高中生物检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质.ppt

高中生物检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质现在学习的是第1页，共27页实验：检测生物组织中的糖类、脂肪和实验：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质蛋白质实验原理：原理：某些化学某些化学试剂能能够使生物使生物组织中的有关有中的有关有机化合物机化合物产生特定的生特定的颜色反色反应。化学化学试剂+有机化合物有机化合物特定的特定的颜色色还原糖还原糖+斐林试剂斐林试剂 砖红色沉淀砖红色沉淀脂肪脂肪+苏丹苏丹（或苏丹（或苏丹）染液）染液橘黄色（或红色）橘黄色（或红色）蛋白质蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂紫色紫色淀粉淀粉+碘碘蓝色蓝色水浴加热水浴加热现在学习的是第2页，共27页一、可溶性还原糖的检测：一、可溶性还原糖的检测：（1）原理：还原糖）原理：还原糖+斐林试剂斐林试剂 砖红色沉淀。砖红色沉淀。（2）选材：苹果、梨、白萝卜。含糖量较高，颜色为白）选材：苹果、梨、白萝卜。含糖量较高，颜色为白色或近于白色的植物组织。色或近于白色的植物组织。（3）检测过程：）检测过程：水浴加热水浴加热振荡混匀振荡混匀5065水浴水浴加热加热2min2mL组组织样液织样液刚配制的斐林刚配制的斐林试剂试剂2mL呈现浅蓝色呈现浅蓝色变成砖红色（变成砖红色（Cu2O）还原糖：含有半缩醛羟基的糖类，主要是葡萄糖、果糖和麦芽还原糖：含有半缩醛羟基的糖类，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。现在学习的是第3页，共27页 当质量浓度为当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度的氢氧化钠溶液与质量浓度为为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu（OH）2悬浊液。悬浊液。Cu（OH）2与葡萄糖、果糖、麦与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2O沉沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。糖。RCHO+2Cu(OH)RCHO+2Cu(OH)2 2RCOOH+CuRCOOH+Cu2 2O+2HO+2H2 2O O甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。者久置后才用。现在学习的是第4页，共27页制备组织样液制备组织样液梨或苹果梨或苹果研磨研磨取取5g，放入研钵中，放入研钵中洗净、去皮、切块洗净、去皮、切块过滤过滤滤液滤液（用单层纱布）（用单层纱布）显色反应显色反应 向试管中加入向试管中加入2ml组织样液组织样液向试管中加入向试管中加入2ml新配新配制的斐林试剂或本尼制的斐林试剂或本尼迪特试剂迪特试剂振荡混匀振荡混匀5065水浴水浴加热加热2min观察现象观察现象 观察溶液颜色变化：浅蓝色观察溶液颜色变化：浅蓝色棕色棕色砖红色砖红色结论：结论：生成砖红色沉淀，说明梨或苹果中含有还原糖。生成砖红色沉淀，说明梨或苹果中含有还原糖。砖红色的糖（还原糖）非（斐林试剂）常好吃砖红色的糖（还原糖）非（斐林试剂）常好吃现在学习的是第5页，共27页2 ml组织样液组织样液1 ml新配制的斐林试剂新配制的斐林试剂50 65水浴加热约水浴加热约2min观察颜色变化观察颜色变化砖红色砖红色浅蓝色浅蓝色棕棕 色色【斐林试剂斐林试剂】：甲液：甲液：0.1g/mL的的NaOH溶液，乙液：溶液，乙液：0.05 g/mL的的CuSO4溶液，使用前等体积混合均匀（生成浅蓝色的溶液，使用前等体积混合均匀（生成浅蓝色的Cu（OH）2悬浊液），现配现用（时间一长，悬浊液），现配现用（时间一长，Cu（OH）2 沉淀在溶液底部沉淀在溶液底部无法发生反应。且需要水浴加热。无法发生反应。且需要水浴加热。现在学习的是第6页，共27页还原糖的检测结果还原糖的检测结果还原糖的检测结果还原糖的检测结果斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热的条件下，生成砖红色的斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热的条件下，生成砖红色的Cu2O沉淀。沉淀。-CHO+Cu(OH)2悬浊液悬浊液-COOH+Cu2O（砖红色）（砖红色）现在学习的是第7页，共27页二、脂肪的检测二、脂肪的检测（1）选材：经浸泡去种皮的花生种子。）选材：经浸泡去种皮的花生种子。（2）检测过程：）检测过程：制片制片选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央制成临时装片：滴制成临时装片：滴1 2滴蒸馏水，盖上盖玻片滴蒸馏水，盖上盖玻片染色：在薄片上滴加染色：在薄片上滴加2 3滴苏丹滴苏丹染液染液，染色，染色2 3min洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为50%的酒精的酒精1 2滴滴镜检观察：镜检观察：在低倍镜下寻找到已着色的圆形在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。小颗粒，然后用高倍镜观察。苏三（苏丹苏三（苏丹）送了我一个橘黄色的胭脂（脂肪）送了我一个橘黄色的胭脂（脂肪）切片：切片：花生种子（浸泡花生种子（浸泡h），去皮，将子叶削成薄片。），去皮，将子叶削成薄片。视野中视野中有橘黄有橘黄色颗粒色颗粒现在学习的是第8页，共27页橘黄色小圆颗粒即橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒为脂肪颗粒脂肪脂肪+苏丹苏丹（或苏丹（或苏丹）染液）染液 橘黄色（或红色）橘黄色（或红色）现在学习的是第9页，共27页现在学习的是第10页，共27页注意事项：注意事项：（1）若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡34小时，浸泡时间短小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。成形，切片要尽可能的薄。（2）染色后一定要用）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解苏丹的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解苏丹），染色和洗浮色时间不宜过长。），染色和洗浮色时间不宜过长。现在学习的是第11页，共27页三、蛋白质的检测：三、蛋白质的检测：（1）原理：蛋白质）原理：蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂 紫色络合物紫色络合物（2）选材：黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆）选材：黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆（3）检测过程：）检测过程：2 ml组织样液组织样液2 ml双缩脲试剂双缩脲试剂A液，摇匀液，摇匀3-4滴双缩脲试剂滴双缩脲试剂B液，摇匀液，摇匀观察颜色变化观察颜色变化紫紫色色双（双缩脲）子（紫色）弹（蛋白质）双（双缩脲）子（紫色）弹（蛋白质）现在学习的是第12页，共27页 将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。反应将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。反应式为式为:双缩脲双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）在碱性环境（在碱性环境（NaOH）中能和）中能和Cu2+作用生成紫色的络化物，作用生成紫色的络化物，这个反应叫做双缩脲反应。这个反应叫做双缩脲反应。蛋白质分子蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩脲结构相似，因此，蛋白质也可与双缩脲中含有的肽键结构与双缩脲结构相似，因此，蛋白质也可与双缩脲试剂发生颜色反应。试剂发生颜色反应。双缩脲双缩脲双缩脲试剂双缩脲试剂现在学习的是第13页，共27页无色无色紫色紫色（创造碱性条件）（创造碱性条件）（提供（提供Cu2+）双缩脲试剂双缩脲试剂B 3-4滴滴双缩脲试剂双缩脲试剂A 2mL2mL组织组织样液样液在碱性条件（在碱性条件（NaOH）下，蛋白质中的肽键）下，蛋白质中的肽键（NHCONHCO）与与Cu2作用生生紫色络合物。因此，操作时，应先加作用生生紫色络合物。因此，操作时，应先加A再加再加B，且，且A多多B少，如少，如果果B过量，过量，Cu2的蓝色就会遮盖生成的紫色。的蓝色就会遮盖生成的紫色。现在学习的是第14页，共27页制备组织样液制备组织样液黄豆组织样液（或鸡蛋清稀释液）黄豆组织样液（或鸡蛋清稀释液）黄豆黄豆浸泡浸泡研磨研磨过滤过滤滤液滤液去皮、切片去皮、切片蛋清液蛋清液鸡蛋鸡蛋鸡蛋清稀释液鸡蛋清稀释液稀释稀释显色反应显色反应向试管中注入向试管中注入2ml组织样液组织样液向试管中注入向试管中注入2ml双缩脲试剂双缩脲试剂A加入加入3-4滴双缩滴双缩脲试剂脲试剂B观察现象观察现象观察颜色变化：无观察颜色变化：无紫色紫色结论：加入双缩脲试剂结论：加入双缩脲试剂A后，颜色呈现为无色，加入后，颜色呈现为无色，加入B后，变为紫色，后，变为紫色，说明鸡蛋清中有蛋白质存在。说明鸡蛋清中有蛋白质存在。现在学习的是第15页，共27页蛋白质的检测结果蛋白质的检测结果现在学习的是第16页，共27页注意事项：注意事项：（1）如果用鸡蛋清作为材料，）如果用鸡蛋清作为材料，则必须进行充分稀释，否则反应后的则必须进行充分稀释，否则反应后的产物会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗刷干净。产物会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗刷干净。（2）【双缩脲试剂双缩脲试剂】：A液液：0.1g/mL NaOH，B液：液：0.01g/mL CuSO4。先加先加A液后加液后加B液，且液，且B不能过量，不需要加热。不能过量，不需要加热。（3）过量的双缩脲试剂）过量的双缩脲试剂B会与试剂会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成的紫色。的紫色。（4）先加入先加入A液液2ml，摇匀；再加入，摇匀；再加入B液液3-4滴，摇匀。滴，摇匀。现在学习的是第17页，共27页四、淀粉的检测：四、淀粉的检测：（2）选材：马铃薯匀浆）选材：马铃薯匀浆（1）原理：淀粉）原理：淀粉+碘碘 蓝色蓝色（3）检测过程：）检测过程：2 ml组织样液组织样液2滴碘液滴碘液观察颜色变化观察颜色变化蓝色蓝色蓝（蓝色）点（淀粉）点（碘）蓝（蓝色）点（淀粉）点（碘）现在学习的是第18页，共27页制备组织样液制备组织样液马铃薯块茎马铃薯块茎研磨研磨取取5g，放入研钵中，放入研钵中洗净、去皮、切块洗净、去皮、切块过滤过滤滤液滤液显色反应显色反应向试管中注入向试管中注入2ml组织样液组织样液加入加入5滴碘滴碘-碘化钾碘化钾观察现象观察现象观察溶液颜色变化：无色观察溶液颜色变化：无色蓝色蓝色结论：溶液变蓝，说明马铃薯组织中有淀粉存在。结论：溶液变蓝，说明马铃薯组织中有淀粉存在。现在学习的是第19页，共27页鉴定物质鉴定物质生物材料生物材料所用试剂所用试剂颜色变化颜色变化还原糖还原糖脂肪脂肪蛋白质蛋白质淀粉淀粉苹果、梨、白萝卜苹果、梨、白萝卜斐林试剂斐林试剂砖红色沉淀砖红色沉淀花生种子花生种子苏丹苏丹染液染液苏丹苏丹染液染液橘黄色橘黄色红色红色豆浆、牛奶、鸡蛋清豆浆、牛奶、鸡蛋清双缩脲试剂双缩脲试剂紫色紫色面粉、马铃薯匀浆液面粉、马铃薯匀浆液碘液碘液蓝色蓝色注：鉴定还原糖需加热；脂肪的鉴定不一定要用显微注：鉴定还原糖需加热；脂肪的鉴定不一定要用显微镜，要观察脂肪颗粒，则必须用显微镜。镜，要观察脂肪颗粒，则必须用显微镜。现在学习的是第20页，共27页五、观察五、观察DNA、RNA在细胞中的分布在细胞中的分布实验原理：实验原理：（1）DNA主要分布在细胞核内，主要分布在细胞核内，RNA大部分存在于细胞质中。大部分存在于细胞质中。（2）甲基绿和吡罗红两种染色剂对）甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和和RNA的亲和力不同，甲的亲和力不同，甲基绿使基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。呈现红色。（3）利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示）利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和和RNA在细胞中的分布。在细胞中的分布。（4）盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的体中的DNA和蛋白质分离，有利于和蛋白质分离，有利于DNA和染色剂结合。和染色剂结合。甲基绿使甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色，通过观察两种呈现红色，通过观察两种颜色出现的部位来判断颜色出现的部位来判断DNA和和RNA在细胞中的分布。在细胞中的分布。现在学习的是第21页，共27页方法步骤：方法步骤：（1）取材和制片）取材和制片在洁净的载玻片上滴在洁净的载玻片上滴1滴滴0.9%NaCl溶液溶液用消毒牙签刮口腔内侧壁后涂抹在液滴上用消毒牙签刮口腔内侧壁后涂抹在液滴上将涂有将涂有口腔上皮细胞口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯上烘干的载玻片在酒精灯上烘干（2）水解：）水解：将烘干的载玻片放入盛有将烘干的载玻片放入盛有30 mL 8%盐酸盐酸的小烧杯中，的小烧杯中，30水浴保温水浴保温5 min（3）冲洗涂片：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片）冲洗涂片：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10秒秒（4）染色）染色吸水纸吸去载玻片上的水分吸水纸吸去载玻片上的水分在载玻片上滴加两滴在载玻片上滴加两滴2滴用吡罗红，甲基绿染色剂，染色滴用吡罗红，甲基绿染色剂，染色5分分钟钟吸去多余的染色剂，盖上盖玻片吸去多余的染色剂，盖上盖玻片（5）观察：）观察：先先低倍镜：选染色均匀，色泽浅的区域，移到视野中央低倍镜：选染色均匀，色泽浅的区域，移到视野中央。后高倍镜：观察。后高倍镜：观察细胞核和细胞质的染色情况。细胞核和细胞质的染色情况。现在学习的是第22页，共27页0.9%生理盐水？生理盐水？人口腔上皮细胞人口腔上皮细胞8%盐酸？盐酸？蒸馏水蒸馏水30水浴水浴吡罗红甲基绿染色剂吡罗红甲基绿染色剂取材取材水解水解冲洗冲洗染色染色观察观察现在学习的是第23页，共27页思考与讨论：思考与讨论：（1）9%Nacl溶液的作用？溶液的作用？保持空腔上皮细胞的正常形态。保持空腔上皮细胞的正常形态。（2）8%盐酸的作用？盐酸的作用？杀死细胞，改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞；使染杀死细胞，改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞；使染色体中的色体中的DNA与蛋白质分离，有利于与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。与染色剂结合。（3）吡罗红甲基绿染色剂要现用现配。该实验不宜选用绿色植物叶肉）吡罗红甲基绿染色剂要现用现配。该实验不宜选用绿色植物叶肉细胞（有颜色）和其他有颜色的细胞（如鸡血细胞）作为实验材料，因细胞（有颜色）和其他有颜色的细胞（如鸡血细胞）作为实验材料，因其会干扰颜色观察。其会干扰颜色观察。现在学习的是第24页，共27页双缩脲反应：含有两个或两个以上肽键的化合物与碱性硫酸铜作双缩脲反应：含有两个或两个以上肽键的化合物与碱性硫酸铜作用，生成蓝紫色的复合物用，生成蓝紫色的复合物现在学习的是第25页，共27页斐林试剂与双缩脲试剂的比较斐林试剂与双缩脲试剂的比较斐林斐林试剂试剂双双缩脲试剂缩脲试剂甲液甲液乙液乙液A液液B液液成分成分0.1 g/mL NaOH溶液溶液0.05 g/mL CuSO4溶液溶液0.1 g/mL NaOH溶液溶液0.01 g/mL CuSO4溶液溶液鉴鉴定定物物质质可溶性可溶性还还原糖原糖蛋白蛋白质质或多或多肽肽添加添加顺顺序序甲乙两液等量混匀后立即甲乙两液等量混匀后立即使用（使用（现现配配现现用）用）先加入先加入A液液1 mL，摇摇匀，匀，再加入再加入B液液4滴（不能滴（不能过过量）量），摇摇匀匀反反应应条件条件5065 水浴加水浴加热热不需加不需加热热，摇摇匀即可匀即可反反应应现现象象样样液液变砖红变砖红色沉淀色沉淀样样液液变变紫色紫色斐林试剂用的是甲液和乙液，须现配现用，混合均匀，水浴加热。斐林试剂用的是甲液和乙液，须现配现用，混合均匀，水浴加热。双缩脲试剂用的是双缩脲试剂用的是A液和液和B液，先加液，先加A液，后滴液，后滴B液，不用水浴加液，不用水浴加热。热。现在学习的是第26页，共27页比较项目比较项目斐林试剂斐林试剂双缩脲试剂双缩脲试剂不不同同点点使用方法使用方法甲液和乙液混合均匀后方可甲液和乙液混合均匀后方可使用，且使用，且现配现用现配现用使用时先加使用时先加A液再加液再加B液液反应条件反应条件需需50-65水浴加热水浴加热不需加热即可反应不需加热即可反应反应原理反应原理还原糖中的醛基被还原糖中的醛基被Cu（OH）2 悬浊液氧化悬浊液氧化,Cu（OH）2被还原为被还原为砖红色砖红色Cu2O沉淀沉淀具有两个以上肽键的化合物具有两个以上肽键的化合物在碱性条件下与在碱性条件下与Cu2+反应生反应生成成紫色紫色络合物络合物颜色颜色砖红色砖红色紫色紫色浓度浓度乙液乙液CuSO4浓度为浓度为0.05 g/mLB液液CuSO4浓度为浓度为0.01g/mL相同点相同点 都含有都含有NaOH、CuSO4两种成分，且所用两种成分，且所用NaOH浓度都是浓度都是0.1g/mL现在学习的是第27页，共27页