细胞凝集反应.pdf

细胞凝集反应细胞凝集反应一、实验目的一、实验目的1.了解细胞膜的表面结构2.掌握凝集素促进细胞凝集的方法3.学习研究细胞凝集反应的方法二、实验原理二、实验原理凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集：细胞质膜外表面的一层黏性多糖物质构成的，细胞被在细胞间的联系和识别、细胞的生长分化、免疫反应及肿瘤发生等过程中发挥着重要作用；动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜表面，它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制现象的必要组分；凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。三、实验用品三、实验用品1 器材:显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml 移液管、试管、试管架2 材料:土豆块茎3 试剂:兔子血、抗凝血剂、PBS、土豆块茎、生理盐水和其他等渗液。四、实验步骤四、实验步骤1.去皮土豆块茎 2g，加 10mLPBS缓冲液浸泡 24h，所得粗提液中既含有可溶性土豆凝集素.2.抽取兔静脉血 1mL 加抗凝剂，加入 3mL 生理盐水，1000r/min离心 5min，重复洗涤三次。按红细胞压积配成 1%红细胞悬浊液。3.分别用滴管吸取土豆凝集素和 1%兔血红细胞各一滴，置于双凹片左孔混匀；吸取 PBS 缓冲液各一滴置于双凹片右孔混匀。4.摇晃 5-10min观察，并以低倍镜镜检。五、实验结果五、实验结果如图 1 可看到，混合了土豆凝集素的兔血红细胞（右侧）聚集成块，周围液体较澄清；而混合了 PBS 缓冲溶液的兔血红细胞（左侧）未发生凝集，液体浑浊。低倍镜下镜检（图 2）可看到，凝集了的细胞聚成一簇不规则的团，而未发生凝集的红细胞很均匀。图 1反应后的双凹片图 2a 未发生凝集的细胞图 2b 发生凝集的细胞图 2 低倍镜（*10）下混合了了土豆凝集素（右）和PBS 缓冲溶液（左）的兔血红细胞观察六、分析与讨论六、分析与讨论1.为什么对照组有 PBS 液作对照呢？答：因为凝集素中本身含 PBS 缓冲液，当含本身凝集素是不含 PBS 的，只是因为本实验中凝集素的提取时用到了 PBS。2.哪些因素影响细胞凝集反应？答：温度，温度影响酶的活性；时间，随着时间的延长细胞聚集程度加大；反应底物；细胞类型；反应培养板的质量；人为因素3.结合凝集素的特性，简述凝集素在生物学中有何应用？研究凝集素有何意义？答：凝集素(lect in)是一类具有糖结合专一性,是可促使细胞凝集的蛋白质。凝集素对糖的特异结合性决定了它在动植物体内具有一些重要而特殊的生物学功能。利用这些功能,凝集素在生物养殖、生物工程、生理活动调控、疾病防治等方面展示出广阔的应用前景。掌握凝集素的生物学功能,对了解动植物的生物学进程、生理功能都有重要意义。