体内药物与毒物分析 (24).pdf

氨基糖苷类抗生素的体内分析氨基糖苷类抗生素的体内分析氨基糖苷类抗生素是由微生物产生或经半合成制取的一类由氨基糖与氨基环醇通过氧桥连接而成的苷类抗生素；目前仍被认为是一类有效的抗感染药物，主要用于治疗由敏感需氧革兰阴性杆菌所致的全身感染；此类药物具有碱性结构，可与无机酸形成水溶性盐类，其临床用药均为硫酸盐；由于本类药物在不同患者体内血药浓度或消除半衰期波动很大，临床上应用时均应尽可能进行血药浓度检测，尤其是对于婴幼儿或老年患者。具有较强的水溶性，化学性质稳定；在体内与血清蛋白结合率低，大多低于10%；胃肠道吸收差，肌注后大多以原型经肾小球排出；具有不同程度的肾毒性和耳毒性。碱性与亲水性：碱性与亲水性：本类药物是由氨基环多醇和氨基糖组成，分子结构中含有多个游离氨基或其他碱性基团，故呈碱性；分子中具有多个羟基，有较强的极性和水溶性。紫外光谱与衍生化反应：紫外光谱与衍生化反应：本类药物除链霉素在230nm波长处有吸收外，其余均无紫外吸收，分析时难以直接用紫外法检测。但是本类药物具有游离氨基，可与衍生化试剂生成具有紫外或荧光的衍生物后，进行衍生化后的紫外或荧光检测。旋光性：旋光性：本类药物分子结构中含有多个氨基糖，有多个手性碳，具有旋光性。1苷的水解与稳定性：苷的水解与稳定性：本类药物含有双糖胺结构，分子结构中双糖胺之间的内苷键较为稳定，而双糖胺与苷元之间的苷键结合相对较弱，可发生水解。氨基糖苷类药物的分子结构中存在多个游离氨基，通常将氨基进行紫外或荧光衍生化，其中以荧光衍生化为主。荧光衍生化试剂有：邻苯二醛（OPA）、单酰氯（DNS-Cl）、茚三酮等，尤其以荧光衍生化试剂OPA最为广泛。原理：原理：在碱性条件下，OPA和-巯基乙醇可迅速与氨基糖苷类的伯氨基反应，生成具有强荧光衍生产物1,2-二取代异氮杂茚。通常以340nm作为衍生物的激发波长，以455nm为荧光波长。优缺点：优缺点：OPA本身无荧光性，所产生的产物具有强荧光，对检测无干扰，且反应迅速，不仅适合柱前衍生化，也适合柱后衍生化。然而OPA衍生物不够稳定，易受光、酸的影响及空气氧化。反应通式：反应通式：2庆大霉素是从放线菌科单孢子属发酵培养液中提得，是常用的氨基糖苷类抗生素，主要用于治疗细菌感染，尤其是革兰氏阴性菌引起的感染。庆大霉素能与细菌核糖体30s亚基结合，阻断细菌蛋白质合成。庆大霉素是为数不多的热稳定性的抗生素，因而广泛应用于培养基配制。庆大霉素是中国独立自主研制成功的广谱抗生素，是新中国成立以来的伟大科技成果之一。定义：定义：把多组分样品先注入色谱柱，按选定的色谱条件使之得以分离，当各个组分从色谱柱流出后，分别与衍生化试剂相遇，在一定的反应条件下，生成带有发色功能团的的衍生化产物再进入检测器。优点：优点：不会由于因为增加衍生化反应步骤给色谱分离带来困难。缺点：缺点：?对流动相的选择更严格，必须考虑衍生化试剂、反应产物的溶解度，以及它们与流动相可能发生的副反应；?由于在高效液相色谱中采用高流速，因此，反应速率必须很快（小于30s）；?检测器对衍生化试剂不能有响应。34色谱条件：色谱条件：色谱柱：Bondapak C18离子对试剂：0.2mol/L 1,2-乙烷二磺酸二钠与0.01mol/L辛烷磺酸钠水溶液等体积混合液（pH2.5）衍生化试剂：邻苯二醛（OPA），流速：0.8ml/min，衍生化温度：50流动相：乙腈（0.1mol/L1,2-乙烷二磺酸二钠、0.005mol/L辛烷磺酸钠）：水=15：85（醋酸调节pH3.5）流速：1.5ml/min检测器：荧光（激发波长365nm，荧光波长440nm）方法学验证方法学验证方法准确度与精密度：方法回收率：97%103%批内RSD:2.0%2.5%(n=10)批间RSD:2.3%3.2%(n=10)5线性范围与检测限：线性范围：2.716.5 g/ml 检测限（LOD）：0.5 g/ml 6