第三章 血液分析仪检验.doc

第三章 血液分析仪检验通过本章节学习，你将能回答关于“血液分析仪检验”的下列问题： 1自动血液分析仪在哪一年代问世？在临床检测中有何强劲优势？2现代血液分析仪具有检测哪几类血细胞的功能？3简述三分群血液分析仪细胞检测的主要原理？4射频电导法可检测细胞的哪些特征？5什么是流式细胞术Mie光散射理论？6简述流式细胞术检测细胞的主要原理？7简述激光散射法系统的基本组成？8血液分析仪应用分光光度法何种原理、检测何种物质？9血液分析仪应用哪两大类溶血剂检测血红蛋白？各有何特点？10血液分析仪检测白细胞应用哪些原理？试列举尽可能多的检测参数？11血液分析仪检测红细胞应用哪些原理？试列举尽可能多的检测参数？12血液分析仪检测血小板应用哪些原理？试列举尽可能多的检测参数？13什么是VCS？检测血细胞各具有何特点？14血液分析仪检测白细胞分类、网织红细胞、有核红细胞、网织血小板分别用哪些特殊细胞染色法？15什么是MAPSS？检测血细胞具有何特点？16什么是DHSS？检测血细胞具有何特点？17血液分析仪检测红细胞计数、血小板计数分别应用哪些原理？18血液分析仪有哪几类结果显示形式？19简述三分群血液分析仪白细胞、红细胞和血小板直方图的表达特点？20哪些因素可影响正常细胞直方图？21简述五分类血液分析仪散点图上任意一点的表达特点？22红细胞体积血红蛋白九分区散点图有何特点？23什么是血液分析仪的报警概念？常见哪些报警方式和内容？24标本中哪些因素可引起血液分析仪检测参数报警（分检测参数举例）？25国际上有哪些重要文件涉及血液分析仪质量保证、仪器校准和性能评价？26血液分析仪质量保证包括哪些环节？27血液分析仪仪器校准有哪些要点？28血液分析仪性能评价有哪些要点和具体评价项目？29血液分析仪白细胞分类计数性能评价对标本来源有何要求？302005年，国际血液学组织发布的血液分析仪显微镜复检规则有几条？31用什么原则和指标评价血液分析仪检测参数的临床应用价值？32简述红细胞参数RDW、IRF、CHr临床意义？33简述血小板参数MPV、IPF临床意义？34简述白细胞参数MID、IG、HPC、MPXI临床意义？ 自动血液分析仪（automated hematology analyzer，AHA），早年称血细胞计数仪（blood cell counter），已是目前国内外临床检验最常用的筛检仪器之一。传统手工法显微镜血细胞计数或分类方法，不仅速度慢，而且因操作过程的随机误差、实验器材的系统误差和检测方法的固有误差，检测的精密度不高。在应对检查大量临床标本时，显微镜细胞计数法难以满足临床及时诊断疾病的需求。20世纪50年代初，美国W.H.Coulter申请了粒子计数法的技术专利，在世界上研发了第1台电子血细胞计数仪，并应用于临床，开创了血细胞计数的新纪元。从此，随着基础医学和高科技，特别是计算机软件技术的发展，其检测原理逐渐完善，检测技术不断创新，检测参数显著增多。“精度高、速度快、易操作、功能强”是血液分析仪的强劲优势，还可与血涂片制备和染色仪进行组合，由后者完成血液分析仪检测后的形态学复检。现代血液分析仪的功能还扩展到检测体液红细胞、白细胞计数和分类。当前，应用多项检测原理的血液分析仪问世，为临床不同层次需求提供了有效的血细胞检测参数，对疾病诊断与治疗有着重要的临床意义。现代血液分析仪的功能有：全血细胞计数功能（红细胞、白细胞和血小板计数及其相关的计算参数）。白细胞分类功能（3分群或5分类白细胞百分率和绝对值）。血细胞计数和分类功能的扩展功能，包括：有核红细胞计数、网织红细胞计数及其相关参数检测；未成熟粒细胞、幼稚粒细胞、造血干细胞计数；未成熟血小板比率；淋巴细胞亚型计数；细胞免疫表型检测等。第一节 检测原理现代血液分析仪主要综合应用了电学和光学2大原理，用以测定血液有形成分（细胞）和无形成分（血红蛋白）。电学检测原理包括电阻抗法和射频电导法；光学检测原理包括激光散射法和分光光度法。激光散射法检测的对象有2类：染色的和非染色的细胞核、颗粒等成分。一、电阻抗法（一）血细胞计数原理 悬浮在电解质溶液中的血细胞相对于电解质溶液为非导电颗粒，其电阻比电解质溶液大。利用两者导电性能的差异，当体积大小不同的血细胞（或类似颗粒）通过计数小孔时，可引起小孔内、外电流或电压的变化，形成与血细胞数量相当、体积大小相应的脉冲电压，从而间接区分出血细胞群，并分别进行计数，这就是电阻抗原理（principle of electrical impedance），即库尔特原理（Coulter principle）（图3-1）。 图3-1 电阻抗细胞计数原理电阻抗法可准确测量出细胞（或类似颗粒）的大小，是三分群血液分析仪的主要应用原理。电阻抗法还与光学检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。（二）三分群血液分析仪基本组成 三分群血液分析仪基本组成见表3-1。表3-1 三分群血液分析仪基本组成组成功能信号发生器各种微粒（血细胞、细胞碎片、杂质等颗粒）通过检测小孔产生电阻抗脉冲信号的检测源放大器将血细胞微弱脉冲信号放大以触发电路系统阈值调节器调节能区分不同群细胞合适的信号电平甄别器去除非参考电平的各种假信号以提高计数的准确性整形器将不一致的脉冲波形信号调整为标准的波形后触发计数电路系统计数系统将整形后的血细胞脉冲信号显示为不同类群的细胞数二、射频电导法射频（radio frequency，RF）指射频电流，是每秒变化大于10 000次的高频交流电磁波。电导性（electrical conductivity）即电的传送性能。高频电流能通过细胞壁。用高频电磁探针渗入细胞膜脂质层可测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质（如比例）、颗粒成分（如大小和密度）等特征性信息（图3-2）。电导性特别有助于鉴别体积虽相同、但内部结构性质不同的细胞（或相似体积的颗粒）；如淋巴细胞和嗜碱性粒细胞两者直径虽均为912m，但在高频电流检测时，因两类细胞不同核质比例而出现不同的检测信号。射频电导法结合其他检测原理一起应用于血液分析仪中。 图3-2射频电流检测原理三、激光散射法（一）基本检测原理 激光散射法应用了流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测原理。1流式细胞术光散射理论 目前，细胞分析应用Mie同质性球体光散射理论（Mie theory of light scatter for homogenenous spheres）。即：当光散射符合“2/D10/”（，入射光波长；D，球形物体直径）时，则测定光照射在颗粒上所形成的光散射强度的公式是：S（，）其中，S：散射光强度；：使用波长；：折射率；：容积；：检测角度；：形状因子。2流式细胞术检测原理 将经试剂稀释、染色、球形化的细胞（或其他颗粒）悬液注入鞘液流中央，单个细胞随悬液和鞘液流两股液流整齐排列，以恒定流速定向通过石英毛细管（图3-3）。当细胞（或其他颗粒）通过激光束被照射时，细胞（或其他颗粒）因本身的各种特性（如体积大小、染色程度、细胞成分浓度或细胞核密度等），可阻挡或改变激光束的方向，产生与细胞（或其他颗粒）特征相应的各种角度的散射光。置放在石英毛细管周围不同角度的信号检测器（光电倍增管）接受到特征各异的散射光。来自低角度散射光（或称前向散射光）的信息，反映细胞（或其他颗粒）的数量和表面体积大小；来自高角度散射光（或称侧向散射光）的信息，反映细胞（或其他颗粒）的内部颗粒、细胞核等复杂性。如细胞（或其他颗粒）用荧光染料染色，则染色后的细胞（或其他颗粒）被激光照射时，可产生不同波长的荧光散射，可用检测器接受散射荧光（图3-4）。将来自各种散射光的信息进行综合分析，即可准确区分正常类型的细胞（或其他颗粒）。激光散射法在区别体积相同而类型不同的细胞特征时，比电阻抗法血细胞分群更准确。故激光散射法已成为现代五分类血液分析仪的主要检测原理之一。 图3-3鞘流技术（二）激光散射法系统基本组成 激光散射法系统基本组成见表3-2，图3-4。表3-2 激光散射法系统基本组成名称组成及评价光源气体（氦-氖、氩气等）激光或固体（半导体）激光（单色光）；钨光源（多色光）鞘流维持颗粒于液流中央，顺序、单个、恒速向前流动，即流体动力学聚焦（hydrodynamic focusing）细胞悬液被检测细胞（颗粒）的悬液，由气压导入流动池光检测器接受来自各种角度的散射光或吸收光信号，并转换成相应特征的电信号 图3-4流式细胞术检测通道和光路系统四、分光光度法分光光度法检测原理遵循Lambert-Beer比色定律，即A= lg（I0/I）。其中，A 是吸光度（absorbance），或称光密度（optical density，D）；I0是单色入射光强度，I为透过光强度。被检物质吸收的单色光量与有色溶液（或悬液）的性质、厚度和浓度有关。当液体性质和厚度固定后，则吸光度与液体物质浓度成正比。分光光度法仪器的主要组成：单色光源、检测池和比色容器、光检测器。三分群或五分类血液分析仪均用分光光度法原理测定血红蛋白：含有溶血剂的稀释液使红细胞溶解并释放出血红蛋白，血红蛋白与溶血剂中某些成分结合，形成一种稳定的血红蛋白衍生物，在特定的光波范围（530550nm）下进行比色；吸光度的变化与血液血红蛋白浓度成正比。目前，用于血红蛋白测定的溶血剂有2大类。一类是含氰化物的溶血剂，所形成氰化血红蛋白（HiCN），最大吸收峰在540nm，显色稳定。另一类是不含氰化物的溶血剂，如月桂酰硫酸钠血红蛋白（sodium lauryl sulfate，SLS）法，当用HiCN法校准后，其检测的优点是既可达到与HiCN法相当的精密度和准确性，又可避免HiCN法试剂对操作人员的潜在危害和对环境的污染。五、血液分析仪检测参数原理（一）血液分析仪检测参数原理不同类型血液分析仪检验参数的原理不尽相同。高档仪器应用2种或2种以上检测原理，组合电学、光学、细胞化学等技术，在独特检测通道测定红细胞、血小板和白细胞系列的数量、亚类及相关参数（表3-3、表3-4）。 表3-3 血液分析仪临床常用检验参数基本原理和技术白细胞系列检测参数英文全称缩写单位检测原理和技术白细胞计数white blood cell count/concentrationWBC×109/L光散射（或加荧光染色）（五分类）；电阻抗法（三分群，五分类）中性粒细胞计数neutrophil count/absolute concentrationNEUT#×109/L光散射（或加荧光染色，或加细胞化学法）、射频法、鞘流电阻抗法、光吸收法（五分类）；电阻抗法（三分群）淋巴细胞计数lymphocyte count/absolute concentrationLYMPH#×109/L单核细胞计数monocyte count/absolute concentrationMONO#×109/L光散射（或加荧光染色，或加细胞化学法）、射频法、鞘流电阻抗法（五分类）、光吸收法（五分类）嗜酸性细胞计数eosinophil count/absolute concentrationEO#×109/L嗜碱性细胞计数basophil count/absolute concentrationBASO#×109/L中间细胞群计数middle cell countMID#×109/L电阻抗法（三分群）中间细胞群百分率middle cell percentMID%来自计算（三分群）粒细胞群计数granulocyte countGRAN#×109/L电阻抗法（三分群）粒细胞群百分率granulocytepercentGRAN%来自计算（三分群）淋巴细胞群计数lymphocyte countLYM#×109/L电阻抗法（三分群）淋巴细胞群百分率lymphocyte countLYM%来自计算（三分群）淋巴细胞百分率lymphocyte percentage of WBCsLYMPH%来自计算（五分类、三分群）单核细胞百分率monocyte percentage of WBCsMONO%来自计算（五分类）嗜酸粒细胞百分率eosinophil percentage of WBCsE0%来自计算（五分类）嗜碱粒细胞百分率basophil percentage of WBCsBAS0%来自计算（五分类）未成熟粒细胞计数immature granulocyte absolute countIG#，IMG%×109/L射频法和电阻抗法、光吸收法（五分类）续表3-3 血液分析仪临床常用检验参数基本原理和技术白细胞系列检测参数英文全称缩写单位检测原理和技术未成熟粒细胞百分率immature granulocyte percentIG%，IMG%来自计算（五分类）造血祖细胞百分率hematopoietic progenitor cell percentageHPC%来自计算（五分类）造血祖细胞计数hematopoietic progenitor cell absolute countHPC# ×109/L射频法和电阻抗法（五分类）大型未染色细胞计数large unstained cell countLUC#×109/L光散射法（加细胞化学染色）（五分类）大型未染色细胞百分率large unstained cell percentageLUC%来自计算（五分类）CD3 T细胞计数absolute number of T-cells（CD3lymphocytes）CD3T×109/L光散射（加免疫单克隆抗体荧光染色）（五分类）CD4 T细胞计数absolute number of T-helper/inducer cells（CD3CD4lymphocytes）CD4T×109/L光散射（加免疫单克隆抗体荧光染色）（五分类）CD8 T细胞计数absolute number of T-suppressor/cytotoxic cells（CD3CD8lymphocytes）CD8T×109/L光散射（加免疫单克隆抗体荧光染色）（五分类）CD3 T细胞百分率percentage of lymphocytes that are T-cells（CD3lymphocytes）CD3%来自计算（五分类）CD4 T细胞百分率percentage of lymphocytes that are T-helper/inducer cells（CD3CD4lymphocytes）CD4%来自计算（五分类）CD8 T细胞百分率percentage of lymphocytes that are T-suppressor/cytotoxic cells（CD3CD8lymphocytes）CD8%来自计算（五分类）CD4/ CD8 T细胞比率ratio of T-helper/inducer cells to T-suppressor/cytotoxic cells（ratio of CD3CD4lymphocytes to CD3CD8lymphocytes）4/8来自计算（五分类） 续表3-4 血液分析仪临床常用检验参数基本原理和技术红细胞和血小板细胞系列检测参数英文全称缩写单位检测原理和技术红细胞计数red blood cell concentrationRBC×1012/L鞘流电阻抗法（五分类），电阻抗法（三分群）血红蛋白浓度hemoglobin concentrationHGBg/L氰化活非氰化高铁血红蛋白比色法（三分群，五分类）血细胞比容hematocritHCT%来自计算（三分群，五分类）平均红细胞体积mean cell/corpuscular volumeMCVfl鞘流电阻抗法（五分类），电阻抗法（三分群）平均血红蛋白量mean cell/corpuscular hemoglobinMCHpg来自HGB/RBC计算（三分群，五分类）平均血红蛋白浓度mean cell/corpuscular hemoglobin concentrationMCHCg/L来自HGB/ HCT计算（三分群，五分类）有核红细胞计数nucleated red blood cell absolute concentrationNRBC#×109/L光散射（或加核酸荧光染色）（五分类）有核红细胞百分率nucleated red blood cell percentage ofNRBC%来自计算（五分类）红细胞分布宽度-s值red cell volume distribution width-SRDW-sfl来自计算（五分类，三分群）红细胞分布宽度-CV值red cell volume distribution width-CVRDW-CV%来自计算（五分类，三分群）球形细胞平均体积mean sphered cell volumeMSCVfl光散射、射频法、鞘流电阻抗法（五分类）单个红细胞平均血红蛋白量corpuscular hemoglobin contentCHpg光散射法（五分类）单个红细胞平均血红蛋白浓度corpuscular hemoglobin concentration meanCHCMg/L光散射法（五分类）红细胞血红蛋白量分布宽度hemoglobin concentration distribution widthHDWg/L来自计算（五分类）全部网织红细胞和成熟红细胞平均体积mean corpuscular volume of reticulocytes of all gated red cellsMCVg#fl光散射法（加核酸荧光染色）（五分类）全部网织红细胞和成熟红细胞平均血红蛋白浓度corpuscular hemoglobin concentration mean of all gated red cellsCHCMg#g/L光散射法（加核酸荧光染色）（五分类）续表3-4 血液分析仪临床常用检验参数基本原理和技术-红细胞和血小板细胞系列检测参数英文全称缩写单位检测原理和技术全部网织红细胞和成熟红细胞平均血红蛋白量mean hemoglobin content of reticulocytes of all gated red cellsCHg#pg光散射法（加核酸荧光染色）（五分类）网织红细胞血红蛋白浓度分布宽度reticulocyte cellular hemoglobin concentration distribution widthHDWrg/L来自计算（五分类）网织红细胞平均血红蛋白浓度corpuscular hemoglobin concentration mean of reticulocytesCHCMrg/L光散射法（加核酸荧光染色）（五分类）网织红细胞血红蛋白量reticulocyte hemoglobin equivalentRET-Hepg来自光散射（加荧光核酸染色）网织红细胞计数（五分类）网织红细胞平均血红蛋白量mean hemoglobin content of reticulocytesCHrpg光散射法（加核酸荧光染色）（五分类）网织红细胞计数reticulocyte countRET#×109/L光散射（加核酸荧光染色）（五分类）网织红细胞百分率reticulocyte count percentageRET%来自计算（五分类）未成熟网织红细胞比率immature reticulocyte fractionIRF%来自计算（五分类）低荧光强度网织红细胞比率low fluorescence ratioLFR%来自计算（五分类）中荧光强度网织红细胞比率middle fluorescence ratioMFR%来自计算（五分类）高荧光强度网织红细胞比率high fluorescence ratioHFR%来自计算（五分类）低吸光度网织红细胞百分率low absorption reticulocytes percent%L RET%来自计算（五分类）中吸光度网织红细胞百分率medium absorption reticulocytes percent%M RET%来自计算（五分类）高吸收光网织红细胞百分率high absorption reticulocytes percent%H RET%来自计算（五分类）低荧光网织红细胞百分率low fluorescence reticulocytes percentRETL%来自计算（五分类）续表3-4 血液分析仪临床常用检验参数基本原理和技术红细胞和血小板细胞系列检测参数英文全称缩写单位检测原理和技术中荧光网织红细胞百分率medium fluorescence reticulocytes percentRETM%来自计算（五分类）高荧光网织红细胞百分率high fluorescence reticulocytes percentRETH%来自计算（五分类）高散射光网织红细胞百分率high light scatter retic percentHLR%来自计算（五分类）高散射光网织红细胞计数high light scatter retic countHLR#×109/L光散射、射频法、鞘流电阻抗法（加非荧光核酸染色）（五分类）（网织红细胞）平均荧光指数mean fluorescence indexMFI%光散射法（加核酸荧光染色）（五分类）网织红细胞平均体积mean reticulocyte volumeMRV，MCVrfl光散射、射频法、鞘流电阻抗法（加非荧光核酸染色）（五分类）血小板计数Platelet concentrationPLT×109/L光散射（或加荧光染色，或加单克隆抗体）（五分类）；鞘流电阻抗法（五分类）；电阻抗法（五分群）未成熟血小板比率immature platelet fractionIPF%来自光散射法（加核酸荧光染色）（五分类）血小板分布宽度platelet distribution widthPDWCV（%），s（fl）来自计算（五分类，三分群）血小板平均体积mean platelet volumeMPVfl鞘流电阻抗法（五分类）；电阻抗法（三分群）大血小板比率Platelet larger cell ratioP-LCR%来自计算（五分类，三分群）血小板比容PlateletcritPCT%来自计算（五分类，三分群） （二）白细胞系列参数检测原理 1体积、电导和光散射（volume，conductivity，light scatter，VCS）法（图3-5） VCS技术，通过一个检测通道，在细胞几近自然状态下，分别应用电阻抗技术检测细胞体积，电导（射频）技术检测细胞大小和内部结构（包括细胞化学成分和核的体积），光散射技术（10°70°）检测细胞内的颗粒性、核分叶性核细胞表面结构。3种技术相互协调，同时检测。经复杂计算，按散点定位分析出细胞类型、按每一类型细胞数量计算出百分率、按散点密度检测出细胞亚类。在VCS技术下，不同血细胞群的特征见表3-5。由于各种血细胞的特征不同，从而各种细胞在散点图处于不同的部位而得以区别（图3-6 ）。VCS技术从正常细胞的数量、形态和密度可衍生出一整套报警形式，提示存在幼稚细胞等异常，并按细胞系列可作出原始细胞报警，经显微镜检复查后报告临床。VCS技术检测病理性异常细胞的散点图位置见图3-7。表3-5 VCS技术下各血细胞群的特征细胞群特征VCS淋巴细胞群小低弱单核细胞群相对较大相对低相对弱中性粒细胞群与大淋巴或小单核细胞相似相对和较高相对和较强嗜酸性粒细胞群与相似与相似相对较高嗜碱性粒细胞群与相似相对淋巴细胞较高相对较强 图3-5 体积、电导和光散射法 图3-6 VCS细胞检测立体散点图A：旋转的3维散点图（图中有红细胞和白细胞分类图），可从任何角度观察。B：3维散点图上的细胞群落可显示和隐藏（图中已隐藏淋巴细胞和中性粒细胞） 图3-7 VCS异常细胞检测平面散点图位置2流式细胞术、电阻抗、射频和特殊细胞染色法 检测通道：4DIFF通道：利用激光流式细胞术、核酸荧光染色技术，采用专一溶血剂溶解红细胞和血小板，而白细胞膜仅部分溶解出现小开口，核酸荧光染料聚次甲基（polymethine）进入受损的白细胞内，与DNA、RNA和细胞器结合，使之着色。染色后白细胞色深（未成熟粒细胞、异常细胞荧光染色更深，成熟白细胞荧光染色浅），红细胞不染色，血小板稍染色。因荧光强度与细胞所含核酸量成比例，从而得到4DIFF白细胞散点图（图3-8），包括中性粒细胞和嗜碱性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞（百分率和细胞计数绝对值）和未成熟粒细胞（百分率和细胞计数绝对值）。WBC/BASO通道（图3-9）：在碱性溶血剂作用下，除嗜碱性粒细胞外的其他所有细胞均被溶解或萎缩，随后用流式细胞术计数嗜碱性粒细胞，从而得到WBC/嗜碱性粒细胞百分率和细胞计数绝对值及WBC/BASO散点图。未成熟粒细胞信息（immature myeloid information，IMI）通道（图3-10）：用射频、电阻抗和细胞化学染色法。在细胞悬液中加硫化氨基酸，幼稚细胞与硫化氨基酸结合的量多于较成熟的细胞、且对溶血剂有抵抗作用。因此，当加入溶血剂时，成熟细胞被溶解，只留下幼稚细胞（含未成熟粒细胞、原始细胞、造血祖细胞）得以计数。IMI通道可定量分析不同类型幼稚细胞，包括造血祖细胞（hematopoietic progenitor cell，HPC）、成熟粒细胞、原始细胞、异型/异常淋巴细胞、核左移和有核红细胞，得到HPC百分率和绝对值计数。 图3-8 白细胞分类-4DIFF散点图 图3-9白细胞分类-白细胞/嗜碱性粒细胞散点图 图3-10未成熟粒细胞信息通道散点图3钨光源、激光散射法 过氧化物酶（peroxidase，Perox）染色通道（图3-11）：用钨光源散射法、表面活性剂溶解红细胞、过氧化物酶染色。过氧化物酶活性强度：嗜酸性粒细胞大于中性粒细胞，后者大于单核细胞；淋巴细胞和嗜碱性粒细胞则无过氧化物酶活性。测定过氧化物酶平均指数（mean peroxidase index，MPXI），得到嗜酸性粒细胞、中性粒细胞或单核细胞相对过氧化物酶活性，得到过氧化物酶分布强度的散点图，作白细胞计数。嗜碱性粒细胞/核分叶性（baso/lobularity）通道（图3-12）：固体激光通道，用含苯二酸（phthalic acid）和强酸性表面活性剂稀释液溶解红细胞和血小板，除嗜碱性粒细胞外，其他所有白细胞膜均被破坏，胞质溢出，仅剩裸核，作白细胞计数和嗜碱性粒细胞计数。完整的嗜碱性粒细胞呈高角度散射，位于散点图上部；裸核则位于下部。因不同细胞的裸核结构不同（如淋巴细胞、幼稚细胞为圆形，中性粒细胞为分叶核），分叶越多散点越靠坐标横轴右侧；根据多分叶核（polymorphonuclear，PMN）和单个核（mononuclear，MN）的比例，可计算出左移指数（left index，LI）。LI越强，说明左移程度越明显。结合嗜碱性粒细胞/分叶核通道结果可计算出白细胞总数和分类计数结果。未染色大细胞（large unstained cell count，LUC）检测：在Perox通道，可检测到大于正常淋巴细胞体积平均值2个标准差的细胞，如异型淋巴细胞、浆细胞、毛细胞、幼稚淋巴细胞和原始细胞。 图3-11 白细胞（N、L、M、E）过氧化物酶染色散点图 图3-12 嗜碱性粒细胞/核分叶性散点图4多角度偏振光散射法（multi angle polarized scatter separation，MAPSS） 应用固体激光流式细胞荧光技术，多角度检测白细胞和分类。白细胞计数和分类：多散点图分析（multi scatterplot analysis，MSA），用含染DNA染料碘化丙啶（propidium iodide）试剂，可破坏有核红细胞膜和细胞质，只留下细胞核，裸核易于染色。染料对活性白细胞只有极小渗透性或无渗透性，故不出现细胞核染色。鉴别有核红细胞、非活性白细胞和脆性白细胞，计算活性白细胞比率。MAPSS法可鉴别白细胞亚群、异常细胞类型，白细胞分类不受有核红细胞、血小板凝聚、不溶解红细胞和细胞碎片等干扰物质影响。血标本经鞘液稀释后，白细胞内部结构近似自然状态；血红蛋白从红细胞内溢出，红细胞膜结构仍保持完整，而鞘流水分子则进入红细胞，此时红细胞折光系数与鞘液相当，不干扰白细胞检测。多角度偏振光散射法分4个角度（图3-13）检测：0°，前向散射光：反映细胞大小，同时检测细胞数量（图3-14）。7°，侧向散射光：反映细胞内部结构及核染色质的复杂性。90°，垂直角度散射光（偏振光）：反映细胞内部颗粒及分叶状况（图3-15）。90°D，垂直角度消偏振散射光；“去偏振”是指垂直方向激光光波运动随光散射结果而改变；在光散射过程中，嗜酸性粒细胞颗粒丰富，可去偏振光，与中性粒细胞鉴别（图3-16）。CD3/4/8免疫T淋巴细胞计数：应用CD3/4和CD3/8单克隆抗体荧光染色标记技术、光散射法检测（图3-17，图3-18）。 图3-13 多角度偏振光散射法（MAPSS）模式图 图3-14 0°前向散射光反映细胞大小，同时检测细胞数量 7°侧向散射光反映细胞内部结构及核染色质复杂性 图3-15 90°垂直角度散射光（偏振光）：反映细胞内部颗粒及分叶状况 图3-16 90°D垂直角度消偏振散射光（去偏振光）90°垂直角度散射光（偏振光） 图3-17CD3/4免疫T淋巴细胞计数散点图 图3-18CD3/4/8免疫T淋巴细胞计数散点图5双流体（双鞘流）动力连续系统（double hydrodynamic sequential system，DHSS） 用钨光源流式细胞光吸收、化学染色和电阻抗法。白细胞计数通道：用电阻抗法检测。嗜碱性粒细胞通道：用专用染液染色，嗜碱性粒细胞具有抗酸性，而其他细胞胞质溢出，成为裸核，用电阻抗法检测，所得结果与白细胞/血红蛋白通道（采用鞘流阻抗法测定白细胞）的白细胞结果进行比较（图3-19）。白细胞分类通道：双鞘流系统中，用流式细胞光吸收、电阻抗和细胞化学染色液对细胞脂质和蛋白组分染色检测除各类嗜碱性粒细胞以外的白细胞（图3-20）；在幼稚红细胞通道，荧光染色，进行白细胞分类。 图3-19嗜碱性粒细胞计数直方图 图3-20 白细胞分类计数散点图DHSS技术：在流式通道中有2个鞘流装置，细胞经第1束鞘流后通过阻抗微孔测定细胞的真实体积，然后经第2束鞘流后到达光窗，测定细胞的光吸收，分析细胞内部结构（图3-21）。染色剂中含有溶血素及氯唑黑E（chlorazol black E）活体染料，溶解红细胞，对单核细胞初级颗粒、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞特异颗粒进行染色，同时对细胞膜、核膜、颗粒膜染色，得到中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞和巨大未成熟细胞（large immature cell，LIC）散点图结果。双矩阵LIC散点图可将幼稚细胞分为3个亚群（图3-22）：未成熟粒细胞（immature granulocyte，IMG）：包括异常中性粒细胞、晚幼粒细胞、中幼粒细胞、早幼粒细胞、原始粒细胞。未成熟单核细胞（immature monocyte，IMM）：包括早幼单核细胞、原始单核细胞。未成熟淋巴细胞（immature lymphocyte，IML）：包括早幼淋巴细胞、原始淋巴细胞等。 图3-21 双鞘流图 图3-22 双矩阵巨大未成熟细胞（LIC）散点图（IMG未成熟粒细胞、IMM未成熟单核细胞、IML未成熟淋巴细胞）（三）成熟红细胞系列参数检测原理1电阻抗法 依据红细胞大小和数量进行红细胞计数（图3-23）。 图3-23 正常红细胞直方图2流式细胞术、鞘流电阻抗法 红细胞/血小板计数通道：当红细胞计数和血小板计数结果异常时，可提示转换至RET/PLT-O光学检测通道，用光学法测定血小板（PLT-O）。得到与红细胞计数和血小板计数相关的众多参数（图3-24）。 图3-24 光学法检测网织红细胞、成熟红细胞和血小板散点图3流式细胞术激光散射法 （1）红细胞/血小板检测通道：用稀释液十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，SDS）使红细胞/血小板成为球形并经戊二醛固定，红细胞被激光照射后，所得信号相同，且不影响MCV的测定。用低角度光散射测量红细胞体积与总数，高角度光散射检测单个血红蛋白浓度，可准确测定MCV、MCH、MCHC值，得到红细胞散点图；同时可测定单个红细胞体积及红细胞内血红蛋白含量，得到相应直方图及RDW、HDW等参数。（2）红细胞散点图：是红细胞体积与血红蛋白浓度二维散点图，反映光散射与细胞体积和血红蛋白浓度之间的相互关系，能准确区分小红细胞等异常。在正常红细胞体积/血红蛋白浓度（volume/hemoglobin concentration，V/HC）散点图中多数红细胞位于散点图中央，原始散点图为