药物的含量测定的方法与验证精选PPT.ppt

关于药物的含量测定的方法与验证第1页，讲稿共30张，创作于星期三基本要求基本要求 一一、掌掌握握 测测定定药药物物含含量量的的容容量量、光光谱谱和和色色谱谱分分 析析法法，滴滴定定度度与与含含量量计计算算，色色谱谱系系统统适适用用性性试试验验的的内内容容、要要求求及及相相关关计计算算。药药物分析方法验证与内容。物分析方法验证与内容。二、熟悉二、熟悉 定量分析样品的前处理方法。定量分析样品的前处理方法。第2页，讲稿共30张，创作于星期三第一节第一节定量分析方法的分类和特点定量分析方法的分类和特点测定药物的含量是评价药品质量优劣的重要测定药物的含量是评价药品质量优劣的重要手段，其测定方法多种多样，而手段，其测定方法多种多样，而容量分析法容量分析法、光谱法光谱法和和色谱法色谱法是中国药典收载最多的方法。是中国药典收载最多的方法。一般而言：一般而言：1.化学原料药化学原料药的含量测定，首选的含量测定，首选容量分析法容量分析法 2.药物制剂药物制剂的含量测定，多采用的含量测定，多采用色谱分析法色谱分析法3.药物制剂的药物制剂的定量检查定量检查，选用，选用光谱分析法光谱分析法第3页，讲稿共30张，创作于星期三1.1特点：特点：根据滴定液的浓度和等当点（滴定误差）时根据滴定液的浓度和等当点（滴定误差）时消耗的滴定液体积，计算被测药物的含量。消耗的滴定液体积，计算被测药物的含量。容量分析通常用于测定高含量或中含量组分，容量分析通常用于测定高含量或中含量组分，即被测组分的含量在即被测组分的含量在1以上，容量分析法比以上，容量分析法比较准确，一般情况下较准确，一般情况下相对误差相对误差可达可达0.2以下。以下。容量分析法操作简便、快速、比较准确，所容量分析法操作简便、快速、比较准确，所用仪器普通易得，在药品检验工作中具有很用仪器普通易得，在药品检验工作中具有很大的实用价值。大的实用价值。第一节 定量分析方法的分类和特点一、一、容量分析法容量分析法第4页，讲稿共30张，创作于星期三 1.2计算计算1.滴滴定定度度：指指每每1ml药药典典规规定定摩摩尔尔浓浓度度的的滴滴定定液液所相当的所相当的被测药物被测药物的质量。的质量。2.滴滴定定度度（T）的的计计算算：在在容容量量分分析析中中，被被测测药药物物（B）与与滴滴定定液液（T1）之之间间都都按按一一定定的的摩摩尔比进行反应的，反应可表示为：尔比进行反应的，反应可表示为：aT1+bB产物产物ab T T(mg/mL)=(mg/mL)=m mb/ab/aM M实际滴定度实际滴定度TTFF=实际摩尔浓度实际摩尔浓度/药典规定的摩尔浓度药典规定的摩尔浓度第5页，讲稿共30张，创作于星期三3.含量的计算：含量的计算：在在测测定定药药物物含含量量时时，常常用用直直接接滴滴定定法法和和回回滴滴定定法（剩余滴定法）。法（剩余滴定法）。（1）直接滴定法：）直接滴定法：W W 供试品的称取量；供试品的称取量；mg；V消耗的滴定液体积，消耗的滴定液体积，ml；T药典规定的滴定度，药典规定的滴定度，mg/ml；F校正因数校正因数 含量含量()VT/W W 100%V VT TF/WF/W 100%100%第6页，讲稿共30张，创作于星期三（2）间接滴定法：）间接滴定法：包括包括生成物滴定法生成物滴定法和和剩余量滴定法剩余量滴定法。1）生成物滴定法：生成物滴定法：指指被被测测药药物物D与与化化合合物物A作作用用，定定量量生生成成化化合物合物B，再用滴定液，再用滴定液T滴定化合物滴定化合物B。计算公式同直接法。计算公式同直接法。滴定度计算时考虑滴定度计算时考虑D/B,B/T之间的关系之间的关系P146示例示例4-3第7页，讲稿共30张，创作于星期三2）剩余量滴定法（剩余量滴定法（回滴定法）回滴定法）加加入入定定量量过过量量的的滴滴定定液液T1，使使其其与与被被测测药药物物定定量量反反应应，待待反反应应完完全全后后，再再用用滴滴定定液液T2回回滴滴反反应应中剩余的滴定液中剩余的滴定液T1。t11T1+bD产物产物1+剩余剩余T1（D与与T1反应）反应）t2T2+t12T1产物产物2（T2回滴回滴T1）不做空白试验时百分含量计算方法不做空白试验时百分含量计算方法计算公式计算公式1：含量含量()（V VT1F FT1V VT2F FT2)T1/W W 100%注意：T1与T2的浓度是相当的 第8页，讲稿共30张，创作于星期三做空白试验时百分含量计算方法做空白试验时百分含量计算方法含量含量()（V VT20V VT2S)F FT2T1/W W 100%W W 供试品的称取量供试品的称取量mgV VT20空白空白实验时消耗滴定液实验时消耗滴定液T2的体积的体积mLV VT2S样品测定时消耗滴定液样品测定时消耗滴定液T2的体积的体积mLF FT2滴定液滴定液T2的浓度的浓度校正因数校正因数 T1药典规定的滴定液药典规定的滴定液T1滴定度，滴定度，mg/mL第9页，讲稿共30张，创作于星期三 二、光谱分析法二、光谱分析法 （一）紫外（一）紫外-可见分光光度法（可见分光光度法（200200nmnm760nm)760nm)灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-4g/ml10-7g/ml1.特点特点准确度高，准确度高，RSD（%）为为2%5%仪器价格低廉，操作简单，易普及仪器价格低廉，操作简单，易普及 应用广泛。许多化合物都可采用应用广泛。许多化合物都可采用 2.2.朗伯朗伯-比耳定律比耳定律 A=ECL A=ECL 吸吸收收系系数数(E)(E)用用摩摩尔尔吸吸收收系系数数()()或或百百分分吸吸收收系系数数(E(E1%1%1cm1cm)两两种种方方式表示。式表示。两者关系为：两者关系为：E E1%1%1cm1cm100/M100/ME E1%1%1cm1cm：指在一定波长下，溶液浓度：指在一定波长下，溶液浓度(C)(C)为为1 1(W/V)(W/V)，L L1cm1cm时的吸收度。时的吸收度。第10页，讲稿共30张，创作于星期三3.3.仪器校正和检定仪器校正和检定（1 1）波长：）波长：波长校正用汞灯中较强谱线波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,237.38,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07546.07nmnm与与576.96576.96nm nm 或用仪器中氘灯的或用仪器中氘灯的486.02486.02nmnm与与656.10656.10nmnm进行校正。进行校正。（2 2）吸收度的检定：）吸收度的检定：用用K K2 2CrOCrO7 7(60mg)+0.005mol/LH(60mg)+0.005mol/LH2 2SOSO4 4液定容至液定容至10001000mlml 波长波长(nm)235(nm)235(最小最小)257()257(最大最大)313()313(最小最小)350()350(最大最大)E E1%1%1 1cmcm 124.5 144.0 48.62 106.6 124.5 144.0 48.62 106.6 第11页，讲稿共30张，创作于星期三（3 3）杂散光检查：）杂散光检查：试剂试剂 浓度浓度(g/ml)g/ml)测定波长测定波长 透光率透光率(%)(%)NaI 1.00 220nm NaI 1.00 220nm 0.8 0.8 NaNO NaNO2 2 5.00 340nm 5.00 340nm 0.8 0.8（4)4)对溶剂的要求对溶剂的要求:220 220240nm 241240nm 241250nm 251250nm 251300nm 300nm300nm 300nm以上以上溶剂溶剂+吸收池吸收池A0.41 0.41 0.20 0.20 0.10 0.10 0.05 0.05 第12页，讲稿共30张，创作于星期三(5)测定法测定法 要求供试品溶液的要求供试品溶液的A A应在应在0.3 0.3 0.70.7【对照品比较法对照品比较法】用用相相同同溶溶剂剂分分别别配配制制供供试试品品溶溶液液和和对对照照品品溶溶液液，对对照照品品溶溶液液中中所所含含被被测测物物的的量量应应为为供供试试品品液液中中被被测测物物规规定定量量的的10010，在在规规定定波波长长下下测测定定两两溶溶液液吸吸收收度度后后，按按下下式式计计算算供供试试品溶液中被测物的浓度：品溶液中被测物的浓度：C Cx x=(=(A Ax x/A Ar r)C Cr r 原料药百分含量原料药百分含量%=%=C Cx xD/WD/W100%100%W 供试品的称取量；供试品的称取量；mg；C Cx x供试品溶液的浓度，供试品溶液的浓度，mg/ml；D D稀释体积稀释体积 第13页，讲稿共30张，创作于星期三【对照品比较法对照品比较法】固体制剂含量相当于标示量的百分数：固体制剂含量相当于标示量的百分数：标示量（标示量（%）=C Cx xD/WD/WW W平均平均/B/B100%100%W 供试品的称取量；供试品的称取量；mg；C Cx x供试品溶液的浓度，供试品溶液的浓度，mg/ml；D D稀释体积稀释体积 W W平均平均单位制剂的平均重量（或装量）单位制剂的平均重量（或装量）B B制剂的标示量制剂的标示量第14页，讲稿共30张，创作于星期三(5)测定法测定法 要求供试品溶液的要求供试品溶液的A A应在应在0.3 0.3 0.70.7【吸收系数法吸收系数法】配配制制供供试试品品溶溶液液，在在规规定定波波长长处处测测定定其其吸吸收收度度（A），再再将将供供试品在规定条件下的吸收系数计算含量试品在规定条件下的吸收系数计算含量 C Cx x=A Ax x/100100E1%1cm 原料药百分含量原料药百分含量%=%=C Cx xD/WD/W100%100%W 供试品的称取量；供试品的称取量；mg；C Cx x供试品溶液的浓度，供试品溶液的浓度，mg/ml；D D稀释体积稀释体积 第15页，讲稿共30张，创作于星期三【对照品比较法对照品比较法】固体制剂含量相当于标示量的百分数：固体制剂含量相当于标示量的百分数：注射液标示量注射液标示量（%）=CxD/VV平均平均/B1000100%C Cx x供试品溶液的浓度，供试品溶液的浓度，mg/mL；D D稀释体积稀释体积 V 供试品取样量；供试品取样量；mLV V平均平均注射液规格（注射液规格（mL/支）支）B B标示量（标示量（mg/支）支）第16页，讲稿共30张，创作于星期三 （二）荧光分光光度法（二）荧光分光光度法1.特点特点2.灵敏度高灵敏度高，可达，可达10-10g/ml10-12g/ml3.在在低浓度低浓度进行测定，防止进行测定，防止F与与C不成正比及自熄灭作用不成正比及自熄灭作用4.用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减5.灵敏度高，但灵敏度高，但干扰因素多干扰因素多。6.制备荧光制备荧光衍生物衍生物，可提高其灵敏度和选择性。，可提高其灵敏度和选择性。用样品用样品量少量少，操作，操作简单简单，方法，方法快速快速，应用，应用范围范围较较广广。第17页，讲稿共30张，创作于星期三2.荧光分析仪荧光分析仪有二个单色光器有二个单色光器激发单色光器与发射单色激发单色光器与发射单色光光器；且激发光源、样品池和检测器成直角。器；且激发光源、样品池和检测器成直角。3.含量测定含量测定常用的方法对照品比较法常用的方法对照品比较法:Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)C Cr rCh.P收载收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。标示量（标示量（%）=C Cx xD/WD/WW W平均平均/B/B100%100%第18页，讲稿共30张，创作于星期三 三、色谱分析法三、色谱分析法按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱方法分类方法分类按分离方法分为：按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；柱色谱；GC；HPLC。（一）（一）HPLC法法1.对对HPLC仪器一般要求仪器一般要求色谱柱、流动相按品种项下要求。色谱柱、流动相按品种项下要求。色谱柱的色谱柱的理论板数理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)22.系统性试验系统性试验分离度分离度：R=2（tR1tR2)/(W1+W2);要大于要大于1.5拖尾因子拖尾因子：T=W0.05h/2d1应在应在0.91.05第19页，讲稿共30张，创作于星期三内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3.测定方法测定方法标准曲线法标准曲线法外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量外标一点法外标一点法应用示例：应用示例：RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法如头法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法如头孢拉丁；头孢羟氨苄；孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法头孢唑啉钠用外标一点法第20页，讲稿共30张，创作于星期三（1）内内标标法法加加校校正正因因子子测测定定供供试试品品中中主主成成分分含含量量内标法：将一个已知重量，样品中不含有的内标法：将一个已知重量，样品中不含有的纯物质，加至待测样品溶液中，以此纯物质纯物质，加至待测样品溶液中，以此纯物质的量为标竿，对比测定待测的量为标竿，对比测定待测i组分的含量的方组分的含量的方法谓内标法。优点：定量结果与进样量无关法谓内标法。优点：定量结果与进样量无关（不超载条件下）。（不超载条件下）。对内标物的要求：对内标物的要求：1、内标物是原样品中不含、内标物是原样品中不含有的组分。有的组分。2、内标物的保留时间应与待测成、内标物的保留时间应与待测成分相近，分离度分相近，分离度R1.5。3、内标物必须是纯、内标物必须是纯度合乎要求的纯物质。度合乎要求的纯物质。第21页，讲稿共30张，创作于星期三 精精密密称称（量量）取取药药物物对对照照品品和和内内标标物物质质，分分别别配配成成溶溶液液，精精密密量量取取各各溶溶液液，配配成成校校正正因因子子（f）测测定定用用的的含含内内标标的的对对照照品品溶溶液液。取取一一定定量量注注入入仪仪器器，记记录录色色谱谱图图。测测量量对对照照品品和和内内标标物物质质的的峰峰面面积积（或或峰峰高高），按按下下式式计计算校正因子：算校正因子：校正因子（校正因子（f）（）（As/Cs）内标内标/（Ai/Ci）对照对照第22页，讲稿共30张，创作于星期三 再再精精密密称称取取供供试试品品，配配成成溶溶液液，精精密密量量取取供供试试品品溶溶液液和和上上述述内内标标溶溶液液，同同法法配配成成供供含含测测的的含含内内标标的的供供试试品品溶溶液液，取取一一定定量量注注入入仪仪器器，记记录录色色谱谱图图，测测量量供供试试品品中中待待测测成成分分和和内内标标物物质质的的峰峰面面积积或或峰峰高高（A或或h），按按下下式式计算含量：计算含量：f（As/Cs）内标内标/（Ai/Ci）供供含量（含量（Ci）供供f（Ai）供供/（As/Cs）内标内标第23页，讲稿共30张，创作于星期三（2）外外标标法法测测定定供供试试品品中中主主成成分分含含量量：外外标标法法是是以以供供试试品品的的对对照照品品或或标标准准品品作作对对照照物物质质，相相比比较较以以求求得得供供试试品品的的含含量量。外外标标法法可可分分为为标准曲线法和外标一点法。标准曲线法和外标一点法。1）标准曲线法：配制一系列已知浓度的对照）标准曲线法：配制一系列已知浓度的对照品或标准品溶液，在同一操作条件下，按同品或标准品溶液，在同一操作条件下，按同量注入色谱仪，测其峰面积（峰高），作出量注入色谱仪，测其峰面积（峰高），作出峰面积（或峰高）与浓度的标准曲线。然后峰面积（或峰高）与浓度的标准曲线。然后在相同条件下，注入同量供试品溶液，获得在相同条件下，注入同量供试品溶液，获得待测组分的峰面积（或峰高），根据标准曲待测组分的峰面积（或峰高），根据标准曲线或其回归方程，计算供试品中待测组分的线或其回归方程，计算供试品中待测组分的浓度。浓度。第24页，讲稿共30张，创作于星期三 AaC+br0.9999线性范围线性范围gml-1gml-1若若待待测测组组分分的的峰峰面面积积为为Ax，则则由由上上述述线线性性方方程可计算出对应的待测组分浓度程可计算出对应的待测组分浓度Cx。应用示例自阅应用示例自阅第25页，讲稿共30张，创作于星期三2）外外标标一一点点法法精精密密称称（量量）取取对对照照品品和和供供试试品品，分分别别配配制制成成对对照照品品溶溶液液（C对对）和和供供试试品品溶溶液液（C供供），分分别别精精密密量量取取一一定定量量，注注入入仪仪器器，记记录录色色谱谱图图，测测量量对对照照品品的的峰峰面面积积（A对对）和和供供试试品品待待测测成成分分的的峰峰面面积积（A供供）（或峰高），按下式计算含量：（或峰高），按下式计算含量：C供供（C对对/A对对）A供供外外标标法法简简便便，但但要要求求进进样样量量准准确确及及操操作作条条件件稳定。稳定。内标法优点：在进样量不超限范围内，内标法优点：在进样量不超限范围内，定量结果与进样量无关，但样品配制麻烦，定量结果与进样量无关，但样品配制麻烦，内标物有时不易寻找是其缺点。内标物有时不易寻找是其缺点。第26页，讲稿共30张，创作于星期三（二）（二）GC法法1.对对GC仪器一般要求仪器一般要求载气为载气为氮气氮气；色谱柱为填充或毛细管柱；色谱柱为填充或毛细管柱色谱柱的色谱柱的理论板数理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)22.系统性试验系统性试验分离度分离度：R=2（tR1tR2)/(W1+W2);要大于要大于1.5拖尾因子拖尾因子：T=W0.05h/2d1应在应在0.91.05第27页，讲稿共30张，创作于星期三内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3.测定方法测定方法标准曲线法标准曲线法外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量外标一点法外标一点法应用示例：应用示例：Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素收载的月桂卓酮、维生素E及其片剂、注及其片剂、注射剂、甲酚皂溶液等均采用射剂、甲酚皂溶液等均采用GC法中的内标法加校正法中的内标法加校正因子测定含量。因子测定含量。第28页，讲稿共30张，创作于星期三小小结结1.药物含量测定的容量、光谱和色谱分析方药物含量测定的容量、光谱和色谱分析方法。法。2.计算公式：计算公式：容量法：容量法：光谱法：光谱法：含量含量()VT/W W 100%V VT TF/WF/W 100%100%含量含量()（VT20VT2S)FT2T1/W 100%原料药百分含量原料药百分含量%=%=C Cx xD/WD/W100%100%标示量（标示量（%）=C Cx xD/WD/WW W平均平均/B/B100%100%注射液标示量注射液标示量（%）=CxD/VV平均平均/B1000100%第29页，讲稿共30张，创作于星期三感感谢谢大大家家观观看看第30页，讲稿共30张，创作于星期三