《细菌菌落计数》课件.ppt

细菌菌落计数细菌菌落计数直接法血球记数板活菌染色：美蓝、吖啶橙、TTC间接法细菌计数板和血球计数板都用来侧微生物的总菌数。血球计数板用来测较大微生物如酵母菌和霉菌孢子的总数，细菌计数板用来测细菌的总菌数。两种计数板的构造相似，不同的是细菌计数板的深度仅为血球计数板深度的1/5。直接法直接法血球记数板血球记数板间间 接接 法法n平板菌落计数法(Colony-counting Methods)一个活菌在合适的培养基表面，逐渐生长成一个 肉眼可见的菌落（菌落形成单位，colony forming unit,CFU），从而得知原始活菌含量。涂布平板法Spread Plate浇注平板法Pour Plate间间 接接 法法平板菌落计数法涂布平板法浇注平板法方法：方法：方法：方法：1.1.以无菌操作方法用灭菌吸管吸取以无菌操作方法用灭菌吸管吸取以无菌操作方法用灭菌吸管吸取以无菌操作方法用灭菌吸管吸取 0.9 ml0.9 ml生生生生理盐水，分别理盐水，分别理盐水，分别理盐水，分别 加入加入加入加入6 6支灭菌支灭菌支灭菌支灭菌EPEP管中。管中。管中。管中。2.2.以无菌操作方法吸取充分混匀的待检样本，以无菌操作方法吸取充分混匀的待检样本，以无菌操作方法吸取充分混匀的待检样本，以无菌操作方法吸取充分混匀的待检样本，注入盛有灭菌生理盐水的试管中，混匀成注入盛有灭菌生理盐水的试管中，混匀成注入盛有灭菌生理盐水的试管中，混匀成注入盛有灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:101:10稀释液。稀释液。稀释液。稀释液。3.3.吸取吸取吸取吸取1:101:10的稀释液注入盛有灭菌生理盐水的稀释液注入盛有灭菌生理盐水的稀释液注入盛有灭菌生理盐水的稀释液注入盛有灭菌生理盐水的试管中，混匀成的试管中，混匀成的试管中，混匀成的试管中，混匀成1:1001:100稀释液。按同法稀释液。按同法稀释液。按同法稀释液。按同法依次稀释成依次稀释成依次稀释成依次稀释成1:10001:1000，1:100001:10000稀释液等稀释液等稀释液等稀释液等备用。（如此递增稀释一次，必须更换一备用。（如此递增稀释一次，必须更换一备用。（如此递增稀释一次，必须更换一备用。（如此递增稀释一次，必须更换一支支支支1ml1ml灭菌吸管）灭菌吸管）灭菌吸管）灭菌吸管）4.4.用灭菌吸管取用灭菌吸管取用灭菌吸管取用灭菌吸管取2 23 3个适宜稀释度的稀释菌个适宜稀释度的稀释菌个适宜稀释度的稀释菌个适宜稀释度的稀释菌液，分别注入灭菌平皿内，每个稀释度重液，分别注入灭菌平皿内，每个稀释度重液，分别注入灭菌平皿内，每个稀释度重液，分别注入灭菌平皿内，每个稀释度重复做两个平板，涂布均匀后，置复做两个平板，涂布均匀后，置复做两个平板，涂布均匀后，置复做两个平板，涂布均匀后，置3737，培养培养培养培养24-48h24-48h。123456样本样本11234560.1ml0.1ml0.1ml适用领域：适用领域：1.1.广泛用于生物制品检验广泛用于生物制品检验广泛用于生物制品检验广泛用于生物制品检验(如活菌制剂如活菌制剂如活菌制剂如活菌制剂)，以及食品、饮料，以及食品、饮料，以及食品、饮料，以及食品、饮料和水和水和水和水(包括水源水包括水源水包括水源水包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。等的含菌指数或污染程度的检测。等的含菌指数或污染程度的检测。等的含菌指数或污染程度的检测。2.2.疾病诊断疾病诊断疾病诊断疾病诊断 *泌尿系感染性疾病的诊断泌尿系感染性疾病的诊断泌尿系感染性疾病的诊断泌尿系感染性疾病的诊断-尿培养尿培养尿培养尿培养 3.3.细菌感染及药物治疗效果细菌感染及药物治疗效果细菌感染及药物治疗效果细菌感染及药物治疗效果 *临床病人临床病人临床病人临床病人 *实验动物实验动物实验动物实验动物 3、菌落计算方法、菌落计算方法（1）菌落计数方法）菌落计数方法 做做平平板板菌菌落落计计数数时时，可可用用肉肉眼眼观观查查，必必要要时时用用放放大大镜镜检检查查，以以防防遗遗漏漏。在在记记下下各各平平板板的的菌菌落落数数后后，求求出出同同稀稀释释度的各平板平均菌落总数。度的各平板平均菌落总数。（2）菌落计数的报告）菌落计数的报告平板菌落数的选择平板菌落数的选择 选取菌落数在选取菌落数在3030300300之间的平板作为菌落总数测定标之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘即可计算半个平板后乘2 2以代表全皿菌落数。以代表全皿菌落数。结果：结果：结果：结果：总活细菌数（总活细菌数（总活细菌数（总活细菌数（CFUs/mlCFUs/ml）=某一稀释度的平均菌落数某一稀释度的平均菌落数某一稀释度的平均菌落数某一稀释度的平均菌落数 1010稀释度稀释度稀释度稀释度*注意事项见实验讲义注意事项见实验讲义注意事项见实验讲义注意事项见实验讲义稀稀释释度度1010-4-41010-5-51010-6-6菌落数菌落数1 12 2平均平均1 12 2平均平均1 12 2平均平均每毫升中每毫升中总总活菌数活菌数