生殖医学研究锦囊 (6).pdf

体外受精和早期胚胎培养技巧体外受精和早期胚胎培养技巧自然受孕与体外受精自然受孕体外受精体外获取配子体外精卵结合体外培养1234移植OR冷冻体外受精人为控制的培养环境，尽可能模拟体内环境！流程体外状态下的精子和卵子精子需要经过一系列处理流程体外获能+精子优选卵子体外成熟一段时间（胞质成熟）200X10X40X200X体外自然受精（IVF）要点：精卵识别及融合阻止多精受精Timelapse 观察到的IVF过程IVF的技巧及要点通常通过密度梯度+上游的方法，筛选精子，并让精子充分获能01精子获能获卵后，继续培养一段时间，确保核质成熟，阻止多精受精02卵子体外成熟调整好授精密度，降低多精受精，尤其是高龄、多周期03授精密度动作轻柔，最大限度降低机械损伤04拆卵胞浆内单精子注射（ICSI）ICSI操作视频ICSI的技巧及要点操作针固定针及操作针，两者应保持水平并且保证夹持角度为针的操作角度（300or350），卵子固定-极体在6点或12点位置。12操作时长操作熟练，避免长时间体外操作3稳定手部操作要稳，进出针横向移动，严谨斜向移动胚胎体外培养的原理Oviduct pyruvatelactateglucosenon-ess AA pyruvatelactateglucosenon-ess AA essential AA胚胎体外培养的原理主要成分输卵管子宫葡萄糖浓度0.5 mM3.15 mM丙酮酸浓度0.32 m0.10 mM乳酸浓度10.5 mM5.2 mM氧气浓度8%1.5%二氧化碳浓度12%10%pH7.57.1甘氨酸浓度2.7719.33丙氨酸浓度0.51.24丝氨酸浓度0.320.80胚胎体外培养的原理胚胎紧密化之前胚胎紧密化之后生物合成少生物合成多代谢商低代谢商高丙酮酸代谢为主葡萄糖代谢为主母源基因组控制胚胎基因组控制单个细胞转运上皮细胞维持细胞稳态能力差有一套复杂的体系维持细胞稳态具有发育全能型分化成内细胞团和滋养层010403体外培养液组成05060207080911水盐离子成分能量物质：葡萄糖、丙酮酸、乳糖缓冲系统NaHCO3/MOPs非必须氨基酸必须氨基酸谷氨酰胺螯合剂mainly EDTA大分子:白蛋白/透明质酸抗生素酚红？培养室的稳定培养外环境（培养室）的温度、湿度保持恒定，去除TVOCS，保持环境整洁培养箱的稳定培养内环境（培养箱内）的温度、湿度、气体浓度维持稳定，保持较小的波动，定时清洁消毒。培养液的准备及平衡严格的无菌备液操作，5H以上的平衡时间，定期监测培养液的PH值等参数。培养环境稳定尽可能接近人体真实内环境尽量减少人为干预01030204转移快观察快少开门少干预胚胎发育的经典过程卵子的不均质D3胚胎的不均质各种囊胚辅助生殖实验室的角色12感 谢 您 的 观 看T h a n k sf o rw a t c h i n g