血凝与血凝抑制实验讲稿.ppt
关于血凝与血凝抑制实验第一页，讲稿共四十一页哦一、实验目的1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操 作方法和结果判定方法2、了解新城疫有关背景知识 第二页，讲稿共四十一页哦二、实验内容1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体第三页，讲稿共四十一页哦三、实验原理1、血凝试验（、血凝试验（HAHA）原理：某些病毒或病毒的）原理：某些病毒或病毒的血凝素血凝素能选选择性地择性地使某种动物地使某种动物地红细胞红细胞发生凝集，这种凝集红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（的现象称为血凝（HAHA）,也称直接血凝反应。也称直接血凝反应。病病毒毒颗颗粒粒红红细细胞胞第四页，讲稿共四十一页哦2 2、血凝抑制试验（HIHI）原理：当病毒的悬液中加入）原理：当病毒的悬液中加入特异特异性抗体性抗体，且这种抗体的量足以，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，病毒颗粒或其血凝素时，则则红细胞表面的受体红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HIHI）反应，也称血凝抑制反应。）反应，也称血凝抑制反应。I am lateI am late！抗体抗体抗原抗原第五页，讲稿共四十一页哦四、实验材料1、血凝板（2人/块）2、新城疫阳性血清3、被检血清（1份）4、1红细胞悬液5、稀释液6、移液器（50ul,2人/把）7、枪头第六页，讲稿共四十一页哦五、实验方法与结果判定血凝试验（HA)1 1、在血凝板上第一排的1 11212孔内各加入孔内各加入50ul50ul生理盐水生理盐水2 2、在第、在第1孔内加入孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第病毒抗原，然后依次倍比稀释至第1111孔，最后弃孔，最后弃50ul50ul3 3、每孔加入、每孔加入1 1鸡红细胞悬液50ul50ul4 4、轻轻振荡均匀，后放于室温或37中静置中静置3030分钟分钟5 5、结果判定、结果判定第七页，讲稿共四十一页哦12345678910111224 816 32 64 128 256 5121024 2048红细胞对照生理盐水505050505050505050505050抗原5050505050505050505050弃50红细胞505050505050505050505050结果 血凝效价测定血凝效价测定第八页，讲稿共四十一页哦结果判定标准1 1、：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100100凝集；凝集；2、：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75凝集；3 3、：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即5050凝集；凝集；4 4、：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即有凝集块，即25凝集；凝集；5 5、：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集；：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集；第九页，讲稿共四十一页哦第十页，讲稿共四十一页哦血凝价的判定以出现（50凝集）的抗原最高稀释倍数为该抗原的血凝价（1:128）。50ul 1:256稀释的病毒抗原为该抗原的一个血凝单位。稀释倍数2 4 8 16 32 64128 25651210242048细胞对照结果 第十一页，讲稿共四十一页哦血凝抑制试验1 1、将病毒抗原稀释成、将病毒抗原稀释成4 4个血凝单位（个血凝单位（1/1284=1:321/1284=1:32）2、在血凝板上、在血凝板上1 11212孔内各加入孔内各加入50ul50ul生理盐水；生理盐水；3 3、在第1孔内加入被检血清50ul50ul，然后倍比稀释至第，然后倍比稀释至第1111孔，孔，最后弃最后弃50ul；4、第、第11212孔内加入4单位抗原50ul50ul（第（第1212孔为病毒对照）；孔为病毒对照）；5 5、每孔加入、每孔加入1 1鸡红细胞悬液鸡红细胞悬液50ul；6 6、轻轻振荡均匀，后放于室温或、轻轻振荡均匀，后放于室温或3737中静置中静置3030分钟分钟6 6、结果判定第十二页，讲稿共四十一页哦12345678910111224 816 32 64 128 256 5121024 2048病毒对照生理盐水505050505050505050505050血清5050505050505050505050弃504单位抗原505050505050505050505050红细胞505050505050505050505050结果 血凝抑制效价测定血凝抑制效价测定第十三页，讲稿共四十一页哦结果判定标准1 1、：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即、：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100100凝集；凝集；2 2、：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75凝集；凝集；3 3、：红细胞形成一个环状，四周有下凝集块，即5050凝集；凝集；4 4、：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即集块，即2525凝集；凝集；5、：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝、：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。集。第十四页，讲稿共四十一页哦血凝抑制价的判定以出现完全抑制凝集(即不凝集)的血清最高稀释倍数为该血清的血凝抑制价（1:4）。稀释倍数2 4 816 32 64128 25651210242048血清对照结果 第十五页，讲稿共四十一页哦六、注意事项1、红细胞用前请摇匀2、用枪加样定要准，尽量不要有气泡3、结果判定有耐心4、HA和HI勿相混第十六页，讲稿共四十一页哦七、新城疫背景介绍第十七页，讲稿共四十一页哦鸡新城疫（Newcastle Disease ND）第十八页，讲稿共四十一页哦1、概、概 述述ND是由ND病毒（Newcastle disease Virus,NDV）引起的高度接触性和高度毁灭性的急性败血性传染病。1926年首先发生于印尼，同年发现于英国新城我国1928年有该病记载是当今全球范围内最严重的家禽传染病之一被国际兽疫局（OIE)列为A类传染病 第十九页，讲稿共四十一页哦 别名：新城疫、亚洲鸡温、伪鸡瘟 鸡瘟：禽流感、欧洲鸡温、真性鸡温第二十页，讲稿共四十一页哦 新城疫病毒，属副粘病毒科，副粘病毒属。病毒颗粒表面具有血凝素蛋白，可以刺激机体产生血凝抑制抗体，2、病原体、病原体第二十一页，讲稿共四十一页哦第二十二页，讲稿共四十一页哦 根据临诊表现和病程长短分为：（1）最急性型：突然发病，病变不明显，见于雏鸡及本病流行初期。急性型：（典型新城疫）亚急性型（非典型ND)慢性型（非典型ND）3、病状及病理变化、病状及病理变化第二十三页，讲稿共四十一页哦（2）、急性型：侵害消化系统为主，也称嗜内脏速发型。病状特点：a.食欲减退，饮水增加，离群呆立，眼睛半开半闭，翅膀下垂，冠、肉髯呈紫黑色。第二十四页，讲稿共四十一页哦b.嗉囊积液、体温升高、呼吸困难。鼻腔内有大量分泌物，严重拉稀 粪便呈黄绿色或褐色，有时混有血。第二十五页，讲稿共四十一页哦c.死亡率高,非免疫鸡感染后可以80-100%死亡。d.部分患鸡出现神经症状，头颈歪向一侧而咀向上，母鸡产蛋下降。第二十六页，讲稿共四十一页哦第二十七页，讲稿共四十一页哦病变特点：全身的粘膜和浆膜出血，突出病变在消化道。A.腺胃粘膜水肿，粘膜上的乳头及其周围有出血点，间有溃疡。B.腺胃与肌胃、腺胃与食道交界处粘膜可见到出血点或出血带。第二十八页，讲稿共四十一页哦lC.小肠、直肠、泄殖腔粘膜充血、出血或有坏死，小肠、直肠、泄殖腔粘膜充血、出血或有坏死，lD.盲肠扁桃体出血。盲肠扁桃体出血。第二十九页，讲稿共四十一页哦第三十页，讲稿共四十一页哦皮下脂肪出血皮下脂肪出血第三十一页，讲稿共四十一页哦脑膜充血出血卵黄性腹膜炎第三十二页，讲稿共四十一页哦有的病鸡表现眼结膜炎有的病鸡表现眼结膜炎第三十三页，讲稿共四十一页哦 （3）、亚急性型（非典型ND，以侵害呼吸道为主）也称肺脑炎型：其主要的特点：是症状及病变不典型。症状：多见4-35日龄鸡，25日龄前后最常发病。呼吸困难，精神沉郁，继而较早地出现神经症状，此时出现歪头，扭颈，角弓反张，倒地不能起立。第三十四页，讲稿共四十一页哦病变：喉头及气管粘膜水肿，出血、充血、并有大量粘液，肺呈紫黑色（肺出血性炎症）。硬脑膜下树枝状充血，并有出血点。心冠、脂肪有出血点。发病率高，死亡率较低。第三十五页，讲稿共四十一页哦 （4）、慢性型（非典型ND）母鸡：轻者只表现产蛋率下降（约10-30%），产软壳蛋。重者出现精神沉郁，呼吸困难，黄绿色稀粪，喉头、气管粘膜充血、出血，个别病例出现消化道病变。第三十六页，讲稿共四十一页哦5、诊 断 1、血凝抑制试验（HI）：监测鸡群中的HI抗体，评价疫苗的免疫效果及鸡体内的抗体水平。2、分离病毒：鉴别弱毒及野毒。（1）分离病毒：强毒：24-72小时鸡胚死亡，弱毒一般不死。第三十七页，讲稿共四十一页哦6、免疫v灭活疫苗（激发体液免疫）v活疫苗（激发体液免疫、细胞免疫和局部粘膜免疫）I系苗、II系苗、III系苗、IV系苗和V4弱毒苗v HI抗体检测：种鸡1：64；商品鸡1：16第三十八页，讲稿共四十一页哦首免时间：避开母源抗体的干扰首免日龄4.5(1日龄HI对数值4）54.5：母源抗体的半衰期举例：HI1：64首免时间4.5(6-4)+5=14日龄第三十九页，讲稿共四十一页哦第四十页，讲稿共四十一页哦感感谢谢大大家家观观看看第四十一页，讲稿共四十一页哦
