农作物种子检验员专业知识总汇最新测试题含答案.doc

农作物种子检验员专业知识总汇重要内容:水分测定、重量测定、生活力的四唑测定、活力测定、品种真实性及品种纯度的室内测定、品种纯度的电泳测定、转基因种子特定特性测定、种子健康测定、田间检验、小区种植鉴定、发芽试验 水分测定 1、种子水分是指种子内自由水和束缚水的重量占种子原始重量的百分率。 2、种子水分测定方法:烘干减重法(低恒温烘干法、高恒温烘干法、高水分预先烘干法)、快速测定法(电阻式水分测定法、电容式水分测定法、微波式水分测定法) 3、水分测定最常用的是烘干减重法。烘干减重法是以湿重为基础，并按规程规定的程序将种子样品在烘箱内烘干，用失去水分重量占供检样品原始重量的百分率来表示种子水分。 4、高温烘干法适用于下列种类:芹菜、石刁柏、燕麦属、甜菜、西瓜、甜瓜属、南瓜属、胡萝卜、甜荞、苦荞、大麦、莴苣、番茄、苜蓿属、草木樨属、烟草、水稻、黍属、菜豆属、豌豆、鸦葱、黑麦、2?【130-133】条件下，狗尾草属、高粱属、菠菜、小麦属、巢菜属、玉米。 高恒温烘干法是指130?烘干1个小时。高温烘干法测定时，对检验室空气相对湿度没有特别要求。 5、低恒温烘干法适用于下列种类:葱属、花生、芸苔属、辣椒属、大豆、棉属、向日葵、亚麻、萝卜、蓖麻、芝麻、茄子。 低恒温烘干法是指103?2?条件下，烘干8个小时。低温烘干法必须在相对湿度较低(70,以下)的室内进行，否则会影响其准确性。 6、高恒温烘干法和低恒温烘干法主要的区别:是烘干时的温度高低和时间长短的不同(因为像油料作物如果温度太高，除水分外的其他成分也会变质或挥发，只能用低恒温烘干法)。 7、当需磨碎的禾谷类作物种子水分超过18%，豆类和油料作物种子水分超过16%,就必须采用高水分预先烘干法。 8、水分测定的标准程序为:(1.) 铝盒恒重:烘干干净铝盒，130 ?烘1小时，取出冷却称重，再继续烘30分钟冷却称重，直至两次烘干结果误差小于或等于0.002g，取两次重量的平均值。(2)预调烘箱温度:低恒温烘干法103?2?，高恒温烘干法130-133 ?。(3)3、样品制备:取样时先将密闭容器内的样品充分混合(不应用手直接接触种子)，从中分别取出两个独立的试验样品15,25g，放入磨口瓶中。需磨碎的样品按表11-1要求进行处理后立即装入磨口瓶中备用，最好立即称样，以减少样品水分变化。(切记:应该分别取两个样品，分别磨碎，并从两个磨碎样品中各取一个独立的重复样品，而不是从一个磨碎样品中取两个重复样品。)剩余的送验样品应继续存放在密闭容器内，以备复检。(4)称样烘干:将处理好的样品在磨口瓶内充分混合，用感量0.001g的天平称取4.000,5.000g试样两份，分别放入经过恒重的铝盒，记下盒号、盒重和样品的实际重量，摊平样品，应把盒盖打开，放在铝盒基部，放入烘箱，铝盒距温度计水银球2,2.5cm。当箱内温度回升至规定温度时开始计时(切记:计时应从烘箱温度回升至工作温度开始)，烘干1h 或8 h后，戴好纱线手套，打开箱门，迅速盖好盒盖，取出铝盒，放在干燥器中冷却到室温(约需30,45分钟)后称重。(5).结果计算和填报:根据烘后失去的重量计算种子水分百分率，两次测定结果的容许差距不得超过0.2%，如超过必须重新测定，最后填报结果保留一位小数。 9、高水分预先烘干法的测定程序为: 第一次称取两份样品各25g(?0.02 g精度接近2mg)，置于直径大于8cm的样品盒中，在103?2?烘箱中预烘30min，油料种子在70?预烘1h，种子摊成一薄层(厚度不超过2mm)。干燥后的材料在室内冷却2h，然后称重。 第二次将已初步烘干的种子磨碎，从中称取5g试样两份，用低恒温(103?8小时)或高恒温烘干法(130-133?1小时)烘干、冷却、称重、计算百分率。 10、对于低恒温烘干法和高恒温烘干法，应根据烘后失去的重量计算种子水分百分率，公式如下: 1 M2,M3 种子水分(%) , ×100 M2,M1 式中:M1样品盒和盖的重量,g; M2样品盒和盖及样品烘前重,g; M3样品盒和盖及样品烘后重,g。 两次测定结果的容许差距不得超过0.2%，如超过必须重新测定，最后填报结果保留一位小数。 11、高水分预先烘干法测定的结果计算 样品的原始水分的百分率可以用第一次和第二次所得结果并按下列公式计算: S1S2 ×种子水分(,),S1S2, ，100 式中:S1第一次整粒种子烘干后失去的水分，%;(计算时不带%) S2第二次磨碎种子烘后失去的水分，%。 重量测定 1、种子千粒重的含义:是指测定一定数量种子的重量,通常是指测定1000粒种子的重量,即千粒重。种子千粒重是指种子质量标准规定水分的1000粒种子的重量,以克为单位。千粒重测定原则是从充分混合的净种子中随机数取一定数量的种子,称其重量。 2、千粒重测定目的和意义:(1.)种子千粒重反映种子的饱满程度,是种子质量的指标之一。(2.)根据千粒重,可以做到精量播种,节约用种。(3).千粒重是作物产量构成的要素之一。 3、测定方法:分为百粒法、千粒法和全量法三种。 4、百粒法测定程序:(1).数取试样:从净度分析后充分混合的净种子中,随机数取试验样品8个重复,每个重复100粒。 (2.)试样称重:8个重复分别称重,小数位点保留位数与净度分析中的规定相同。(3).检查重复间的容许变异系数,计算实测千粒重。(4).换算成规定水分下的千粒重。(5.)结果报告。 5、千粒法测定程序:(1).数取试样:从净度分析后充分混合的净种子中,随机数取试验样品2个重复,大粒种子每个重复500粒,中小粒种子每个重复1000粒。(2)试样称重:2个重复分别称重,小数位点保留位数与净度分析中的规定相同.(3).检查重复间的容许变异系数,计算实测千粒重，两份重量的差数与平均数之比不能超过去5%,否则再做一份重复,直至达到要求.取差数最小的两份重复平均数来计算千粒重。(4).换算成规定水分下的千粒重。=实测千粒重*1-实测水分%/(1-规定水分%)(5).结果报告。 6、全量变法测定程序:(1).数取试样:数取净度分析后的全部净种子的种子总粒数。(2.)试样称重:小数位点保留位数与净度分析中的规定相同。(3).换算成规定水分下的千粒重。(4).结果报告。 生活力的四唑测定 1、四唑测定可以测定出休眠种子样品的生活力百分率。 2、四唑测定方法于1942年由德国的G. Lakon教授发明，第2次世界大战期间传入美国。随着四唑测定技术的发展，ISTA(国际种子检验协会)于1950年成立四唑测定技术委员会，致力于种子四唑测定技术的发展。 3、种子生活力(seed viability)是种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。 4、种子生活力测定的意义:(1.)可以测定休眠种子的生活力;(2.快速预测种子发芽能力;种子贸易中，常因时间紧迫，不可能采用正规的发芽试验来测定发芽力，这是因为发芽试验所需的时间更长。林木种子可用生活力代替发芽力。 5、四唑染色测定的原理:在种子组织活细胞内脱氢酶的作用下，无色的氯化三苯基四氮唑，接收2 活种子代谢过程中呼吸链上的氢，在活细胞里变成还原态的红色、稳定、不扩散的三苯基甲 月替(Triphenyl Formazam)。可根据四唑染成的颜色和部位，区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。 2，3，5-氯化三苯基四氮唑 (无色) 三苯基甲月替(红色) 6、四唑测定适用的范围:收获后需马上播种的种子;具有深休眠的种子;发芽缓慢的种子;要求估测发芽潜力的种子。 另外，也适用于测定发芽末期个别种子的生活力，特别是怀疑有休眠时;测定已萌发种子，或收获期间存在的不同类型和/或加工的损伤(热害、机械损伤或虫蛀等)种子;解决发芽试验中存在的问题，如不清楚不正常幼苗产生的原因或怀疑杀菌剂的处理效果等。 7、四唑测定方法的特点:四唑测定是一种世界公认、广泛应用、实用方便、省时快速、结果可靠的种子生活力检验方法。具体地说具有以下几个特点:(1.原理可靠，结果准确。如能正确使用四唑测定方法，四唑测定结果与发芽率误差一般不会超过3%,5%。(2.不受休眠限制。(3.方法简便、省时快速。(4.成本低廉。 四唑测定也有其缺陷:如对种子检验员经验和技能要求较高;结果不能提供休眠的程度;处理种子不会像发芽试验能反映药害情况。 四唑测定程序 1、试验样品的来源数取 试验样品来源必须是净种子。净种子可以从净度分析后的净种子中随机数取，也可以从送验样品中直接随机数取。一般随机数取100粒种子，2,4个重复或少于100粒的若干副重复。如果是测定发芽末期休眠种子的生活力，则可单用试验末期的休眠种子。委托检验可以直接从经充分混合的种子样品中随机数取种子。 2、种子预处理:在正式测定前，对所测种子样品需经过预处理(预措预湿)，其主要目的是使种子加快和充分吸湿，软化种皮，方便样品准备和促进活组织酶系统的活化，以提高染色的均匀度、鉴定的可靠性和正确性。预措-是指在种子预湿前除去种子的外部附属物和在种子非要害部位弄破种皮，如水稻种子需脱去内外稃壳，豆科硬实种子刺破种皮等，但须注意，预措不能损伤种子内部胚的主要构造。绝大多数种子不须进行预措处理，但有一些种子在预湿前要进行预措处理。预湿是四唑染色测定的必要步骤。预湿方法目前常用的有以下两种方法:(1)(缓慢润湿:缓慢润湿是按种子发芽试验所采用方法，将种子放在纸床上或纸巾间，让其缓慢吸湿。该法适用于那些直接浸在水中容易破裂和损伤的种子，以及已经劣变的种子或过分干燥的种子。缓慢润湿可采用下面两种方法:?纸卷或纸间预湿;?纸床上预湿 (2)(水中浸渍:水中浸渍是将种子完全浸入水中，种子吸水快、均匀，并可缩短预湿时间。该法适用于种子直接浸入水中不会造成组织破裂损伤，并不会影响鉴定结果的种子种类，包括水稻、小麦、大麦、燕麦、黑麦草、黑麦、玉米等，详见表14-l。浸种温度一般采用20,30?或30?水温。 3、染色前的样品准备 采用适当的方法使胚的主要构造和(或)活的营养组织暴露出来。(1(不须样品准备，种皮渗水性良好的豆类种子，在四唑溶液里染色时，就能随着四唑溶液的渗入而吸胀，并在染色后剥去种皮就可正确鉴定，这类种子不须样品准备。(2(沿胚纵切;(3(近胚纵切;(4(上半粒纵切;(5(斜切种子;(6(剥去种皮;(7(横切胚轴和盾片 4、四唑染色:四唑溶液必须完全淹没种子，溶液不能直接露光，因为光线可能使四唑盐类还原而降低其浓度，影响染色效果。将经过样品准备或不须准备的规定数量种子分别放入四唑溶液里染色。小粒种子可用直径6cm培养皿，大、中粒种子可用9cm培养皿或更大的容器，特别细小的种子可包在滤纸内，分别放入容器里。然后加入适宜浓度的四唑溶液，移置一定温度的恒温箱内进行染色反应。 5、鉴定前处理:为了确保鉴定结果的正确性，还应将已染色的种子样品，加以适当的处理，再进一步使胚的主要构造和活的营养组织明显地暴露出来，以便观察鉴定。 6、观察鉴定:一般鉴定原则是，凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力种子。凡是胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色和光泽，并且活营养组织不染色部分已超过二分之一，或超过容许范围，以及组织软化的，完全不染色或染成无光泽的淡红3 色或灰白色，且组织已软化腐烂或异常、虫蛀、损伤的均为无生活力种子。 活力测定 1、种子活力是种子质量的重要指标之一,也是反映种用价值的主要组成部分,与种子田间出苗质量密切相关。 “种子活力是指在广泛的环境条件下，决定可接受发芽率的种子批的活性和性能那些特性的综合表现”。 并作了进一步的阐述，种子活力不是一种简单的测定概念，而是一种能表达如下有关种子批性能多种特性的综合概念:(1)种子发芽和幼苗生长速率和整齐度;(2)种子在不利环境条件下的出苗能力;(3)贮藏后，特别是能保持发芽力的性能。高活力种子批即使在不适宜的环境条件下，仍具有良好性能的潜力。 2、(高活力种子的生产优越性:种子活力是种子重要的品质，高活力种子具有明显的生长优势和生产潜力。(1)提高田间出苗率。(2)抵御不良环境条件。 (3)增强对病虫、杂草的竞争能力。 (4)抗寒力强，适于早播。(5)节约播种费用。(6)增加作物产量。(7)提高种子耐藏性。可见，高活力种子对农业生产具有十分重要的意义。 3、活力、生活力和发芽力的区别及关系:(1(种子生活力是指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力，通常用供检样品中活种子数占样品总数的百分率表示。(,(种子发芽力是指种子在适宜条什下(检验室控制条件下)长成正常植株的能力，通常用供检样品中长成正常幼苗数占样品总数的百分率，即发芽率表示。 、国际种子检验规程指出，在下列6种情况下，如果鉴定正确，生活力测定和发芽率测定的4结果基本是一致: ?无休眠、无硬实或通过适宜的预处理破除了休眠和硬实;?没有感染或已经过适宜的清洁处理;?在加工时未受到不利条件或贮藏期间未用有害化学药品处理;?尚未发生萌芽;?在正常或延长的发芽试验中未发生劣变;?发芽试验是在适宜的条件下进行的。 5、种子活力是比发芽率更敏感的指标，在高发芽率的种子批中，仍然表现出活力的差异。通常高发芽率的种子具有较高活力，但两者不存在正相关。 6、种子活力测定方法，包括两种方法:电导率测定、加速老化测定。 加速老化试验 1、原理:加速老化试验，以下简称AA测定)是根据高温(40,45?)和高湿(100,相对湿度)能导致种子快速劣变这一原理进行测定。高活力种子能忍受逆境条件处理，劣变较慢;而低活力种子劣变较快，长成较多的不正常幼苗或者完全死亡。目前AA测定主要用于两方面，一是预测田间出苗率;二是预测耐藏性。2、适用范围与局限性:国际种子检验规程所规范的AA测定法适用于大豆种子; 2、 电导率测定 1、高活力种子细胞膜完整性好，浸入水中后渗出的可溶性物质或电解质少，浸泡液的电导率低。电导率与田间出苗率成显著的负相关，借此可用电导率的高低判别种子活力的高低。大粒豆类种子的电导率结果提供比标准发芽与田间出苗率更强的相关性。2、适用范围与局限性:适用于豌豆种子;ISTA活力手册指出该法也适用于大粒豆科种子(特别是大豆、绿豆等)、棉花、玉米、番茄、洋葱等种子。 品种真实性及品种纯度的室内测定 1、品种真实性和品种纯度是构成种子质量的两个重要指标，是种子质量评价的重要依据。这两个指标都与品种的遗传基础有关，因此都属于品种的遗传品质。 2、品种纯度检验应包括两方面内容，即品种真实性和品种纯度。品种真实性是指一批种子所属品种、种或属与文件描述是否相符。如果品种真实性有问题，品种纯度检验就毫无意义了。品种纯度是指品种个体与个体之间在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数(或株、穗数)占供检验本作4 物样品数的百分率表示。 3、品种纯度检验的方法很多，在实际应用中，理想的测定方法要达到4个要求:测定结果在不同实验室或同一实验室能重演;方法应简单易行;省时快速;成本低廉。 4、第一大类形态鉴定又分为籽粒形态测定、种苗形态测定和植株形态测定。 第二大类物理化学法鉴定，又分为物理的方法和化学方法。物理方法如荧光鉴定法(fluorescence test)等，难以满足品种纯度准确测定的要求。化学方法主要依据化学反应所产生的颜色的差异区分不同品种，如苯酚染色法等。第三大类方法生理生化方法，是利用生理生化反应和生理生化技术进行品种纯度测定。以生理生化反应为基础的有愈伤木酚染色法，光周期反应鉴定法，除草剂敏感性鉴定法等。这些方法鉴别品种的能力较低，因此，测定结果不太准确。以生理生化技术为基础的方法有电泳法鉴定、色谱法鉴定、免疫技术鉴定等。电泳法相对技术较为简单，依据蛋白质或同工酶电泳，可以相对较准确地测定品种纯度，是目前品种纯度测定中较为快速准确的方法。 第四大类细胞学方法鉴定。第五大类分子生物学方法。 5、室内纯度测定的基本程序:从送验样品中随机数取一定数量的样品，测定异品种种子或杂株数，再计算样品纯度。 品种纯度测定的送验样品的最小重量应符合表16-1的规定。样品纯度按下列公式计算: 有时需要将测定结果与规定值比较。测定的结果(x)是否符合国家种子质量标准值或合同、标签值(a)要求可利用表16-2判别，如果,a-x,?容许差距，则说明不符合国家种子质量标准值或合同、标签值要求。 品种纯度的形态测定 1、品种纯度的形态测定是纯度测定中最基本的方法，又可分为籽粒形态测定、种苗形态测定和植株形态测定。 2、生长箱测定 生长箱测定可用于幼苗和植株形态测定。该方法可保证全部幼苗和植株都生长在同样的条件下，其品种形态特征的差异是遗传基础的表达。 生长箱测定，可采用两种方法:第一种方法，给予幼苗加速生长发育的条件，可以鉴定如田间植株一样的许多性状，而大大缩短测定时间。第二种方法，将种子或植株种植在特殊逆境条件下，可对品种进行逆境反应差异的鉴定。 品种纯度的快速测定 1、在品种纯度的测定中通常把物理法鉴定、化学法鉴定等在短时间内测定品种纯度的方法归为快速测定方法。 2、苯酚染色法 苯酸染色法的机理:苯酶染色法已作为ISTA和我国国家标准。苯酚染色法的机理有两种观点，一种认为是酶促反应，另一种认为是化学反应。该反应受Fe+、Cu+等双价离子催化，可加速反应进行。Na+离子(NaOH、Na2CO3)等对该反应有抑制作用。 苯酚染色的方法:麦类(1)国际标准法 数取净种子400粒，每重复100粒。按以下方法测定。将小麦、大麦、燕麦种子浸水18,24小时，用滤纸吸干表面水分，放入垫有1%苯酚溶液湿润滤纸的培培养皿内(腹沟朝下)，室温下小麦保持4小时，燕麦2小时，大麦24小时后即可鉴定染色深浅。小麦观察颖果颜色，大麦、燕麦观察内外稃的颜色，一般染后的颜色可分为不染色、淡褐色、褐色、深褐色、黑色五种，将与基本颜色不同的种子取出作为异品种。(2)快速法 将小麦种子用1.0%的苯酚浸15分钟，取出放在铺有1%苯酚湿润过的滤纸的培养皿中(腹沟朝下)，并盖上贴有同样滤纸的培养皿盖。置30,40?温箱内，染色0.5,1小时，观察染色结果，区分本品种与异品种。 3、愈伤木酚染色法 愈伤木酚是专门用于大豆品种鉴别的方法。根据大豆种皮内过氯化物酶活性的高、低，把大豆品种分为两大类。其原理是:大豆种皮内的过氧化物酶，可催化过氧化氢分解产生游离氧基，游氧基可使无色的愈伤木酚氧化产生红褐色的邻甲氧基对苯醌，种皮内含有的过氧化物酶活性越高，单位时间内产生5 的红褐色的邻甲氧基对苯醌越多，溶液的颜色越深。反之，颜色越浅。不同品种由于遗传基础不同，过氧化物酶的活性不同，在一定条件下，溶液染色的深浅不同，依此区分不同品种。 4、荧光分析法:紫外光能量较高，当照射物体时，就会产生光激发现象，被激发的电子很不稳定，由高能态转变为低能态时，便会发现一种可见光荧光。因作物和品种不同，其种皮结构和化学组成不同，在紫外光照射下发出荧光的波长不同，因而产生不同颜色。荧光分析可对种子或幼苗进行测定。 品种纯度的电泳测定 一、品种纯度电泳测定的发展 电泳是指溶液中的带电粒子在电场中移动的现象。这一现象在19世纪就已发现，并用于胶体化学的研究中。直到1937年Tiselius开发了蛋白质泳技术，并成功地用这种方法分离了血清蛋白之后，才使这一技术在生物研究中得到广泛地应用。电泳的种类繁多，有不用支持物电泳和用支持物的电泳两大类，在生物研究中，支持物电泳用的最多，特别是聚丙稀酰胺凝胶电泳(PAGE)因其凝胶透明度高、弹性好、无吸附性、浓度易控制，应用最为广泛。聚丙稀酰胺凝胶电泳又分为圆盘电泳和平板电泳两种，在品种纯度测定中主要应用平板电泳。 品种纯度的电泳测定 目前鉴定品种的常用电泳方法: (1)国际种子检验协会 鉴定小麦和大麦品种醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳标准程序、鉴定豌豆属和黑麦草属的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳标准方法、超薄层等电聚焦电泳测定杂交玉米种子纯度的标准方法 列入国际种子检验规程，在全世界推广应用。 (2)国际植物新品种保护联盟于1994年制订有关电泳技术标准将分析小麦高分子量麦谷蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法、分析大麦醇溶蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法、分析大麦醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法、分析玉米同工酶的淀粉凝胶电泳方法列入DUS检测应用。 (3)我国GB/T 3543农作物种子检验规程已将ISTA规程的鉴定小麦和大麦品种的聚丙烯酰胺凝胶电泳标准参照方法列入应用。2001年农业部颁布了“玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法”(NY/T449,2001)。 品种纯度的电泳测定 二、电泳法测定品种纯度的原理 (一)电泳法测定品种纯度的遗传基础 电泳法测定品种纯度主要利用电泳技术对品种的同工酶及蛋白质的组分进行分析，找出品种间差异的生化和分子指标，以此区分不同品种。 目前品种鉴定主要以同工酶和蛋白质为电泳对象。同工酶是指同一生物体或同一组织中催化相同化学反应，结构不同的一类酶。从遗传法则(DNA?RNA?蛋白质(或酶)知道，蛋白质或酶组分的差异最终是由于品种遗传基础的差异造成的，因此分析酶及蛋白质的差异从本质上说是分析遗传的差异，即品种差异，利用先进的电泳技术可非常准确地分析种子蛋白质或同工酶的差异，进而区分不同品种，测定品种纯度。 品种纯度的电泳测定 聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理:聚丙烯酰胺通过交联剂(甲叉双丙烯酰胺，Bis)在催化剂的作用下聚合而成的高分子胶状聚合物。其凝胶透明，有弹性，机械强度高，可操作性强;化学稳定性好，对pH、温度变化稳定;该凝胶属非离子型，没有吸附和电渗现象;并通过改变丙烯酰胺和交联剂的浓度可有效控制凝胶孔径的大小。因此，在品种纯度电泳分析中广泛应用。蛋白质(或酶)为两性电解质;分子筛效应;电荷效应。 转基因种子特定特性测定 1、种子批中GMO含量测定的目的:一是检测，确定种子批中是否含有GMOs ;二是鉴定，如果检测的结果是阳性的，需要通过鉴定知道GMOs 是否是经授权的，如果未经授权，种子批将被拒绝。6 如果是经授权，则进一步定量分析;三是定量，即通过定量分析，确定种子批中的GMO是否超过极限值。 2、目前常用大田作物(玉米、大豆和棉花等)GM种子检测方法主要有:(1).PCR定性和定量分析;(2).酶联免疫检测(ELISA);(3).生物测定(表现型性状生化检测等)。 3、检测技术流程:基于PCR的种子样品分析流程如下: (1). 根据 ISTA 规程扦样。扦样前，扦样器等用具必须用吸尘器清扫干净。 (2)选择测定方法和测定方案。一般实验室的鉴定，已经知道目的基因，只针对这一基因进行鉴定，方法有针对性。而商业鉴定，不知道是何种基因转入该作物中，因此，需要制定测定方案。 (3)准备工作样品。至少1000 粒种子重，如玉米可用1千克种子。 (4)磨粉并混匀。在测定时，种子样品应充分混和，磨碎应均匀。 (5)取粉样。 (6) DNA 提取。 (7)DNA 量化。 (8)PCR- 定性或定量分析。 (9)评价和报告结果。 7 种子健康测定 1、种子健康测定的目的和重要性:种子健康测定主要是测定种子是否携带有病原菌(如真菌、细菌及病毒)，有害的动物(如线虫及害虫)等状况。 种子健康测定的目的和重要性主要有以下几点:(1)种子携带的病原物可以引起田间病害，逐步蔓延，以致降低作物产量和商品价值。(2)种子的流通可以将病原物携带到其他新的地区。(3.)了解种子的种用价值，通过种子样品的健康测定，可推知种子批的健康状况，确定种子批是否需要进行处理以及4)为了调查或研究目的而评估种传病害流行的情况。(5) 探明种子发芽率低的原因，处理后的效果。(弥补发芽试验的不足。 2、未经培养检查包括直接检查、吸胀种子检查、洗涤检查、剖粒检查、染色检查、比重检查和,射线检查等。 培养后检查包括吸水纸法、砂床法、琼脂皿法，以及噬菌体法和血清学酶联免疫吸附试验法等。 3、特点:种子健康测定的方法，一般要求该方法使病原体易于识别、结果有重演性、样品间结果有可比性和简单快速等特点。但在实际检测过程中，检测结果经常会受到一些因素的影响: (1. 其他病原菌存在可能与被测病原菌产生干扰; 2. 室内检验结果通常高于田间或温室的检测结果; (3. 有些病原菌对培养条件敏感; 4. 种子已经处理; (5. 种传病原菌生活力随着长时间的贮藏而衰退。 田间检验 一、品种的特征特性，是指品种的植物学形态特征和生物学特性。植物学形态特征，如高矮、叶色、叶形、花色等;生物学特性，如作物的生育期、光周期、抗逆性等。 作物性状分为质量性状和数量性状。质量性状是指由一对或几对基因控制，在分离群体中表现为非连续分布的性状，如花色、水稻颖尖的颜色;数量性状是指由微效多基因控制，在分离群体中表现为连续分布的性状，它可以用数量单位表示，如株高、分蘖、穗 粒数，产量等。在田检过程中，应以质量性状为主，结合使用数量性状。 变异分为可遗传变异与不遗传变异。可遗传变异是由于遗传物质发生变化(包括基因突变、染色体畸变和重组)引起的，这种变异遗传给后代。不遗传变异也称表型变异，是由于环境条件影响引起的变异。这里要分清楚不遗传变异与数量性状的关系，两者都会受环境因素的影响，但数量性状是由遗传物质控制的，是可遗传的。 杂株率是指检验样区内所有的杂株(穗)占检验样区内本作物的总株(穗)数的百分率。 散粉株率是指检验区内花药伸出颖壳并正在散粉的植株占供检样区内本作物总株数的百分率。 淘汰值:在充分考虑种子生产者利益和较少可能判定失吴的基础上，将样区内观察到的杂株与标准值进行比较，作出有风险接受或淘汰种子田决定的数值。 原种:用育种家种子繁殖的第一代至第三代，经确认达到规定质量要求的种子。 大田用种:由常规原种繁殖的第一代至第三代，经确定达到规定质量要求的种子，或杂交种子 。 二、田间检验的目的与作用 1、目的:核查种子田的品种特征特性是否名副其实，以及影响收获种子质量的各种情况，从而根据这些检查的质量信息，采取相应的措施，减少剩余遗传分离、自然变异、外来花粉、机械混杂和其它不可预见的因素对种子质量产生的影响，以确保收获时符合规定的要求。 2、作用: ?检查种子田的隔离情况，防止因外来花粉污染而造成的纯度降低。 ?检查种子生产技术的落实情况，特别是去杂、去雄情况。 8 ?检查田间生长情况，特别是花期相遇情况。 ?检查品种的真实性和鉴定品种纯度，判断种子生产是否符合要求。 ?通过田间检验，为种子质量谁认证提供依据。 三、田间检验的原则 1、田间检验员应识别可区分品种间的特征，熟悉种子生产方法和程序; 2、应建立品种间相互区别的特征特性描述(即品种描述); 3、依据不同作物和有关信息(尤其是小区种植鉴定的前控结果)，策划和实施能覆盖种子田的、有代表性的、符合规定要求的取样程序和方法。 4、田间检验员应独立地对田间状况作出评价，出具检验结果报告。如果检验时某些植株难以从特 征特性加以确认，在得出结论之前需要进行第二次或更多次的检验。 四、田间检验项目: 种子生产田分为常规种子生产田和杂交种子生产田。 1、常规种子生产田检验项目; ?前作、隔离条件; ?品种真实性; ?杂株百分率; ?其他植物株的百分率; ?种子田的总体状况(倒伏、健康等情况)。 2、杂交种子生产田检验项目: ?隔离条件; ?花粉扩散的适宜条件; ?雄性不育程度; ?串粉程度;?父母本的真实性、品种纯度; ?适时先收获父本(或母本)。 五、田间检验时期 种子田在生长季节期间可以检查多次，但至少应在品种特征特性表现最充分、最明显的时期检查一 次，以评价品种真实性和品种纯度。 常规种至少在成熟期检验一次，杂交种花期必须检验23次，蔬菜作物在商品器官成熟期必须增加一次检验。 但对于大多数作物来说，花期是品种特征特性表现最充分最明显时期，所以说花期是田间检验的最佳时期，但有时成熟期也是品种特征特性表现充分明显的时期，所以常规品种应至少进行2次田检，杂交种应进行至少3次田检。蔬菜作物视情况而定。 六、种子田生产质量要求 1、种子田不存在检疫性病虫害，是我国有关法规规定的强制要求。 2、前作不存在污染源。 ?同种的其他品种的污染(主要是自生株的花粉污染); ?其他类似植物种的污染(主要是收获时机械混杂而难以清除); ?杂草种子的严重污染。 要求:种子生产者提供前作档案，证实种子田不存在自生株;油菜种子生产时，要求种子田前作若为十字花科植物，则至少隔两年;西瓜种子田前作不应有自生株，不允许重荐栽培。 3、隔离条件 要求:生产大田常规水稻种空间隔离20m;生产大田杂交水稻种空间隔离200m(籼型)、500m(粳型);杂交玉米空间隔离300m。西瓜种子生产主要为杂交种，基本实行套袋授粉，可以不需要隔离。 4、田间杂株率和散粉株率。( 七、田间检验程度 1、基本情况调查 ?了解情况。被检单位地址;作物、品种、类别、面积等。 ?隔离情况。围绕一圈检查有无污染源，是否达到隔离距离要求，自生株和杂草的检查。 ?品种真实性检查。标签的检查:生产者应保留种子批的两个标签，一个在田间，一个自留;杂交种保留父母本的标签。真实性检查:至少检查100个穗或株，确认品种的真实性与品种描述是否一致。 ?种子生产田的生长状况。对于严重倒伏、杂草危害或另外一些原因引起生长不良的种子田，不能进行品种纯度评价，而应该被淘汰。对于中间状态，应借助小区种植的前控结果，作为补充信息进行评价。 9 2、取样 同一品种、同一来源、同一繁殖世代、耕作制度和栽培管理相同而又连在一起的地块可划分为一个检验区。 样区大小、样区频率、样区分布为取样的三要素。 4N原则:如果规定的杂株标准为1/N，总样本的大小至少应为4N。例如:水稻恢复系(R)品种纯度不低于99.5%，那么其杂株标准为1/200(即0.5%)，总样本的大小应不少800株。总样本的大小=样区大小×样区频率，如一个样区取100株调查，取了8个样区(样区频率)，总样本的大小就是800株。要强调的是:4N原则应是权衡观察样品的费用、时间和产生错误结论的风险，兼顾平衡了各种因素后的最低要求。一般情况下，随着检验区面积增大，总样本的大小应大于4N;原因是检验样本越小，误差就越大，检验结果出现错误的可能性就越大。 ?样区频率; 一般来说，样区的数目应随种子田大小成比例的增加，由于原种、亲本种子的标准高，这些高纯度作物种子被检植株的数目比大田用种多。 ?样区大小; 样区的大小和模式取决于被检作物、田间大小、行播或撒播，自交或异交、以及种子生长的地理位置等因素。 大于10公倾的禾谷类常规种子的种子田，取1m×20m=20?，方向与播种方向成直角;小面积的每样区取500株(穗)。 杂交水稻和玉米，父、母本视为不同的田块分别检查和计数。水稻每样区取500株，玉米样区内行内100株或相邻两行各50株。 ?样区分布;应是随机的和广泛的。( 3、检验 主要性状 通常是边设点边检验，直接在田间进行分析鉴定。在田间检验过程中，田间检验员应采用来评定品种真实性和品种纯度，当采用主要性状难以得出结论时结合使用次要性状。 田间检验员宜获得相应小区鉴定结果，以证实在前控中发现的杂株。杂株包括与被检品种特征特性明显不同和不明显的植株。 利用雄性不育系进行杂交种子生产的田块(如杂交水稻生产)，除记录父母本杂株率外，还须记录检查母本雄性不育的质量。如利用显微镜检查不育系(A或s)花粉败育程度，利用纸袋套穗自交检测结实程度。 ?在检查时，如遇下列情况，可采用一些特殊的处理: ?如果种子田中有杂株，而小区种植鉴定中没有观察到，必须记录和考虑这些杂株，以决定接受与拒绝该田块。委托检验的机构要对小区种植前控结果和田间检验结果进行核实。如果小区鉴定和田间检验结果有较大的偏离，有必要在小区鉴定和种子田进行进一步的检查，以获得正相关结果。 样区内的杂株数 杂株率 (%),，100 ?种子田处于难以检查的状态。对于严重倒伏、杂草危害或另外一些原因引起生长不良的种子田，样区内供检本作物株数不能进行品种纯度评价，而应该被淘汰。对于中间状态，应借助小区种植的前控结果，作为补充信息进行评价。 ?严重的品种混杂。如果有严重的品种混杂现象，田间检验员只需检查两个样区，取其平均值，推算出群体，查出淘汰值。如果大于或等于淘汰值就淘汰种子田，如果小于则继续检查。 ?在某一样区发现杂株而其他样区并未发现杂株。出现这种情况表明正常的检验程序不是很适宜。这种现象通常发生在杂株与被检品种非常相似的情况下，只能通过非常接近的仔细检查穗部才行。 4、结果计算与表示 ?品种纯度 ?淘汰值。对于品种纯度高于99.0%或每公顷低于1000000株或穗，需要采用淘汰值。(P269 表198) ,对于行播作物(禾谷类等作物，通常采取数穗而不数株)，可应用以下公式计算每公顷植株(穗)数: P, 1,000,000M/ W 式中: P 每公顷植株(穗)总数; 10 M 每一样区内1m行长的株(穗)数的平均值; W 行宽(cm)。 ,对于撒播作物，则计数0.5M2面积中的株数。撒播每公顷群体可应用以下公式计算: P, 20,000×N 式中: P 每公顷植株数; N 每样区内0.5M2面积的株(穗)数的平均值。 ?杂株率。对于品种纯度低于99.0%或每公顷超过1000000株或穗，用杂株率表示。 样区内的杂株数 杂株率 (%),，100样区内供检本作物株数5、检验报告 田间检验员田间检验完成后，应及时填写田间检验报告。报告应包括基本情况、检验结果、检验意见。 田间检验员应根据检验结果，签署下列意见(三种): ?如果田间检验的所有要求如隔离条件、品种纯度等都符合生产要求，建议被检种子田符合要求。 ?如果田间检验的所有要求如隔离条件、品种纯度等有一部分未符合生产要求，而且通过整改措施(如去杂)可以达到生产要求，应签署整改建议。整改后，还要通过复查，确认符合要求后才可建议被检种子田符合要求。 ?如果田间检验的所有要求如隔离条件、品种纯度等有一部分或全部不符合生产要求，而且通过整改措施仍不能达到生产要求，如隔离条件不符合要求、严重倒伏等，应建议淘汰被检种子田。 小区种植鉴定 一、小区种植鉴定的目的 一是鉴定种子样品的真实性与品种描述是否相符，即通过对田间小区内种植的被检样品的植株与标准样品的植株进行比较，并根据品种描述判断其品种真实性; 二是鉴定种子样品纯度是否符合国家规定标准或种子标签标注值的要求。 二、小区种植鉴定的作用 小区种植鉴定从作用来说可分为前控和后控两种。 1、前控:当种子批用于繁殖生产下一代种子时，该批种子的小区种植鉴定对下一代种子来说就是前控，如同我国种子繁殖期间的亲本鉴定。 在种子生产，如果对生产种子的亲本种子进行小区种植鉴定，那么亲本种子的小区种植鉴定对于种子生产来说就是前控。 2、后控:通过小区种植鉴定来检测生产种子的质量便是后控，比如对收获后的种子进行小区种植鉴定就是后控。 我国每年在海南岛进行的异地小区种植鉴定就是后控。后控也是我