《人工染色体》PPT课件.ppt

第六章第六章人工染色体人工染色体vv生物体的许多重要性状牵涉到复杂的生理生生物体的许多重要性状牵涉到复杂的生理生化反应系列，受多基因或基因簇的控制，与化反应系列，受多基因或基因簇的控制，与成百至上万千碱基的成百至上万千碱基的DNA片段相关。片段相关。vv复杂基因组的物理作图和基因的定位克隆也复杂基因组的物理作图和基因的定位克隆也涉及到大片段涉及到大片段DNA的研究。的研究。vv因此，因此，提高载体的容纳量提高载体的容纳量一直是克隆载体的一直是克隆载体的重要发展方向之一。重要发展方向之一。vv随随着着脉脉冲冲电电泳泳技技术术的的发发展展以以及及基基因因组组研研究究的的日日益益深深入入，对对可可插插入入大大片片段段DNA的的克克隆隆载载体体人工染色体人工染色体的研究取得了迅速的发展的研究取得了迅速的发展vv所所谓谓人人工工染染色色体体是是一一类类能能在在生生物物细细胞胞中中独立独立“稳定存在和遗传的人工重组稳定存在和遗传的人工重组DNA分子分子”。v酵母人工染色体载体（酵母人工染色体载体（yeastartificialchromosome,YAC，1000kb）v细菌人工染色体（细菌人工染色体（bacterialartificialchromosome,BAC，300kb）v哺乳类人工染色体（哺乳类人工染色体（MAC）vP1衍生人工染色体衍生人工染色体现正在研究的人工染色体现正在研究的人工染色体总结一、一、YAC的基本序列元件的基本序列元件酵母染色体酵母染色体酵母染色体酵母染色体DNADNA自主复制顺序（自主复制顺序（自主复制顺序（自主复制顺序（ARSARS）酵母染色体的酵母染色体的酵母染色体的酵母染色体的着丝粒顺序（着丝粒顺序（着丝粒顺序（着丝粒顺序（CENCEN）酵母染色体的酵母染色体的酵母染色体的酵母染色体的端粒顺序（端粒顺序（端粒顺序（端粒顺序（TELTEL）第一节第一节 YAC酵母人工染色体酵母人工染色体vvYAC YAC 载载载载体体体体主主主主要要要要是是是是用用用用来来来来构构构构建建建建大大大大片片片片段段段段 DNA DNA 文文文文库库库库，特特特特别别别别用用用用来来来来构构构构建建建建高高高高等等等等真真真真核核核核生生生生物物物物的的的的基基基基因因因因组组组组文文文文库库库库，并并并并不不不不用用用用作作作作常常常常规规规规的的的的基基基基因克隆。因克隆。因克隆。因克隆。正正正正常常常常酵酵酵酵母母母母人人人人工工工工染染染染色色色色体体体体含含含含有：有：有：有：*四膜虫端粒（四膜虫端粒（四膜虫端粒（四膜虫端粒（teltel）定定定定位位位位于于于于染染染染色色色色体体体体末末末末端端端端一一一一段段段段序序序序列列列列，用用用用于于于于保保保保护护护护线线线线状状状状的的的的 DNA DNA 不不不不被被被被胞胞胞胞内内内内的的的的核核核核酸酸酸酸酶酶酶酶降解，形成稳定的结构降解，形成稳定的结构降解，形成稳定的结构降解，形成稳定的结构vv酵母自主复制序列（酵母自主复制序列（ARS)一一段段特特殊殊的的序序列列，含含有有酵酵母母菌菌中中DNA进进行双向复制所必需的信号。行双向复制所必需的信号。vv酵母着丝点酵母着丝点酵母着丝点酵母着丝点(CEN)(CEN)有有有有丝丝丝丝分分分分裂裂裂裂过过过过程程程程中中中中纺纺纺纺锤锤锤锤丝丝丝丝的的的的结结结结合合合合位位位位点点点点，使使使使染染染染色色色色体体体体在在在在分分分分裂裂裂裂过过过过程程程程中中中中能能能能正正正正确确确确分分分分配配配配到到到到子子子子细细细细胞胞胞胞中中中中。在在在在 YACYAC中中中中起起起起到到到到保保保保证证证证一一一一个个个个细细细细胞胞胞胞内内内内只只只只有有有有一一一一个个个个人人人人工工工工染染染染色色色色体体体体的的的的作用。作用。作用。作用。pYAC4pYAC4：酵酵酵酵母母母母第第第第四四四四条条条条染色体的着丝粒。染色体的着丝粒。染色体的着丝粒。染色体的着丝粒。vvYACYAC载体的选择标记载体的选择标记载体的选择标记载体的选择标记vv主要采用营养缺陷型基因主要采用营养缺陷型基因主要采用营养缺陷型基因主要采用营养缺陷型基因TRP1：色氨酸生物合成基因缺陷型：色氨酸生物合成基因缺陷型URA3：尿嘧啶生物合成基因缺陷型：尿嘧啶生物合成基因缺陷型LEU2：亮氨酸合成基因缺陷型：亮氨酸合成基因缺陷型 SUPSUP 4 4：赭石突变抑制基因：赭石突变抑制基因：赭石突变抑制基因：赭石突变抑制基因 作作作作用用用用方方方方式式式式：YACYAC载载载载体体体体配配配配套套套套工工工工作作作作的的的的宿宿宿宿主主主主酵酵酵酵母母母母菌菌菌菌（如如如如AB1380AB1380）的的的的胸胸胸胸腺腺腺腺嘧嘧嘧嘧啶啶啶啶合合合合成成成成基基基基因因因因带带带带有有有有一一一一个个个个赭赭赭赭石石石石突突突突变变变变 ade ade 2-12-1。带带带带有有有有这这这这个个个个突突突突变变变变的的的的酵酵酵酵母母母母菌菌菌菌在在在在基基基基本本本本培培培培养养养养基基基基上上上上形形形形成成成成红红红红色色色色菌菌菌菌落落落落，当当当当带带带带有有有有赭赭赭赭石石石石突突突突变变变变抑抑抑抑制制制制基基基基因因因因 supsup44的的的的载载载载体体体体存存存存在在在在于于于于细细细细胞胞胞胞中中中中时时时时，可可可可抑抑抑抑制制制制 ade ade 2-12-1基因的突变效应，形成正常的白色菌落。基因的突变效应，形成正常的白色菌落。基因的突变效应，形成正常的白色菌落。基因的突变效应，形成正常的白色菌落。vv由由于于酵酵母母的的染染色色体体是是线线状状的的，因因此此其其在在工工作作状状态态也也是是线线状状的的。但但是是，为为了了方方便便制制备备YAC载载体体，YAC载载体体以以环环状状的的方方式式存存在在，并并增增加加了了普普通通大大肠肠杆杆菌菌质质粒粒载载体体的的复复制制元元件件和和选选择择标标记记，以以便便保存和增殖。保存和增殖。二、克隆策略二、克隆策略vvYAC克克隆隆DNA片片段段的的过过程程是是：目目的的基基因因在在限限制制性性内内切切酶酶酶酶解解后后变变成成大大片片段段DNA，克克隆隆进进酵酵母母载载体体DNA，转转染染酵酵母母缩缩主主细细胞胞，扩扩增增后后，根据标记性状筛选出重组的人工染色体根据标记性状筛选出重组的人工染色体三、三、YAC克隆系统的特点克隆系统的特点v1、YAC作作为为可可提提供供大大片片段段DNA的的方方法法，简简化化了了构构建建染染色色体体延延伸伸区区域域图图谱谱和和分分离离完完整整基基因的过程（因的过程（200500kb，甚至甚至1000kb）v2、用用酵酵母母为为宿宿主主重重新新构构建建大大的的人人类类基基因因区区段段，可将小的重叠的可将小的重叠的YAC变成一个大的变成一个大的YACv3、酵酵母母作作为为一一种种真真核核生生物物，为为其其它它真真核核的的DNA提供了更合适的环境提供了更合适的环境四、四、YAC克隆系统的克隆系统的缺点缺点vv首首首首 先先先先，在在在在 YACYAC载载载载 体体体体 的的的的 插插插插 入入入入 片片片片 段段段段 会会会会 出出出出 现现现现 缺缺缺缺 失失失失 （deletiondeletion）和和和和基基基基因因因因重重重重排排排排（rearrangementrearrangement）的的的的现现现现象。象。象。象。vv其其其其次次次次，容容容容易易易易形形形形成成成成嵌嵌嵌嵌合合合合体体体体。嵌嵌嵌嵌合合合合就就就就是是是是在在在在单单单单个个个个YACYAC中中中中的的的的插插插插入入入入片片片片段段段段由由由由2 2个个个个或或或或多多多多个个个个的的的的独独独独立立立立基基基基因因因因组组组组片片片片段段段段连连连连接接接接组组组组成成成成。嵌合克隆约占总克隆的嵌合克隆约占总克隆的嵌合克隆约占总克隆的嵌合克隆约占总克隆的 5%5%50%50%。vv YACYAC染染染染色色色色体体体体与与与与宿宿宿宿主主主主细细细细胞胞胞胞的的的的染染染染色色色色体体体体大大大大小小小小相相相相近近近近，影影影影响响响响了了了了YACYAC载载载载体体体体的的的的广广广广泛泛泛泛应应应应用用用用。YACYAC染染染染色色色色体体体体一一一一旦旦旦旦进进进进入入入入酿酿酿酿酒酒酒酒酵酵酵酵母母母母细细细细胞胞胞胞，由由由由于于于于其其其其大大大大小小小小与与与与内内内内源源源源的的的的染染染染色色色色体体体体的的的的大大大大小小小小相相相相近近近近，就很难从中分离出来，不利于进一步分析。就很难从中分离出来，不利于进一步分析。就很难从中分离出来，不利于进一步分析。就很难从中分离出来，不利于进一步分析。返回第二节第二节细菌人工染色体（细菌人工染色体（BAC）一、一、一、一、BACBAC特点特点特点特点1 1、是是是是以以以以大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌的的的的F F因因因因子子子子的的的的重重重重要要要要位位位位点点点点及及及及基基基基因因因因为为为为主主主主体体体体的的的的高高高高通通通通量量量量低低低低拷贝拷贝拷贝拷贝的质粒载体。的质粒载体。的质粒载体。的质粒载体。2 2、F F因子的特点因子的特点因子的特点因子的特点vv又又又又称称称称致致致致育育育育因因因因子子子子，是是是是一一一一个个个个100100kbkb的的的的质质质质粒粒粒粒，能能能能整整整整合合合合到到到到宿宿宿宿主主主主染染染染色色色色体体体体中。并能高频率的转移遗传标记。中。并能高频率的转移遗传标记。中。并能高频率的转移遗传标记。中。并能高频率的转移遗传标记。vvF F因因因因子子子子在在在在大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌中中中中的的的的复复复复制制制制受受受受到到到到严严严严格格格格控控控控制制制制而而而而保保保保持持持持低低低低拷拷拷拷贝贝贝贝，一一一一般般般般为为为为每每每每细细细细胞胞胞胞1 12 2个个个个拷拷拷拷贝贝贝贝，其其其其parBparB基基基基因因因因能能能能够够够够排排排排斥斥斥斥细细细细胞胞胞胞中中中中的的的的外外外外源源源源性性性性F F质质质质粒粒粒粒，限限限限制制制制了了了了细细细细胞胞胞胞内内内内质质质质粒粒粒粒分分分分子子子子间间间间的的的的重重重重排排排排，降降降降低低低低了了了了BACBAC中外源基因的重组和嵌合度中外源基因的重组和嵌合度中外源基因的重组和嵌合度中外源基因的重组和嵌合度vv带带带带有有有有外外外外源源源源片片片片段段段段的的的的BACBAC载载载载体体体体在在在在细细细细菌菌菌菌细细细细胞胞胞胞（重重重重组组组组缺缺缺缺陷陷陷陷型型型型，recrec）中中中中通通通通常常常常仅仅仅仅单单单单个个个个拷拷拷拷贝贝贝贝，这这这这一一一一特特特特点点点点有有有有利利利利于于于于保保保保持持持持DNADNA大大大大分分分分子子子子在在在在细细细细胞胞胞胞内内内内稳定复制而不发生重组，尤其是重复序列多的稳定复制而不发生重组，尤其是重复序列多的稳定复制而不发生重组，尤其是重复序列多的稳定复制而不发生重组，尤其是重复序列多的DNADNA大分子大分子大分子大分子vv克隆克隆克隆克隆350350kbkb F F因因因因子子子子具具具具有有有有携携携携带带带带1Mb1Mb插插插插入入入入片片片片段段段段的的的的潜潜潜潜能能能能，这这这这就就就就使使使使构构构构建建建建具具具具有有有有大大大大容量克隆能力的载体成为可能容量克隆能力的载体成为可能容量克隆能力的载体成为可能容量克隆能力的载体成为可能 将将将将F F因因因因子子子子经经经经基基基基因因因因工工工工程程程程改改改改良良良良构构构构成成成成的的的的BACBAC载载载载体体体体，可可可可用用用用于于于于克克克克隆隆隆隆100kb100kb以上的以上的以上的以上的DNADNA片段。片段。片段。片段。二、二、BAC载体的结构载体的结构v1992年年Shizuya利利用用F因因子子的的复复制制起起点点和和氯氯霉霉 素素 抗抗 性性 标标 记记 基基 因因，在在 F质质 粒粒（pMBO131）基基础础上上构构建建了了第第一一代代BAC人人工工染染色色体体。能能够够克克隆隆和和保保持持大大于于100kb的的DNA。新新一一代代BACkb的的环环状状质质粒：粒：F因因子子的的parA，parB，parC基基因因以以保保证证低低拷拷贝贝的的BAC质质粒粒在在大大肠肠杆杆菌菌分分裂时均匀分配到子代细胞裂时均匀分配到子代细胞oriS基基因因：来来源源于于大大肠肠杆杆菌菌F因因子子（致致育育因因子子）的严谨型控制的复制子的严谨型控制的复制子vv解解解解旋旋旋旋酶酶酶酶基基基基因因因因repErepE：一一一一个个个个易易易易于于于于 DNA DNA 复复复复制制制制的的的的由由由由 ATP ATP 驱驱驱驱动动动动的的的的解解解解旋旋旋旋酶酶酶酶 vv选选选选择择择择标标标标志志志志基基基基因因因因CmCmr r氯氯氯氯霉霉霉霉素素素素抗抗抗抗性性性性基因基因基因基因vvcosNcosN来来来来源源源源于于于于phagephage的的的的coscos位位位位点点点点，可可可可以以以以用用用用 末末末末端端端端酶酶酶酶切切切切割割割割BACBAC使使使使之线性化之线性化之线性化之线性化vvNotNot识识识识别别别别序序序序列列列列，位位位位点点点点十十十十分分分分稀稀稀稀少少少少。重重重重组组组组子子子子通通通通过过过过 NotNot消消消消化化化化后后后后，可可可可以以以以得到完整的插入片段。得到完整的插入片段。得到完整的插入片段。得到完整的插入片段。vv lacZlacZ基基基基因因因因颜颜颜颜色色色色鉴鉴鉴鉴别别别别重重重重组组组组子子子子，外外外外源源源源基因插入基因插入基因插入基因插入vv Cre/loxPCre/loxP：来来来来 自自自自P1P1噬噬噬噬 菌菌菌菌 体体体体，CreCre重重重重组组组组酶酶酶酶基基基基因因因因和和和和loxPloxP序序序序列列列列位位位位于于于于P1P1噬噬噬噬菌菌菌菌体体体体基基基基因因因因组组组组内内内内，loxPloxP是是是是CreCre酶的识别序列酶的识别序列酶的识别序列酶的识别序列 用相应的酶作不完全酶切，可用相应的酶作不完全酶切，可用相应的酶作不完全酶切，可用相应的酶作不完全酶切，可以获得长度不等的以获得长度不等的以获得长度不等的以获得长度不等的DNADNA片段片段片段片段人工合成的进行末端标记的含人工合成的进行末端标记的含人工合成的进行末端标记的含人工合成的进行末端标记的含有有有有loxPloxP序列的片段序列的片段序列的片段序列的片段CreCre酶识别酶识别酶识别酶识别loxPloxP位点后形成的线位点后形成的线位点后形成的线位点后形成的线性化的性化的性化的性化的BACDNABACDNA经经经经PFGEPFGE电泳后进行放射自显影，电泳后进行放射自显影，电泳后进行放射自显影，电泳后进行放射自显影，含有标记的含有标记的含有标记的含有标记的loxPloxP序列的片段会序列的片段会序列的片段会序列的片段会有条带有条带有条带有条带利用利用利用利用Cre/loxPCre/loxP直接构建外源基因的限制酶谱直接构建外源基因的限制酶谱直接构建外源基因的限制酶谱直接构建外源基因的限制酶谱三、三、BAC优点优点vvBACBAC载体的容载能力一般为载体的容载能力一般为载体的容载能力一般为载体的容载能力一般为100100350kb350kbvv以以以以大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌为为为为寄寄寄寄主主主主，转转转转化化化化率率率率高高高高，构构构构建建建建文文文文库库库库比比比比文库更容易文库更容易文库更容易文库更容易vv载载载载体体体体以以以以环环环环型型型型超超超超螺螺螺螺旋旋旋旋状状状状态态态态存存存存在在在在，BACBAC载载载载体体体体空空空空载载载载时时时时大大大大小小小小约约约约 7.5kb7.5kb，在在在在大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌中中中中以以以以质质质质粒粒粒粒的的的的形形形形式式式式复复复复制制制制，具具具具有有有有一一一一个氯霉素抗性基因。个氯霉素抗性基因。个氯霉素抗性基因。个氯霉素抗性基因。vv外外外外源源源源基基基基因因因因组组组组 DNADNA片片片片段段段段可可可可以以以以通通通通过过过过酶酶酶酶切切切切、连连连连接接接接克克克克隆隆隆隆到到到到 BACBAC载载载载体体体体多多多多克克克克隆隆隆隆位位位位点点点点上上上上，通通通通过过过过电电电电穿穿穿穿孔孔孔孔的的的的方方方方法法法法将将将将连连连连接接接接产产产产物物物物导导导导入入入入大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌重重重重组组组组缺缺缺缺陷陷陷陷型型型型菌菌菌菌株株株株。装装装装载载载载外外外外源源源源 DNADNA后后后后的的的的重重重重组组组组质质质质粒通过氯霉素抗性和粒通过氯霉素抗性和粒通过氯霉素抗性和粒通过氯霉素抗性和 LacZLacZ基因的基因的基因的基因的互补筛选。互补筛选。互补筛选。互补筛选。vv的的复复制制子子来来源源于于因因子子，可可稳稳定定遗遗传传，嵌嵌合及重组现象少合及重组现象少vv可可以以通通过过菌菌落落原原位位杂杂交交来来筛筛选选目目的的基基因因，方方便便快快捷捷vv载载体体在在克克隆隆位位点点的的两两侧侧具具有有7和和6聚聚合合酶酶启启动动子子，可可以以用用于于转转录录获获得得探探针针或或直接用于插入片段的末端测序直接用于插入片段的末端测序返回vP1噬噬菌菌体体与与噬噬菌菌体体一一样样，外外有有蛋蛋白白质质壳壳。内内含含相相当当大大的的（110115kb）线线性性DNA，并并在在体体外外包装于包装于P1壳内。壳内。P1进进入宿主入宿主细细胞后胞后环环化，化，扩扩增。增。v1994年年，有有人人将将P1和和F因因子子克克隆隆结结合合产产生生P1人人工染色体克隆系工染色体克隆系统统-PAC。第三节第三节其他的人工染色体其他的人工染色体一、一、P1人工染色体克隆系统人工染色体克隆系统-PAC基于基于PAC的的人类基因组文人类基因组文库插入片段的库插入片段的大小在大小在60kb150kb之间。之间。二、人类人工染色体二、人类人工染色体返回vv1、自自上上而而下下的的策策略略该该策策略略：是是以以天天然然染染色色体的断裂片段为基础，构建新的体的断裂片段为基础，构建新的HACvv这些断裂片段主要通过以下方法得到这些断裂片段主要通过以下方法得到vv()低剂量辐射低剂量辐射vv()端粒定位染色体截断技术端粒定位染色体截断技术vv()外源性片段定点插入后扩增外源性片段定点插入后扩增vv()天然染色体有丝分裂过程中自发形成天然染色体有丝分裂过程中自发形成vv将将将将外外外外源源源源性性性性端端端端粒粒粒粒整整整整合合合合入入入入哺哺哺哺乳乳乳乳动动动动物物物物染染染染色色色色体体体体,可可可可将将将将该该该该染染染染色色色色体体体体截截截截断断断断,同同同同时时时时在在在在断断断断端端端端产产产产生生生生新新新新的的的的端端端端粒粒粒粒。研研研研究究究究者者者者们们们们应应应应用用用用这这这这种种种种技技技技术术术术修修修修剪剪剪剪哺哺哺哺乳乳乳乳动动动动物物物物染染染染色色色色体体体体，成成成成功功功功构构构构建建建建了了了了一一一一系系系系列列列列大大大大小小小小在在在在6 6之之之之间间间间不不不不等等等等。最最最最初初初初，端端端端粒粒粒粒整整整整合合合合的的的的位位位位点点点点是是是是随随随随机机机机的的的的，而而而而现现现现在在在在，研研研研究究究究者者者者们们们们能能能能够够够够将将将将端端端端粒粒粒粒定定定定点点点点插入染色体中特定的位点。插入染色体中特定的位点。插入染色体中特定的位点。插入染色体中特定的位点。（2）自下而上的策略）自下而上的策略该策略是在细胞内或者细胞外将着丝粒该策略是在细胞内或者细胞外将着丝粒、端粒以及复制起点装配在一起，从、端粒以及复制起点装配在一起，从而构建而构建HAC。vv研研研研究究究究者者者者应应应应用用用用这这这这种种种种策策策策略略略略，在在在在10801080细细细细胞胞胞胞中中中中得得得得到到到到了了了了第一种。第一种。第一种。第一种。vv他他他他们们们们将将将将11的的的的人人人人1717号号号号染染染染色色色色体体体体的的的的 卫卫卫卫星星星星、人人人人端端端端粒粒粒粒、人人人人基基基基因因因因组组组组随随随随机机机机片片片片段段段段用用用用脂脂脂脂质质质质体体体体共共共共转染转染转染转染10801080细胞。细胞。细胞。细胞。vv经经经经过过过过重重重重组组组组，那那那那些些些些同同同同时时时时含含含含有有有有着着着着丝丝丝丝粒粒粒粒、端端端端粒粒粒粒、复复复复制制制制起起起起点点点点且且且且按按按按照照照照正正正正常常常常染染染染色色色色体体体体结结结结构构构构顺顺顺顺序序序序的的的的重重重重组组组组连连连连接接接接产产产产物物物物以以以以染染染染色色色色体体体体的的的的形形形形式式式式稳稳稳稳定定定定保保保保存存存存下下下下来来来来，而而而而那那那那些些些些不不不不完完完完整整整整或或或或未未未未按按按按照照照照正正正正常常常常顺顺顺顺序序序序连连连连接接接接的的的的产产产产物物物物因因因因其其其其不不不不能能能能稳稳稳稳定定定定地地地地进进进进行行行行有有有有丝丝丝丝分分分分裂裂裂裂而而而而丢丢丢丢失失失失、降降降降解解解解。由由由由此此此此通通通通过过过过有有有有丝丝丝丝分分分分裂裂裂裂而而而而自自自自然然然然筛筛筛筛选选选选出出出出。质粒质粒受体细胞受体细胞结构结构插入片断插入片断举例举例 E.coliE.coli环状环状 8kb 8kbp pUCUC18/19,T-18/19,T-载体载体pGEM-3zpGEM-3z等等 噬菌体噬菌体E.coliE.coli线状线状9-24kb9-24kbEMBLEMBL系列，系列，gtgt系列系列丝状噬菌体及噬菌粒丝状噬菌体及噬菌粒E.coliE.coli环状环状 10 kb 10 kbM13mpM13mp系列系列粘粒载体粘粒载体E.coliE.coli环状环状35-45kb35-45kbpJB8,c2RB,pJB8,c2RB,pcoslEMBL,pcoslEMBL,pWE15/16,pCV pWE15/16,pCV BAC(Bacterial BAC(Bacterial Artificial Artificial ChroChromomosome)some)E.coliE.coli环状环状300 kb300 kbPel oBACPel oBAC系列系列PAC(P1-derived PAC(P1-derived Artificial Artificial chromosome)chromosome)E.coliE.coli环状环状100-2000 kb100-2000 kbPCYPAC1PCYPAC1YAC(Yeast Artificial YAC(Yeast Artificial chromosome)chromosome)酵母细胞酵母细胞线性染色体线性染色体100-1000 kb100-1000 kbMAC(Mammalian MAC(Mammalian Artificial Artificial Chromosome)Chromosome)哺乳类细胞哺乳类细胞线性染色体线性染色体 1000 kb 1000 kb病毒载体病毒载体动物细胞动物细胞环状环状SV40 SV40 载体，昆虫载体，昆虫杆状病毒载体杆状病毒载体穿梭载体穿梭载体动物细胞动物细胞和细菌和细菌环状环状pSVK3pSVK3质粒，质粒，PBV,PBV,TiTi质粒质粒载体的种类和特征