某肝明乐胶囊对化学性肝损伤有辅助保护作用动物试验报告.pdf

某肝明乐胶囊对化学性肝损伤有辅助保护作用动物试验报告某肝明乐胶囊对化学性肝损伤有辅助保护作用动物试验报告目的 探讨某肝明乐胶囊对化学性肝损伤的辅助保护作用。方法 雌性 SD 大鼠随机分为五组，每组 10 只，试验设 200mg/kgBW、600mg/kgBW、1200mg/kgBW 三个剂量组（分别相当于人体每日推荐量的 5、15、30 倍），分别量取 10g、30g、60g 样品，依次加蒸馏水至500ml 混匀备用，冰箱保存，用完再配。另设蒸馏水对照组和 50%乙醇模型对照组。采用酒精肝损伤模型法，三个剂量组给予不同剂量的受试物，阴性对照组和模型对照组给予蒸馏水，按10ml/kgBW 每天经口灌胃一次，连续给予 30 天，每周称两次体重，以此调整给药量。试验结束时将模型对照组和三个剂量组一次经口灌胃给予 50%无水乙醇，剂量为 14ml/kgBW，阴性对照组给予同体积的蒸馏水，禁食 16h 后处死动物取肝脏称重，计算脏体比，并用肝脏进行生化指标检测及组织病理学检查。结果 连续 30 天经口灌胃给予雄性 SD 大鼠后，可见动物生长发育正常；在酒精性肝损伤模型建立的基础上，能显著降低低、高剂量组大鼠肝匀浆中的过氧化脂质降解产物丙二醛含量（P0.05、P0.05）以及升高中、高剂量组大鼠肝匀浆中还原型谷胱甘肽的含量（P0.01、P0.01）；三个剂量组大鼠肝匀浆中的甘油三酯含量差异均无显著性（P0.05）；组织病理学检查结果为阳性。结论 某肝明乐胶囊对雄性昆明种大鼠具有酒精性肝损伤辅助保护作用。标签：某肝明乐胶囊；辅助保护作用1 材料和方法1.1 样品：某肝明乐胶囊，系棕色液体。人体每日推荐量为 2.4g/60kgBW。用蒸馏水作溶剂配制受试物溶液。1.2 无水乙醇：分析纯，由某化学试剂厂生产，批号：20110820。1.3 实验动物：SD 大鼠 50 只，体重160-200g，生产许可证号为SCXK（川）2008-24.SPF 级。实验动物房使用许可证号为 SYXK（川）2011-043.屏障系统，温度为 20-25，相对湿度 40-70%。1.4 试验分组及剂量设计：将雌性SD 大鼠随机分为五组，每组10 只，试验设 200mg/kgBW、600mg/kgBW、1200mg/kgBW 三个剂量组（分别相当于人体每日推荐量的 5、15、30 倍），分别量取 10g、30g、60g 样品，依次加蒸馏水至500ml 混匀备用，冰箱保存，用完再配。另设蒸馏水对照组和50%乙醇模型对照组。用乙醇（分析纯）造成肝损伤模型，乙醇浓度为 50%（以蒸馏水稀释），灌胃量 14ml/kgBW（折合乙醇的剂量为 7000mg/kgBW）。1.5 试验方法：采用酒精肝损伤模型法，三个剂量组给予不同剂量的受试物，阴性对照组和模型对照组给予蒸馏水，按10ml/kgBW 每天经口灌胃一次，连续给予 30 天，每周称两次体重，以此调整给药量。试验结束时将模型对照组和三个剂量组一次经口灌胃给予 50%无水乙醇，剂量为 14ml/kgBW，阴性对照组给予同体积的蒸馏水，禁食 16h 后处死动物取肝脏称重，计算脏体比，并用肝脏进行生化指标检测及组织病理学检查。2 检测指标2.1 肝匀浆中过氧化脂质降解产物丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）及甘油三酯（TG）的测定：用 MDA 和 GSH 测定试剂盒，UV1100 分光光度计测定；用 TG 测定试剂盒和 AU-400 全自动生化分析仪进行测定。2.2 肝脏称重及脏器系数的计算2.3 肝脏组织病理学诊断标准2.3.1 病理观察材料：从动物肝左叶中部做横切面取材、切片、染色、镜下观察脂滴在肝脏中的分布、范围和面积。2.3.2 病理观察方法：每例动物肝组织用40 倍物镜连续观察组织切片，根据阳性细胞多少和分布的范围，按0、1、2、3、4 分进行评分。将所得分数的平均值作为该例肝组织的脂肪染色评分。2.3.3 病理诊断标准：病理组织学观察以肝细胞脂滴染色作为观察指标，并根据病理改变程度“0”、“1”、“2”、“3”、“4”量化，进行肝损伤程度的评价。2.3.4 肝细胞脂肪染色共分为五级：肝细胞内脂滴散在、稀少，计 0 分；含脂滴的肝细胞不超过 1/4，计1 分；含脂滴的肝细胞不超过1/2，计2 分；含脂滴的肝细胞不超过 3/4，计 3 分；肝组织几乎被脂滴代替，计 4 分。2.4 试验数据统计：试验数据统计采用 SPSS 11.0 for windows 软件包处理。对照组与各剂量组的数据经方差齐性检验，方差齐，进行方差分析，如 P 值小于0.05，则用 Dunnett 法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如 P 值小于 0.05，则用 Dunnett，s T3 法进行两两比较。阴性对照组与模型对照组数据则采用 T 检验。3 试验结果3.1 某肝明乐胶囊对大鼠体重、肝重、肝体比的影响由表 1 可见，某肝明乐胶囊各剂量组大鼠的初始体重与阴性对照组及模型对照组比较，方差齐（P 0.05），方差分析结果（P0.05），说明各组动物初始体重是均衡的。阴性对照组及模型对照组比较，肝重和肝体比有非常显著性（P0.01），与模型对照组比较，无显著性差异（P0.05）。表 1 某肝明乐胶囊对大鼠体重、肝重、肝体比的影响（S）组别剂量组（mg/kgBW）动物数（只）初始体重（g）中期体重（g）终重（g）禁食后体重（g）肝重（g）肝体比%阴性对照010 176.84.1213.87.6236.012.7 222.111.15.760.46*2.590.10*模型对照010 175.68.5212.216.0238.118.1 224.818.7 6.940.723.090.18低剂量 200 10 176.612.5 215.723.2 236.726.2 223.923.2 6.800.843.040.22中剂量 600 10 175.66.8207.910.4 228.012.1 214.712.8 6.520.333.040.19高剂量 120010 177.611.0 216.012.8 237.713.4 223.612.87.060.593.160.17注：*示与模型对照组比较 P0.01。3.2 某肝明乐胶囊对大鼠肝匀浆中 MDA、GSH、TG 含量的影响由表 2 可见，模型对照组大鼠肝匀浆中的 MDA、GSH、TG 含量与阴性对照组比较，经t 检验，MDA、TG 含量显著升高（P0.01，P0.05），GSH 含量显著降低（P0.01），表明该模型是成功的，实验系统可靠。三个剂量组的 MDA、GSH、TG 含量与模型对照组比较，可见中、高剂量组的 TG 显著降低（P0.05，P0.05）、低、中量组的 GSH 升高有显著性差异（P0.05，P0.05），三个剂量组的 MDA 与模型对照组之间无显著性差异（P0.05）。表 2 某肝明乐胶囊对大鼠肝匀浆中 MDA、GSH、TG 含量的影响（S）组别剂量组（mg/kg BW）动物数（只）MDA（nmol/mg）GSH（mg/g）TG（mmol/L）阴性对照010 1.420.2714.401.84 1.370.12模型对照010 2.680.7311.622.21 1.510.15低剂量 200 10 2.580.7314.3012.52*1.510.11中剂量 600 10 2.710.8514.0711.91*1.350.13*高剂量 120010 2.580.6412.581.31 1.350.13*注：表示与阴性对照组比较 P0.05，表示与阴性对照组比较 P0.01；*表示与模型对照组比较 P0.05。3.3 肝脏组织病理学检查结果结果见表 3、表 4，模型对照组大鼠的肝细胞脂肪染色评分与阴性对照组比较，升高有极显著性差异（P0.01），表明该模型是成功的，实验系统可靠。三个剂量组大鼠的肝细胞脂肪染色评分与模型对照组比较，中、高剂量组降低有显著性差异（P0.05，P0.01）。表 3 某肝明乐胶囊对大鼠肝脏病理变化观察记录肝细胞脂滴评分动物编号阴性对照模型对照低剂量组中剂量组高剂量组12345678910累计评分0.000.430.000.000.000.000.000.000.000.000.432.432.572.003.142.572.573.142.142.711.5724.841.713.142.002.433.141.573.001.711.861.7122.271.431.002.711.431.862.142.572.432.712.2920.571.711.862.711.571.572.001.292.001.141.4317.28表 4 某肝明乐胶囊对大鼠肝脏组织病理学检查结果（S）组别剂量组（ml/kgBW）动物数（只）脂肪染色评分（分）阴性对照010 0.0430.136模型对照010 2.4840.486低剂量 200 10 2.2270.643中剂量 600 10 2.0570.602高剂量 120010 1.7230.448*注：表示与阴性对照组比较 P0.05，*表示与模型对照组比较 P0.05。4 小结某肝明乐胶囊连续 30 天经口灌胃给予雌性 SD 大鼠后，可见动物生长发育正常。在酒精性肝损伤模型成立的基础上，中、高剂量组能显著降低大鼠肝匀浆中的甘油三酯含量（P0.05，P0.05）；低、中剂量组大鼠肝匀浆中的还原型谷胱甘肽含量升高有显著性差异（P0.05，P0.05）；而各剂量组大鼠肝匀浆中的过氧化脂质降解产物丙 二醛的含 量与模型对 照组之 间无显著性 差异（P0.05）；高剂量组的脂肪染色评分降低有显著性差异（P0.05），组织病理学检查结果为阳性。依据保健食品检验与评价技术规范（2003 年版）中之规定，某肝明乐胶囊对雌性 SD 大鼠具有酒精性肝损伤辅助保护功能。参考文献：1朱英花.永宁牌肝保胶囊对化学性肝损伤小鼠的保护作用研究 J.右江医学，2013（10）33-35，163.2张书芳，李永利，张焱，武民力.太白乐胶囊对小鼠化学性肝损伤辅助保护作用研究J.现代预防医学，2013（10）23-25.