三分之二，待凝固后，方可直立保存。二、原种、生产种培养基的制法（一）培养基的配方：1木屑 麸皮（或米糠）培养基锯木屑（阔叶树）78%，麸皮（或米糠）20%，糖（蔗糖）1%，石膏粉1%，含水量65%适用于香菇、黑木耳、猴头、金针菇、银耳。2棉籽壳培养基（1）棉壳87%，过磷酸钙1%，石膏1%，石灰1%，水适量。适用于平菇、凤尾菇。在其中再加入2%的石灰则适用于草菇。（2）棉壳87%，糠10%，碳酸钙1%，石灰2%，水适量。适用于草菇（3）棉壳88%，糠10%，过磷酸钙1%，磷酸二氢钾0.2%，尿素0.4%，石膏1%，硫酸镁0.05%，水适量。适用金针菇。3稻草米糠培养基稻草（切碎长11.5寸）78%，细米糠（或麸皮）20%，石膏1%，石灰1%，水适量。适用于平菇、凤尾菇，在其中再加入2%石灰适用于草菇。4粪草培养基（适用于制作蘑菇菌种）（1）粪草（粪草比例64堆积发酵1520天）89%，米糠10%，石膏1%，水适量。（2）稻草（切成11.5寸长，用新鲜的猪牛尿浸一夜，沥干水，含水量65%），石膏1%，过磷酸钙1%。5废棉、稻草培养基（适用于制作蘑菇菌种）（1）稻草（11.5寸长）30%，棉壳或棉纺屑68%，复合肥与石膏各1%，发酵3天，含水量60%（2）棉纺屑88%，米糠10%，石膏1%，复合肥1%，发酵3天，含水量60%6谷粒培养基麦粒87%，石膏粉1%，碳酸钙2%，木屑10%，含水量60%（用于木腐生菌）麦粒87%，石膏粉1%，碳酸钙3%，发酵的牛粪粉10%，含水量60%（用于草腐生菌）以小麦、大麦、高粱、小米等谷物作原料适用于蘑菇，凤尾菇、毛木耳菌种（一瓶麦粒种需麦粒200克，蔗糖5克碳酸钙6克，水500毫升）。先将小麦粒用0.5%石灰水浸泡1216小时，捞出投入沸水煮1015分钟，待麦粒从半黄色转为浅褐色，注意不能让麦粒煮开花，否则淀粉渗出，极易感染细菌，晾干表面水趁热拌碳酸钙，装瓶时将瓶口套上漏斗，装毕后擦干净瓶口，塞棉塞。无菌高压灭菌比普通培养基延长30分钟，常压灭菌延长1小时。灭菌结束后及时取出，以免在锅内被余热烘干。（二）制作过程1拌料先根据培养料成分配方和要做的原种和生产种的数量，计算出各种原料的数量，然后称量，混合，加水拌料（一般加水量是原料干重的1.21.3倍）。拌时要求均匀一致，边拌料边加水，边试含水量，以便控制水分不致过多或过少。2测含水量料拌好后，要测一下含水量，一般要求在6065%。测法是将培养料握在手中捏紧，手指缝中有水印但无水滴流下即可。3分装，封瓶口培养料配制好后，进行分装，一般装入500750毫升的罐头瓶或菌种瓶，装瓶时随装随压紧，松紧要适当，过紧通气不良发菌慢；过松，菌丝生长稀疏无力，装量一般占瓶容量的45或至瓶肩，最后将料面压平，如是木屑培养基，还要用一根锥形木棒在瓶中打一直达瓶底的洞（洞直径上部1.5厘米，下部1厘米）以便菌丝生长繁殖，然后洗净瓶口瓶壁，塞上棉塞，再包上牛皮纸，也可以不用棉塞，用一层聚丙烯薄膜（或耐压聚乙烯薄膜）上加一层牛皮纸或报纸，包扎起来封住瓶口。4灭菌（1）高压蒸汽灭菌，一般采用大型卧式或立式高压锅，需1.41.5公斤厘米2的蒸汽压126，经1.52小时才可达到彻底灭菌的目的。（2）常压蒸汽灭菌：利用一般蒸笼或土消毒锅，在常压以100的温度下持续68小时。第四节 灭菌与消毒空气、水滴、沙土、尘埃，各种生物体及物表面或孔隙内，均存在大量的细菌。真菌孢子等，为了使培养基质能获得纯菌丝体，就必须采用物理或化学方法等手段进行灭菌或消毒。但这两者是不同的概念，往往被人们所混淆。消毒：采用物理、化学的方法除去物品表面上的病原菌，是一种不彻底的灭菌方法。灭菌：采用物理、化学的方法，使附着在物体孔隙内的微生物致死。是一种彻底的灭菌方法。灭菌方法：常用灭菌方式有热力灭菌、过滤灭菌、化学灭菌、辐射灭菌等四种。一、热力灭菌（一）火焰灭菌法将那些能耐受高温而不破坏的器物，金属用具直接放在火焰上烧灼，使随着在物体表面的细胞和孢子等烧焦，称为火焰灭菌。火焰灭菌适用于接种铲、针、耙等移植工具的灭菌，野外采集工具如小刀或解剖刀刃部灭菌。（二）干热灭菌法把能抗干热的器材物，如待灭菌的吸管、培养皿、试管、空三角瓶等玻璃器具及不能与蒸气充分接触的液体石腊等放入烘箱内在160以上烘烤0.51小时即可达到灭菌目的，灭菌器物入烘之前必须预先洗净，烘干，用干净纸张或皮包好，玻璃培养皿最好装进密封性能较好的金属罐内，并注明灭菌日期。（三）湿热灭菌利用蒸汽或沸水灭菌，称为湿热灭菌。由于湿热灭菌的穿透力比干热灭菌大，杀伤能力强，蛋白质，原生质胶体在湿热条件下容易变性凝固，酶系统容易被破坏，蒸汽进入细胞内凝结成水，能放出潜在热量而提高温度，更加增强杀菌力，常用的湿热灭菌方法有如下几种：1高压蒸汽灭菌法利用高温高压蒸汽进行灭菌的方法。高压蒸汽灭菌可以杀死一切微生物。包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐高温的个体，灭菌的温度随蒸汽压力增加而升高，增加蒸汽压力，灭菌的时间可以大大缩短，因此它是一种最有效的，使用最广泛的灭菌方法。蒸汽压力与蒸汽温度的关系。见表21：表21 蒸汽压力与温度关系表蒸汽压力蒸汽温度大气压公斤/厘米2磅/吋2；1.001.350.200.250.003.751001071.500.507.501121.750.7511.25115.52.001.0515.001212.251.5022.001283.002.0030.00134.5高压灭菌所采用的蒸汽压力与灭菌时间，应报据具体灭菌物质而定，母种，液体培养基灭菌时，一般采用1.1公斤厘米2压力，温度121灭菌30分钟。原种栽培种等固体培养基灭菌时，通常用作1.5公斤/厘米2压力温度128，灭菌1.52.0小时，如制备蘑菇栽培种河泥粪料培养基，灭菌时间或灭菌压力要有所增加。通常压力为2公斤/厘米2，灭菌时间为22.5小时。使用高压蒸汽灭菌时，注意以下几点：（1）灭菌锅内的冷空气必须排尽，冷空气的热膨胀系数大，若灭菌锅内留有冷空气，当灭菌锅密闭加热时，冷空气受热很快膨胀，使压力上升，造成灭菌锅内压力与温度不一致，产生假性蒸汽压，锅内温度低于蒸汽压表示的相应的温度，致使灭菌不彻底。排除冷空气的方法有两种：缓慢排气和集中排气。缓慢排气法，即开始加热灭菌时便打开排气阀门，随灭菌锅内温度逐渐上升，锅内的冷空气逐渐排出，当锅内温度上升到100，大量蒸汽从排气阀中排出时（可看到蓝色光带）即可关闭排气阀，进行升压灭菌。集中排气法，即在开始加热灭菌时，先关闭排气阀，当压力升到0.5kg/cm2左右进行，打开排气阀，集中排出空气，让压力降到零，并有大量蒸汽排出时，再关闭排气阀进行升压灭菌。固体培养基灭菌时，可采用集中排气法。流体培养基灭菌时一般不宜采用，以免液体冲出瓶口。（2）灭菌锅内的培养基必须排列疏松，使蒸汽畅通。灭菌锅内蒸汽是否畅通，关系到灭菌温度均一。灭菌材料放得过多，过密，会妨碍蒸汽的流通，影响温度分布的均一，造成局部地区温度较低，甚至形成温度“死角”，达不到彻底灭菌，常常导致以后杂菌污染。（3）灭菌完毕，应缓慢减压。高压蒸汽灭菌结束后的排气降压不能太快，若排气太快，瓶内外的压力差就会增大，引起瓶塞冲出瓶口；液体培养基灭菌时，液体会突然沸腾，弄脏瓶塞；塑料袋培养料灭菌时，应让其自然冷却，当压力降到0.5kgcm2左右时，再打开排气阀以免在减压过程中，袋内外产生压力差，把塑料袋击穿，导致以后杂菌污染。（4）注意棉塞防湿。用棉塞塞的瓶口或试管，在高压蒸汽灭菌锅中灭菌时，因锅中热蒸汽在锅壁四周和锅盖内侧容易产生凝结水，凝结水沿着锅壁和锅盖下流，弄湿棉塞。潮湿的棉塞在培养过程中，容易生长链孢霉或其他霉菌，污染培养物，为了防止棉塞潮湿，灭菌时，瓶子的棉塞不能接触灭菌锅壁，瓶子上面盖防水油纸，灭菌结束时，应先排放锅内热水，然后再慢慢排放蒸汽降压，看棉塞潮湿。可在锅内烘烤一定时间再取出来。2常压灭菌法采用自然压力的蒸汽灭菌的方法。阿诺氏（Arno1d）流通蒸汽灭菌器是微生物技术中常用的设备。我国食用菌菌种生产过程中，有的利用蒸笼灭菌，有的利用钢筋水泥砌成的大型的流通蒸汽灭菌灶。一次可灭菌12千瓶原种或栽培种培养基。流动蒸汽的温度一般为100左右，灭菌时间一般为68小时，这种专用流通蒸汽灭菌灶的最大优点是：容量大，结构简单，成本低，可自行建造，缺点是：灭菌时间长，能源消耗量大，稍不注意就有灭菌不彻底的现象发生。3间歇灭菌法指间歇一定时间，连续消毒几次达到灭菌的方法，此方法适用于不耐高温而其他方法灭菌效果都不好时采用。二、过滤灭菌细菌、真菌及其孢子，个体虽小，直径也仅在几毫微米，如用密孔过滤器将溶液过滤也可将之排除，常用到一些有机营养成分如维生素、氨基酸、某些抗菌素等，由于不耐高温，前述灭菌方法不适宜，应采用细菌过滤器灭菌。此法灭菌对细菌过滤器要求很高，每用一次都要用稀盐酸浸泡几天再用浓盐酸洗滤，最后用无菌水清洗至无酸迹，细菌过滤器不能将病毒完全除去成为无菌状态，现在常用滤膜过滤器代替细菌过滤器，可滤掉病毒。三、辐射灭菌辐射，是通过波动或粒子在空间高速运行而传递能量的一种物理现象。利用辐射产生的能量进行灭菌的方法，称之辐射灭菌。辐射可分电离辐射和非电离辐射两种，射线，射线，射线，射线，中子和质子等属电离辐射，紫外线、日光为非电离辐射。其中紫外线杀菌广泛应用于工业、农业和医疗卫生等方面。紫外线波长范围在3900136A之间，其中波长2000一3000A的紫外线具有杀菌作用，尤以26502660A波长杀菌力最强，无菌室接种室内安装的人工紫外红灯管，一般照射2030分钟，即可杀死空气中的微生物。但紫外线穿透很弱，只适用于空气和物体表面的消毒。我国蘑菇生产中使用的覆土，在日光下曝硒，就是利用日光及其中的紫外线杀菌的一种方去。四、化学灭菌与消毒利用化学药剂进行灭菌或抑菌的方法。一般用于杀死微生物的药剂称消毒剂；用于抑制微生物生长的药剂称抑制剂或防腐剂。实际上两者并无严格的区别，因为消毒剂在低浓度时呈现抑菌作用，防腐剂在高浓度时呈现杀菌作用，所以统称为消毒防腐剂。杀菌的化学药剂种类很多，常见的有以下几种：（一）重金属盐类所有重金属盐类对微生物有毒害作用，如汞、银、铅、锌、铜等。微生物浸在0.10.5%硝酸盐（AgNO3），升汞（HgCl2）等溶液中，几分钟就会死亡。蘑菇采种及段木分离菌种时，常用0.1%升汞溶液进行表面消毒。升汞（HgCl2）白色结晶粉末，能溶于水，在盐酸或氯化钠存在下，其溶解度提高，杀菌力提高，常配成0.1%升汞水溶液，其配制方法：（1）升汞1克，食盐0.5克，水1000毫升；（2）升汞1克，浓盐酸2.5毫升加水1000毫升。（二）氧化剂常用的氧化剂有0.1%高锰酸钾（KMn04）、过氧化氢（H202）、臭氧（03）、过氧乙酸（CH3COOOH）、漂白粉（CaOCl2）等。高锰酸钾、过氧化氢常用浓度0.1%，过氧乙酸为0.20.5%，漂白粉0.51.2%，以上药剂随用随配，稀释液只能存放3天。它们的杀菌机制是通过强烈的氧化作用，破坏微生物的原生质或酶蛋白质的结构。（三）还原剂甲醛（HCH0）是常用的还原清毒剂商品的原液浓度为40%，5%的福尔马林溶液用于防腐和种子表面消毒，可杀死细菌的芽孢和真菌孢子，培养室、接种室或蘑菇房消毒时，以福尔马林原液熏蒸，每立方米8毫升福尔马林原液，再加5克高锰酸钾，加热蒸发。甲醛能与微生物细胞蛋白质的氨基结合。引起蛋白质变性，使原生质失去正常活动能力。（四）表面活性物质乙醇（酒精）、石碳酸、来苏儿、新洁尔灭等，均是表面活性消毒剂。1乙醇（C2H6O）是强表面活性剂，也是最常用的表面消毒剂，能降低表面张力，改变细胞膜的渗透性及原生质的结构状态，使蛋白质凝固变性。75%的乙醇消毒力最强。2石碳酸（苯酚C6H6O）低温下为无色或白色针状，有特殊抗性和腐蚀性在空气中易氧化变红色，熔点4243，65以上能与水任意混合，一般用5%苯酚化溶液作消毒剂，配制时先用热水溶化再加入需水量。3来苏尔（煤酚皂溶液C6H4CH3OH）黄棕色至红棕色粘稠液体，有酚臭可溶于水及醇中，杀菌力为石碳酸4倍，12%来苏尔溶液可适于皮肤浸泡，（2分钟），23%可用喷洒消毒，常与新洁尔灭、石碳酸交叉使用于接种箱，无菌室，培养室消毒。4新洁尔灭（C21H38NBr）为淡黄色胶状体。具芳香气味，极苦，易溶于水，是阳离子型表面活化杀菌剂，对无芽孢病原菌，霉菌等具有较强的杀菌作用，效果是石碳酸的几十倍，消毒特点快速、彻底、高效。原液浓度5%，使用时可稀释20倍即0.25%浓度，用于表面消毒，存放一个月，加大浓度2%，可用喷洒消毒。第五节 菌种分离和提纯分离纯菌种是制种工作的重要一环，也是一项比较细致的工作。食用菌菌种的分离方法有三种：即孢子分离，组织分离和基内菌丝分离。这三种方法适用于不同的菌种。主要适宜于营独立生活的腐生菌（木腐菌、草腐菌、腐殖质腐生菌），有些与高等植物共生的菌根菌，很难在简单的培养基获得纯菌种。一、孢子分离法这种方法的分离对象是菌类的孢子。即在无菌操作条件下，使孢子在适宜的培养基上萌发，长成菌丝体而获得纯菌种。取得孢子的方法很多。菌类的孢子有性孢子（担孢子与子囊孢子）和各种无性孢子（草菇的原垣孢子、银耳的酵母状孢子，节孢子、黑木耳的分生孢子）。在分离时可以采取有性孢子分离法，也可以采取无性孢子分离法，可以利用单孢子分离法。也可以采用多孢子分离法。但在一般菌种生产进程中，为了避免异宗结合的菇类（如香菇、平菇）产生单孢子不孕现象，一般都采用多孢子分离法。单孢子分离法主要应用于食用菌的杂交育种工作。（一）种菇的选择在分离时必须选择优良品种的优良个体来作分离材料，如蘑菇应选择床上单生、肥厚、柄粗壮、伞肉夺取实、早熟、无病虫菌菌幕将破但还未破者。草菇选择菌蛋肥厚，脚苞未破者；香菇、平菇选择个体强壮，八分成熟子实体。采集来的野生品种无以知道其生产性能的优劣，不能马上用于生产，仅能作育种材料。只有进行品种对比后，证明是优良者。才能应用于生产。（二）孢子的采集方法获取孢子的方法很多现分述如下：1孢子弹射分离法孢子弹射分离法是生产上常用的一种方法，它利用孢子能自动弹射出子实体层的特性，来收集并分离孢子，根据不同的装置又可分为三种：（1）种菇孢子弹射法（也叫整菇插种法），就是将整只种菇（蘑菇、香菇、平菇、草菇等）经表面消毒后，用无菌纱布试干水分插入孢子收集器内收集孢子。蘑菇、菇可放在经灭菌的培养皿中置于接种箱中收集孢子，蘑菇如在1218的环境下，23天便可弹射大量孢子，香菇、平菇在选择种菇时，一定要八分成熟的子实体（即已看到散发孢子的个体），并在插入孢子收集器内612小时取出。这样种菇孢子先弹射出来而附在上面的杂菌孢子短时间内不会落下。（2）钩悬法在生产上，采集银耳、木耳等孢子时常用此法。在无菌箱内，将新鲜成熟的耳片用无菌水冲洗数次，然后用无菌纱布将水汲干，取一小块挂在钩子上，钩子的另一端挂在三角瓶口，使分离材料悬于培养基正上方，勿使分离材料碰到瓶壁，瓶内装有母种培养基，耳片距培养基23厘米，在25温度下培养24小时，待成熟孢子落到培养基上后，再把三角瓶拿到接种箱内，取出耳片，塞上棉塞，继续培养，或把孢子转到试管中培养。（3）贴附法，取一小块成熟的菌褶或小块菌盖，用溶化的琼指或胶水，贴附在试管斜面的正上方（试管壁上）或培养皿皿盖上，经612小时，待孢子落下后，立即把试管或培养皿中的培养基的孢子移到另一消毒过的空试管或培养皿中进行培养。2菌褶上涂沫法取成熟伞菌，切去菌柄基部，带入接种箱，用75%洒精对菌盖菌柄进行表面消毒，用接种环直接插入两片菌裙之间，轻轻地抹过褶片表面，然后用划线法涂抹于试管培养基上。操作时，勿使接种环抹到暴露在空间的菌裙部分在野外采集时，也常用此法分离孢子。3孢子印分离法取成熟伞菌，切去菌柄基部，菌裙向下，置放入灭过菌的有色纸上（红、黑、蓝的），用通气罩罩上，在2024C室温下静置24小时，大量孢子使落在灭过菌的纸上，形成孢子印，再从孢子印上挑取少量孢子移入试管培养基上培养。4空中孢子捕捉法伞菌（如香菇、平菇、金针菇）孢子大量弹射时，子实体周围可以看到孢子云，可在孢子云飘去的上方倒放琼脂平板，使孢子附在其上，再盖上皿盖，用塑料腔水纸封好培养。整个过程动作要迅速敏捷。以上所讲的都是多孢子分离方法，其优点是没有不孕现象，操作简便，但不能发挥最优单孢子的作用，为了进行育种，从孢子中选优良杂交必须进行单孢子分离。即在人工控制下使两个优良品系的单孢进行杂交，从而培育出新品种。5单孢子的分离方法从许多孢子中挑出单个孢子，一般需用单孢分离器，如无单孢分离器，可用连续稀释法获得单孢，即用接种针挑取定量孢子，放入10毫升无菌水中摇匀，从中取出1毫升孢子液，加入9毫升无菌水中，用此操作，直到每滴稀释液中，在低倍镜下一个视野内只有一个孢子，然后用无菌注射器把孢子液滴在斜面上，每管滴12滴，便孢子液慢慢流下，保温培养，发现单个菌落时，立即转移到新的试管中继续培养，并检有无锁状联合，以确定是否单孢菌落，然后编号培养。二、组织分离法组织分离是在无菌操作条件下将菇体的组织或菌核、菌素进行分离，获得纯菌种的一种最简便的方法。组织分离，根据分离材料不同可分为四种：子实体组织分离，菌核组织分离，菌索分离，生长点分离。（一）子实体组织分离法种菇的选择，从优良品系中选取优良的个体作种菇，以单菇、杂大、盖厚，无病虫危害的菌蕾作分离材料。将解剖刀、接种针、摄子等放入接种箱内消毒，接种时用75%酒精棉球将双手擦洗和种菇擦洗，剪去菌柄的基部及菌盖边缘过薄的部分，在酒精灯火焰上略加灼烧，进行表面灭菌，撕开子实体，用火焰灭菌过的解剖刀在菇盖与菇柄交接处划成“田”字形，然后在火焰上用灭过菌的接种针钩取绿豆大的小块菌肉组织，靠近火焰口上，将组织块迅速移人试管培养基的斜面上，抽出接种针，塞上棉塞。若菇盖肥厚而体形大种菇，最好在菇盖外缘，菇盖皮和菌褶交界处勾取组织块进行分离。（二）菌核组织分离法茯苓、猪苓、雷丸等的子实体不易采集，而它们的营养贮藏结构一菌核则较易获得，利用菌核分离，同样能得到该菌的菌种。菌核组织分离方法如下：把菌核表面洗净，吸干带入无菌箱中，以75%酒精进行表面消毒，用无菌解剖刀把菌核切开，取中间组织一小块（黄豆大小）接种在试管斜面培养基上，塞上棉塞。（三）菌索分离法蜜环菌，但蜜环菌一类菌。其子实体不易获得，也无菌核，可以用其特殊的菌素来分离，操作步骤如下：分离时先用吸有75%酒精的棉花（挤干）将菌索表面黑色皮层轻轻揩擦23次，在无菌操作下去掉黑色