美登木种子质量检验方法研究.docx

摘要研究目的：对美登木的种子质量检验进行研究，制定出美登木种子质量检验的标准，最终，来推动美登木种子种苗繁育技术的应用。研究方法:扦样，真实性鉴定，发芽率测定，生活力测定等。研究结果：确定美登木种子的质量检验方法。研究结论：制定的美登木种子检验方法适用于美登木种子质量检验。关键词：美登木;种子;质量检验AbstractAim: Study on seed quality inspection technology of maytenus ,to provide basis for the establishment of seed quality standard of maytenus.Finally,promote the application of maytenus seed and seedling breeding technology.Method:To inspect the seed quality of maytenus according to the method of crop seed inspection regulation. The content includes cutting sample,purity analysis ,identification of seed authenticity,determination of 1000-grain weight,moisture content,Determination of germination rate,viability.result:The indoor standard test method of maytenus was determined.Conclusion：The quality inspection method of maytenus seed is suitable for the quality inspection of maytenus seed.Keywords：Maytenus;Seed;Quality testing目录1 引言12 试验材料13 试验方法3.1 扦样23.1.1 种子批23.1.2 扦取送验样品和试验样品23.2 净度分析23.3 种子真实性鉴定23.4 千粒重测定23.5 含水量测定23.6 发芽率测定33.6.1 成熟度处理33.6.2 温度处理33.6.3 基质处理33.6.4 湿度处理33.6.5 发芽首次和末次计数时间33.6.6 结果统计实验结果以百分率表示43.7 生活力测定43.7.1 红四氮唑溶液配制43.7.2 种子预处理43.7.3 染色条件的确定43.7.4 美登木种子有无生活力标准建立44 结果与分析4.1 扦样 54.2 净度分析54.3 真实性鉴定54.4 千粒重测定54.5 含水量测定64.6 发芽率测定4.6.1 成熟度处理试验结果64.6.2 温度处理实验结果74.6.3 基质处理实验结果94.6.4 湿度处理实验结果104.7 生活力测定4.7.1 染色条件的确定124.7.2 有无生活力鉴定标准的确定145 结论156 讨论167 参考文献17III1 引言1.1 研究背景目前，我国对很多中药材都没有开展研究，而对中药材种子质量检验技术的研究就更是少之又少。现在随着中医医学的推广，很多野生中药材已经满足不了市场的需求，出现供不应求，价格猛涨的态势，这也就促发了中药材种植产业的发展。但是由于研究的落后导致中药材质量得不到保障，市场上中药材的质量参差不齐，而且中药材质量也没有一个鉴定的标准。这些中药材发展遇到的困难激发了本研究对美登木种子质量的检验方法进行研究。种子质量稳定很大程度上可以让中药材质量的稳定得到保障，制定出种子质量检验的标准，这样能保证中药材质量从源头上的稳定可控。美登木属（Maytenus）植物隶属于卫矛科（Celastraceae），为多年生常绿灌木，全世界约有 300 种，产于热带及亚热带，极少进入暖温带，以南美洲分布最多1。美登木以干燥叶、茎入药，具有清火解毒，消肿止痛等功效。民间广泛用作抗肿瘤、抗败血症、抗炎、催涎的药物，也用于治疗哮喘、消化道疾病、风湿、类风湿等25。美登木在西药上也经常用来生产美登木胶襄和复方美登木片等药物。近年来我国对美登木的研究主要集中于化学成分的分析与测定、药理作用、栽培繁育6方面。通过广泛查阅资料发现，关于美登木种子质量检验方法的研究还未见报道，所以本研究对美登木这种中药材的种子进行研究，主要研究其种子的质量检验方法，为美登木种子质量标准的建立提供依据。2 试验材料试验所用美登木种子采集于西双版纳傣族自治州景洪市南药园园区内。3 试验方法3.1扦样3.1.1种子批根据美登木种子的特性、市场流通情况和单次可能的交易量，及净度分析试验样品不少于2500粒种子，而送检样品的质量应超过净度分析量的10倍量的原则，来确定美登木种子批的最大质量和送验样品的最小质量。 3.1.2扦取送验样品和试验样品扦取送验样品和试验样品的具体操作按照农作物种子质量规程扦样(GB/T 3543.2-1995)执行7。样品扦取后，用干净纸袋包装，在室内阴凉干燥处保存。3.2净度分析 美登木种子净度分析的具体操作按照农作物种子质量检验规程净度分析(GB/T3543.3)执行7。将送验样品平均分成四份，由4.1试验结果得知净度分析试样的最小重量为150g，所以从这分好的四份送验样品中扦取试验样品150g，并将其分成净种子、瘪种子和杂质3种成分，测定各种成分的重量，计算出其占总试验数的百分比。重复4次在送验样品中扦取试验样品进行测量。3.3种子真实性鉴定 美登木种子真实性鉴定采用形态鉴定法来进行，具体操作为：从试验样品种子中随机数取4份每份100粒的美登木种子，逐粒对种子的大小、形状、种脐颜色及位置和种子颜色进行观察和测量，做好测量记录。3.4千粒重测定美登木种子千粒重测定采用百粒法来进行。用百粒法测定美登木种子千粒重的具体操作为：随机从净种子中数取100粒，重复8次，分别称重并做好记录，分别计算出每次试验结果的平均值、标准差和变异系数。最终测得的试验数据的变异系数不超过5%，才能证明试验数据有效。3.5含水量测定 美登木种子含水量测定采用烘干减重法来进行。具体按GB/T 3543.6-1995农作物种子检验规程水分测定规定执行7。首先打开烘箱，设置131摄氏度恒温，待烘箱温度达到所设置温度时，将用于盛装样品的小铝盒放入烘箱中预先烘干1h(131±2)高恒温条件下)并置于硅胶干燥器中冷却备用。然后将美登木种子放在小铝盒中，在(131±2)高恒温条件下烘干三小时后取出种子待其冷却，待冷却到人体可以接受的温度的时候对其进行称重，记下重量。接着再放入(131±2)高恒温烘箱内烘干1h，冷却后称重，一直这样重复，直至后次称重和前次称重不超过0.02g为止。记下最后一次重量作为烘干后重量进行水分含量计算。每个处理进行3次重复试验，每次重复试验样品重量维持在(5.004g±0.001)g。测定的含水量数据中，最大和最小值不能超过0.4%。3.6发芽率测定3.6.1成熟度处理取阴干完全成熟、晒干完全成熟、阴干七成熟三种成熟度的美登木种子，在12CM培养皿中铺2层充分吸湿的滤纸为发芽床。将铺好湿滤纸的培养皿放到25恒温培养箱中培养，每天注意观察种子的发芽情况以及滤纸的干湿情况，对发芽种子做好记录，对滤纸浇水保湿。特别注意湿度不能过大，让滤纸刚好湿润而滤纸上没有积水为最好。因为滤纸基质水分蒸发很快，所以培养皿要盖上盖子。以下所有发芽试验的每个处理中的每组都重复做3次，每次重复30粒种子。（所有试验步骤均在成熟度试验结束后选取发芽率最好的种子成熟度类型进行。）3.6.2 温度处理在12CM培养皿中铺2层充分吸湿的滤纸为发芽床，设置10、15、20、25、30五个温度梯度，每个温度梯度放到相应温度的培养箱中恒温培养，每天注意观察种子发芽情况并适当浇水保湿。3.6.3基质处理采用河沙、红壤土、草炭土、蛭石、滤纸作为基质，将基质和种子放入12CM培养皿中25恒温培养。观察不同基质对美登木种子发芽的影响，每天注意观察发芽情况并适当浇水保湿。3.6.4湿度处理采用烘干水分的河沙作为试验基质，按百分比添加水来控制湿度梯度，设置5%、10%、15%、20%、25%五个湿度梯度。将配好湿度的基质放入12CM培养皿中25恒温培养，注意培养皿要盖上盖子以防水分蒸发太快。观察不同湿度对美登木种子发芽率的影响。记录好每个培养皿的重量，每天对培养皿称重，添加散失的水分保持恒重以维持湿度。3.6.5发芽首次和末次计数时间每个发芽试验处理的首次和末次计数时间要根据最适发芽条件下的发芽表现来确定。当最适发芽条件下的种子已经发芽结束，剩下没有发芽的种子都为坏种子的情况下，发芽率不好的处理不管发芽情况如何都停止试验并记录最终数据。以胚根突出种皮长度超过种子直径时的天数作为初次计数时间，以种子发芽数达到最高，以后再无发芽种子出现时的天数作为末次计数时间。3.6.6结果统计试验结果以百分率表示美登木种子发芽率测定试验中测定指标为：发芽率=试验结束时发芽的种子数/供试种子数×100%。发芽势=发芽高峰期发芽的种子数/供试种子数×100%。3.7生活力测定3.7.1红四氮唑溶液配制红四氮唑溶液的配制需要先配制好缓冲溶液，再用缓冲溶液来配制所需的TTC溶液浓度梯度。缓冲溶液的配制：按KH2PO4 9.078g/L、Na2HPO4 9.472g/L配制磷酸盐溶液，两种溶液按38.9：61.1配制成PH为6.5-7.5的KH2PO4和Na2HPO4的缓冲液。梯度四唑溶液的配制：用上述缓冲溶液将TTC分别配成0.1%、0.5%、1.0%，3种质量分数的梯度溶液，阴凉处避光保存。3.7.2种子预处理将美登木种子用手术刀沿胚纵切，取胚保留较好的那半粒备用。 3.7.3染色条件的确定美登木种子TTC染色试验，将每次重复的种子放入9mm培养皿中，倒上配好的相应浓度的TTC溶液直至溶液刚好淹没种子。设置3因素3水平的正交试验。染色时间设为1h、2h、4h；TTC溶液浓度梯度设为0.1%、0.5%、1.0%；染色温度梯度设为30、35、40。染色试验放置在恒温培养箱中进行，培养箱中放置温度计以时刻监视保持温度稳定。每组处理做4次重复，每次重复30粒种子。美登木种子染色完成后，用清水将培养皿中的种子清洗干净，一直清洗到染色液没有颜色为止。3.7.4美登木种子有无生活力标准建立美登木种子有无生活力标准的建立要参照种子的发芽试验结果，把发芽试验结果与TTC染色结果综合分析才能建立美登木种子有无生活力的鉴定标准。4 结果与分析4.1扦样 具体操作参照农作物种子检验规程(GB/T 3543.2-1995)的标准执行。美登木种子批的最大质量为2000kg，而实验中所需的净度分析试样是按至少含有2500粒种子推算而来，根据4.4千粒重测定结果，美登木种子千粒重为43.6g，2500粒种子重量为109g，所以可以确定美登木种子净度分析试样的最小重量为150g，根据送验样品为净度分析试样的10倍量原则，所以送验样品最少为1500g。4.2净度分析 净度分析试验中将美登木种子试样分成净种子、瘪种子和杂质三种成分，由表1可以看出试样中美登木种子占比都大于百分之九十，其平均净度为91.85%。瘪种子和其他杂质的含量比较少，其中瘪种子的含量为5%左右，其他杂质含量为1.5%左右。所以种子的净度比较好。表中4组试样的增失值都处于1%-2%之间，均小于5%，说明此净度分析结果可靠，用此方法分析美登木种子净度可行。表1 美登木种子净度分析结果组数净种子瘪种子杂质平均净度重量 百分率重量 百分率重量 百分率增失值1234138.500g 92.3%137.450g 91.6%137.720g 91.8%137.600g 91.7%7.650g 5.1%7.500g 5.0% 7.450g 4.97% 7.360g 4.91%2.220g 1.48%2.550g 1.70%2.310g 1.54%2.500g 1.67%1.09%1.67%1.68%1.69%91.85%4.3真实性鉴定 通过对用于真实性鉴定的美登木种子试样进行逐粒观察并记录，最终得出：美登木成熟种子呈暗红色，种子整体形状呈长卵球形，种皮表面光滑，种子长度在5.187.08mm范围内，种子的一端有黄白色种脐。（如附件图1）。4.4千粒重测定在美登木种子重量测定试验中，如表2所示，采用百粒法测定的美登木种子重量平均为4.36g，标准差为0.144，变异系数为3.30%。其变异系数小于5%，因此说明用百粒法测得的美登木种子千粒重数值符合相关要求，测定值有效。最终可以得出，美登木种子的千粒重为43.6g。表2 美登木种子千粒重测定试验结果次数重量平均值标准差变异系数123456784.220g4.185g4.617g4.410g4.439g4.355g4.246g4.446g4.36g0.1443.30%4.5含水量测定美登木种子的含水量测定结果如表3所示，测定方法采用高恒温烘干法。由表中数值可知：美登木种子含水量测定过程中前3小时为快速失水期，第3-4小时为缓慢失水期，且失水趋于稳定。表中烘干3小时和烘干4小时的重量差都为0.006g，而只要后次测量结果和前次测量不大于0.02g就可以结束试验得出结论。所以计算得出美登木种子的平均含水量为6.03%。三次重复实验中含水量最高和最低组的差距为0.09%，小于0.4%，所以测定结果符合种子含水量测定结果的标准。因此可以得出美登木种子含水量的测定方法为：使用高恒温烘干法烘干4小时后测定美登木种子含水量。表3 美登木种子含水量测定试验结果组数烘干前重烘3h重烘4h重烘4h和烘3h重量差含水量平均含水量1235.004g5.004g5.005g4.711g4.708g4.707g4.705g4.702g4.701g0.006g0.006g0.006g5.98%6.04%6.07%6.03%4.6发芽率测定4.6.1 成熟度处理由表6可知，美登木种子发芽率测定成熟度处理试验数据的卡方值为91.882，显著性为0.000，小于0.05的显著性水平，因此说明不同成熟度处理导致的发芽个数之间具有显著差异。由表4可以看出，阴干完全成熟的美登木种子发芽率都在百分之六十以上，发芽效果比较好，平均发芽率为66.67%。阴干完全成熟的美登木种子发芽率在百分之三十左右，发芽效果一般甚至有点偏低，平均发芽率为30%。而晒干完全成熟的美登木种子，一个发芽的都没有。因此可以看出，整体种子发芽情况为阴干完全成熟>阴干七成熟>晒干完全成熟。所以，本研究的其他处理试验均采用阴干完全成熟的美登木种子。表4 美登木种子成熟度发芽试验结果组数阴干完全成熟阴干七成熟晒干完全成熟发芽数 发芽率 平均发率发芽数 发芽率 平均发率发芽数 发芽率 平均发率12319212063.3%70.0%66.7%66.67% 981030.0%26.7%33.3%30%0000%0%0%0%表5 类别 * 发芽与否 交叉表发芽与否总计不发芽发芽类别阴干完全成熟计数306090期望计数61.029.090.0阴干七成熟计数632790期望计数61.029.090.0晒干完全成熟计数90090期望计数61.029.090.0总计计数18387270期望计数183.087.0270.0表6 卡方检验值自由度渐进显著性（双侧）皮尔逊卡方91.88220.000似然比114.88020.000线性关联91.23810.000有效个案数2704.6.2 温度处理由表9可知，美登木种子发芽率测定的温度处理试验数据的卡方值为97.912，显著性为0.000，小于0.05的显著性水平，说明不同温度之间的发芽情况是有显著差异的。结合表7，可以看出，20条件下美登木种子的平均发芽率为27.8%，平均发芽势为20%，发芽率偏低。25发芽率在百分之四十到百分之五十之间，平均为44.4%，发芽势在30%左右，平均发芽势为28.87%，发芽效果相对较好。30发芽率在10%左右，平均发芽率为10%,平均发芽势为8.87%，发芽效果不理想。而10和15，实际发芽个数为0。因此认为发芽的最好温度是25，其次是20，剩下的几个温度发芽效果都不太理想。表7 美登木种子发芽试验温度处理结果组数1015202530发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势123平均值0000%0% 0%0000%0%0%1031233.3%10%40%27.8%23.3%10%26.7%20%13151243.3%50%40%44.4%23.3%40%23.3%28.87%35110%16.7%3.3%10%10%13.3%3.3%8.87%表8 温度 * 发芽与否 交叉表发芽与否总计不发芽发芽温度10计数90090期望计数75.214.890.015计数90090期望计数75.214.890.020计数652590期望计数75.214.890.025计数504090期望计数75.214.890.030计数81990期望计数75.214.890.0总计计数37674450期望计数376.074.0450.0表9 卡方检验值自由度渐进显著性（双侧）皮尔逊卡方97.91240.000似然比113.75140.000线性关联27.14310.000有效个案数4504.6.3 基质处理美登木种子基质处理发芽试验中，对比不同处理方式与发芽率的影响，由表12可以看到，卡方值为108.588，显著性为0.000，小于0.05的显著性水平，说明不同处理方式对美登木种子发芽率有显著影响。结合表10，可以看出，发芽情况最好的处理为滤纸和草炭土，其中滤纸基质的平均发芽率为52.2%，平均发芽势为37.7%。草炭土基质的平均发芽率为55.6%，平均发芽势为40%。而在以河沙为基质的情况下，美登木种子整体处于不发芽状态。因此可以得出结论，最适合发芽的基质为草炭土，发芽率最低的基质是河沙。表10 美登木种子基质处理发芽试验数据组数滤纸草炭土红壤土蛭石河沙发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势123平均发芽率18171260%56.7%40%52.2%43.3%43.3%26.7%37.7%21131670%43.3%53.3%55.6%60%26.7%33.3%40%71023.3%3.3%0%8.9%10%3.3%0%1311243.3%3.3%40%28.9%26.7%3.3%23.3%0000%0%表11 处理方式 * 发芽与否 交叉表发芽与否总计不发芽发芽处理方式滤纸计数434790期望计数63.826.290.0草炭土计数405090期望计数63.826.290.0红壤土计数82890期望计数63.826.290.0蛭石计数642690期望计数63.826.290.0河沙计数90090期望计数63.826.290.0总计计数319131450期望计数319.0131.0450.0表12 卡方检验值自由度渐进显著性（双侧）皮尔逊卡方108.58840.000似然比132.38740.000线性关联74.80310.000有效个案数4504.6.4 湿度处理美登木种子发芽试验湿度处理结果由表15可知，不同湿度之间的卡方值为83.827，显著性为0.000，小于0.05的显著性水平，说明不同湿度情况下的发芽率有显著差异。结合表13可以看出，发芽率最高且最适合发芽的湿度为20%，其平均发芽率为50%，平均发芽势为37.8%，其发芽势均为五组不同湿度处理中的最高值。在25处理下，时候没有成功发芽的种子，发芽率为0%。10、15、20这三种温度处理的发芽率和发芽势都相对较低。表13 美登木种子湿度处理发芽实验数据组数5%10%15%20%25%发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势发芽数发芽率发芽势123平均发芽率1323.3%10%6.7%6.7%3.3%6.7%3.3%4.4%451013.3%16.7%33.3%21.1%10%13.3%16.7%13.3%914530%46.7%16.7%31.1%20%36.7%13.3%23.3%15171350%56.7%43.3%50%40%43.3%30%37.8%0000%0%0%0%表14 不同湿度 * 发芽与否 交叉表发芽与否总计不发芽发芽不同湿度5%计数84690期望计数70.419.690.010%计数711990期望计数70.419.690.015%计数622890期望计数70.419.690.020%计数454590期望计数70.419.690.025%计数90090期望计数70.419.690.0总计计数35298450期望计数352.098.0450.0表15 卡方检验值自由度渐进显著性（双侧）皮尔逊卡方83.82740.000似然比98.44540.000线性关联1.27610.259有效个案数4504.7生活力测定4.7.1染色条件的确定 表16 美登木种子生活力测定染色结果处理数时间浓度温度组数胚染色结果1234567891h2h4h1h2h4h1h2h4h0.1%1%0.5%0.5%0.1%1%1%0.5%0.1%3030303535354040401，2，3，41，2，3，41，2，3，41，2，3，41，2，3，41，2，3，41，2，3，41，2，3，41，2，3，40，0，0，00，0，0，020，16，19，180，0，0，00，0，0，06，9，12，100，0，0，03，5，4，68，9，7，12表17 误差方差的莱文等同性检验莱文统计自由度 1自由度 2显著性染色结果基于平均值4.062827.003表18 主体间效应检验源III 类平方和自由度均方F显著性修正模型1332.389a8166.54996.7060.000截距747.1111747.111433.8060.000时间1056.2222528.111306.6450.000TTC浓度165.056282.52847.9190.000温度54.056227.02815.6940.000时间 * TTC浓度 * 温度57.056228.52816.5650.000误差46.500271.722总计2126.00036修正后总计1378.88935a. R 方 =0.966（调整后 R 方 = 0.956）由方差分析结果可知，模型的调整R方为0.956，说明模型交过较好，并且时间、浓度、温度，还有三者之间的交互作用的影响都是很显著的，可以显著影响最后的染色结果。表19 多重比较时间(I) 时间(J) 时间平均值差值 (I-J)显著性12-1.500.0094-12.170.000211.500.0094-10.670.0004112.170.000210.670.000表20 多重比较浓度(I) TTC浓度(J) TTC浓度平均值差值 (I-J)显著性0.10.5-4.580.0001.0-0.080.8780.50.14.580.0001.04.500.0001.00.10.080.8780.5-4.500.000表21 多重比较温度(I) 温度(J) 温度平均值差值 (I-J)显著性30353.000.000401.580.0063530-3.000.00040-1.420.0134030-1.580.006351.420.013表19关于处理时间的多重比较，可以看出，不同处理时间的平均值是有显著差异的。时间为4小时的平均值得分最高，其次是2小时，最后是1小时。表20关于浓度的多重比较，可以看出，浓度为0.1%和1.0%之间是没有显著性差异的。浓度为0.5%要显著高于0.1%和1.0%的两个组。表21关于温度的多重比较，由于显著性都小于0.05，因此可以看出，不同温度之间的平均差值是具有显著性的。染色结果最多的为30度，其次是40度，35度的时候发芽较差。根据以上分析结果可以得出：美登木种子生活力测定的最适条件为0.5%TTC溶液浓度在30条件下染色4h。4.7.2有无生活力鉴定标准的确定 根据TTC染色法的原理及染色结果，结合美登木种子各处理的实际发芽情况，有活力的美登木种子胚被TTC染为浅红色，染色均匀，种子切面少部分着色，着色比胚着色浅，染色不均匀；无生活力的美登木种子胚完全不着色，种子切面较少部分着色（如附件图2-5）。5 结论目前, 我国在中药材研究方面比较落后,绝大部分中药材都还没有开展研究。中药材种子的研究就更少了，这样就导致中药材种子的质量得不到保障，种子质量的好坏也没有判断依据，中药材产业得不到很好的发展。中药材种子能很大程度上保障中药材的质量，所以近年来人们对中药材种子质量的研究越来越多，如益母草8、川牛膝9、甘草10、丹参11、大黄12等种子质量标准研究已有报道。本研究通过一系列的种子质量检验方法来研究美登木种子，根据美登木种子质量检验的各试验结果初步制定了一套如表22所示的美登木种子质量检验的方法，为制定美登木种子质量标准奠定了基础。表 22美登木种子质量检验方法检测项目方法扦样净度分析 种子真实性鉴定千粒重测定含水量测定发芽率测定生活力测定送验样品不少于1500g，净度分析不少于150g取样品150g逐粒分析,重复4次外观形态鉴定百粒法高恒温烘干法，烘干4h采用阴干完全成熟的种子，以草炭土为基质，25恒温培养，湿度保持在20%0.5%TTC溶液浓度在30条件下染色4h6 讨论成熟度处理中，晒干完全成熟的种子发芽率为0，说明美登木种子不能晒干，只能阴干保存。温度处理结果显示25恒温处理的种子发芽率比其他温度处理的要明显高很多，这个结果与高玉尧等13研究的橡胶草和邓东周等14研究的金露梅的研究结果相同，它们的最适发芽温度都为25。关于25这个温度是否更有利于植物种子的萌发，对植物种子的发芽率共性是否有显著提高的问题，还需要更多的试验来证实。而美登木种子的最适发芽温度为25，这就要提醒各位做美登木种苗繁育的人员在种苗繁育过程中一定要控制住温度，否则发芽效果不理想，而美登木种植环境也要尽量选择温度比较高的热带地区。在10和15低温环境下培养的种子发芽率为0，柯芳等15研究的浆果笕种子这两个温度处理的试验结果也为0，这可能是由于低温会抑制美登木种子的萌发。基质处理中草炭土的发芽率最高，而河沙的发芽率最低。是因为草炭土保湿性和透气性比较好，而在培养皿中的河沙因为数量较少所以容易板结，从而导致透气性较差。湿度处理中，因为采用的基质是河沙，河沙的质量相对较重，而湿度又是通过基质和水以百分比的形式来控制，所以25%的湿度中水分含量较高，导致发芽率低。最后值得注意的是在美登木种子染色试验中，由于胚比较容易松动，刚好沿胚纵切的美登木种子在染色过程中胚较容易脱落，后面染色结束计数时会比较麻烦。而美登木种子的胚比较大，所以在切种子时要尽量切偏一点，然后取大的那半种子进行染色。参考文献1 中国植物志编委会中国植物志（第四十五卷）M北京：科学出版社，19992 GHAZANFAR S A Handbook of Arabian medicinal plantsMBoca Raton，CRC Press，199483 3 FLORES A F，PRANCE G T，KALLUNTI J A Advances in economic botany，ethnobotany in the new tropics M The New York Botanical Garden New York，1984，1：18 4 GONZALEZ J G， DELLE M G， DELLE M F， et alChuchuhuashaa drug used in folk medicine in the Amazonian and Andean areas， a chemical study of Maytenus laevisJ J Ethnoph，1982，5（1）：7375 5 SCHULTES R E， ROBERT E R The healing forest， medicinal and toxic plants of the northwest AmazoniaMPortland，OR， Dioscorides Press，19946 魏建和，陈士林，程惠珍，等中药材种子种苗标准化工程J世界科学技术中医药现代化，2005，7(6):104-1087 中华人民共和国国家标准农作物种子检验规程(GB/T3543-1995S)北京：中国标准出版社1995.8 胡璇，李卫东，李欧，等益母草种子质量分级标准研究种子，2011,3