生化药物制造工艺酶类药物.ppt

第四节酶类药物第四节酶类药物一、酶类药物的原料来源一、酶类药物的原料来源（一）原料选择（一）原料选择 选料应注意以下几点：选料应注意以下几点：（1）不同酶的原料选择原料选择。（2）注意不同生生长长发发育育情情况况及及营营养养状状况况：微生物制酶，故需测测其其活活力力来决定取取酶酶阶阶段段。要考虑动物年年龄龄及饲养条件及饲养条件等因素；（3）从原料来源是否丰富考虑）从原料来源是否丰富考虑；（4）从简化提纯步骤着手。）从简化提纯步骤着手。（5）如用动动物物组组织织作原料，则此动物宰宰杀杀后后应应立立即即取材取材。从动物或植物动物或植物中提取酶受到原料的限制原料的限制。用微生物发酵法微生物发酵法生产药用酶药用酶，不受季节、气候和地域的限制，生产周期短，产量高，成本低，能大规模生产。（二）微生物酶制剂高产菌株的选育（二）微生物酶制剂高产菌株的选育 菌种是工业发酵生产酶制剂生产酶制剂的重要条件。目前，优良菌种优良菌种的获得有三条途径三条途径：是从自然界分离筛选分离筛选；是用物理或化学方法物理或化学方法处理、诱变诱变；是用基因重组与细胞融合技术基因重组与细胞融合技术。微生物的分离筛选分离筛选是一切工作的基础。（三）微生物酶制剂生产的发酵技术（三）微生物酶制剂生产的发酵技术 有了优良的生产菌株，只是酶生产的先决条件，要有效地进行生产还必须探索菌株产酶的最最适适培培养养条条件件。首先要合合理理选选择择培培养养方方法法、培培养养基基、培培养养温温度度、pH和通气量和通气量等。在工业生产中还要摸索一系列工程和工艺条件，如培养基的灭灭菌菌方方式式、种种子子培培养养条条件件、发发酵酵罐罐的的型型式式、通气条件、搅拌速度、温度和通气条件、搅拌速度、温度和pH调节控制调节控制等。还要研究酶的分分离离提提纯纯技技术术和制备工艺，这些条件的综合结果综合结果将决定酶生产酶生产本身的经济效益。二、酶类药物的提取和纯化二、酶类药物的提取和纯化（一）生物材料的预处理（一）生物材料的预处理 一般应避避免免剧剧烈烈处处理理，但如是结结合合酶酶，则必须进行剧烈处理剧烈处理。1、动物材料的预处理、动物材料的预处理（1）机械处理）机械处理 用绞肉机绞，一般细细胞胞并并不不破破碎碎，而有的酶必必须须细细胞胞破破碎碎后才能有效地提取，因此须采用特特殊殊的的匀匀浆浆才行。在实验室常用的是玻璃匀浆器和组织捣碎器玻璃匀浆器和组织捣碎器。工业上可用高压匀浆泵高压匀浆泵。（2）反复冻融）反复冻融 由于细胞中冰冰晶晶的的形形成成，及剩下液体中盐盐浓浓度度的的增增高高，能使细细胞胞中中颗颗粒粒及及整整个个细细胞胞破破碎碎，从而使使某某些些酶释放酶释放出来。（3）丙酮粉）丙酮粉 组织经丙酮迅迅速速脱脱水水干干燥燥制制成成丙丙酮酮粉粉，不仅可减减少少酶酶的的变变性性，同时因细细胞胞结结构构成成分分的的破破碎碎使蛋蛋白白质质与与脂脂质质结合的某某些些化化学学键键打打开开，促使某些结结合合酶酶释释放放到溶液中，真空干燥即得丙酮粉丙酮粉。丙酮粉在低温下低温下可保存数年。保存数年。2、微生物的预处理、微生物的预处理 要是酶是胞胞外外酶酶，则可除除去去菌菌体体后后再直接从发酵液中吸附提取酶。但对胞胞内内酶酶则需将将菌菌体体细细胞胞破破壁壁，制成无细胞的悬液无细胞的悬液后再行提取。（1）干燥法）干燥法 干燥方法很多，常见有空空气气干干燥燥、真真空空干干燥燥和和冷冷冻冻干燥干燥三种。（2）机械法）机械法 常用的方法有研研磨磨法法，组组织织匀匀浆浆法法，超超声声波波法法，高压匀浆法高压匀浆法等。（3）酶法处理）酶法处理 用得最多的是溶溶菌菌酶酶，也有用脱脱氧氧核核糖糖核核酸酸酶酶处处理理，操作与溶菌酶同。（二）酶的提取（二）酶的提取 一般在提取前，应通过调调查查研研究究，文文献献检检索索，详详细了解欲提取酶的性质细了解欲提取酶的性质。提取方法主要有水水溶溶液液法法，有有机机溶溶剂剂法法和和表表面面活活性剂性剂法三种。1、水溶液法、水溶液法 常用稀稀盐盐溶溶液液或或缓缓冲冲液液提提取取。为了防止提取过程中酶活力降低，一般在低温下操作低温下操作。2、有机溶剂法、有机溶剂法 某些结结合合酶酶如微微粒粒体体和和线线粒粒体体膜膜的的酶酶，由于和脂质牢固结合，用水溶液很难提取，为此必须除除去去结结合合的脂质的脂质，且不能使酶变性酶变性。最常用的有机溶剂是丁醇丁醇。丁醇具有下述性能：丁醇具有下述性能：亲脂性强亲脂性强，特别是亲磷脂的能力；兼具亲水性兼具亲水性，在0在水中的溶解度为10.5；在脂与水分子间脂与水分子间能起类似去垢剂的桥梁作用类似去垢剂的桥梁作用。3、表面活性剂法、表面活性剂法 表面活性剂分子具有亲亲水水性性的的或或疏疏水水性性的原子基团。表表面面活活性性剂剂能能与与蛋蛋白白质质结结合合而分散在溶液中，故可用于提取结合酶提取结合酶，但此法用得较少。（三）酶制剂的工业提取法（三）酶制剂的工业提取法 工业生产的酶有二种剂型二种剂型液体制剂和粉剂液体制剂和粉剂1、发酵液的预处理及过滤、发酵液的预处理及过滤 现在处理方法处理方法是，在发酵液中加絮凝剂或凝固剂絮凝剂或凝固剂。微生物发酵液的分离，过滤，常采用的设备是转鼓式真空吸滤机、离心沉降分离机和板框压滤机真空吸滤机、离心沉降分离机和板框压滤机。2、酶液的脱色、酶液的脱色 工业上廉价的脱色剂是活活性性炭炭，用量通常为0115。目前工业上大规模使用脱脱色色树树脂脂国内生产的几种脱色树脂脱色树脂，效果都较好。3、盐析法、盐析法 盐析法的优优点点是在常常温温下下不会造成酶的失活，若分分级级沉沉淀淀应应用用得当，杂蛋白杂质也较少，适用于多多种种酶沉淀酶沉淀。4、有机溶剂法、有机溶剂法 用有机溶剂沉淀蛋白质及用分分级级沉沉淀淀法法纯化蛋白质。工业上通常采用乙醇作为沉淀剂乙醇作为沉淀剂。5、喷雾干燥直接制各粉末酶制剂、喷雾干燥直接制各粉末酶制剂 喷喷雾雾干干燥燥有很大局限性，尤其药用酶制剂都很难过温度这一关温度这一关。喷雾干燥喷雾干燥用于菌体干燥菌体干燥，而药用酶常用冷冻干燥药用酶常用冷冻干燥。除上述方法外，工业上提取酶制剂提取酶制剂的方法还有丹丹宁沉淀法宁沉淀法、白土活性氧化铝吸附法、白土活性氧化铝吸附法、pH或加热沉淀或加热沉淀法、蛋白质表面变性法法、蛋白质表面变性法等。（四）酶的纯化（四）酶的纯化 酶的纯化。评价主要看二个指标，一是酶酶比比活活，二是总活力回收二是总活力回收。本节重点讨论酶在纯化过程中遇到的一些技术难点。技术难点。1、杂质的除去、杂质的除去 酶提取液中，除所需酶外，还含有大量的杂杂蛋蛋白白、多糖、脂类和核酸多糖、脂类和核酸等。（1）pH和加热沉淀法和加热沉淀法 利用蛋蛋白白质质酸酸碱碱变变性性性性质质的差别可以通过调调pH和和等等电电点点除去某些杂蛋白，也可利用不同蛋白质对热稳定的差异，使杂蛋白变性杂蛋白变性而沉淀。（2）蛋白质表面变性法）蛋白质表面变性法 利用蛋白质表面变性性质的差别，也可除去杂蛋白。例如：加入三三氯氯甲甲烷烷和和乙乙醇醇进行震荡，可以除除去去杂杂蛋蛋白白。（3）选择性变性法）选择性变性法 利用蛋蛋白白质质稳稳定定性性的不同，除去杂蛋白。甚至可用25三三氯氯乙乙酸酸处理，这时其他杂杂蛋蛋白白都都变变性性而沉淀。（4）核酸沉淀剂法）核酸沉淀剂法 在用微生物制备酶时，常含有较多的核酸，为此，可用核酸酶核酸酶，将核酸降解成核苷酸核酸降解成核苷酸。也可用一些核核酸酸沉沉淀淀剂剂如二二甲甲基基十十六六烷烷基基溴溴化化铵铵、硫酸链霉素、聚乙烯亚胺、鱼精蛋白和二氯化锰硫酸链霉素、聚乙烯亚胺、鱼精蛋白和二氯化锰等：（5）将酶与底物结合）将酶与底物结合，酶和底物结合或竞争性抑制剂结结合合后后，稳定性大大提高，这样就可用加热法除去杂蛋白加热法除去杂蛋白。2、脱盐和浓缩、脱盐和浓缩（1）脱脱盐盐 酶的提纯以及酶的性质研究中，常常需要脱盐。最常用的脱盐方法是透析和凝胶过滤透析和凝胶过滤。（2）浓浓缩缩 酶的浓缩方法很多，有冷冷冻冻干干燥燥、离离子子交交换、超滤、凝胶吸水、聚乙二醇吸水换、超滤、凝胶吸水、聚乙二醇吸水等。3、酶的结晶、酶的结晶 把酶提纯到一定纯度以后（通常纯纯度度应应达达50以以上上），可使其结晶，但伴随着结晶的形成，酶酶的的纯纯度度经常有一定程度的提高提高。酶的结晶既是提纯的结果，也是提提纯纯的的手手段段，此外，为研究蛋白质空间结构提提供供射射线线衍衍射射样样品品，也是酶的结晶的重要目标重要目标之一。（1）酶的结晶方法）酶的结晶方法 酶的结晶方法主要是缓慢地改变酶蛋白的溶解度，使其略处于过饱和状态略处于过饱和状态。改改变变酶酶溶溶解解度度的方法很多，一般新新样样品品往往要使用几种方法几种方法才能得到结晶。盐析法。盐析法。在适当的pH、温度温度等条件下，保持酶的稳定，慢慢改变盐浓度改变盐浓度进行结晶。结晶时采用的盐有硫酸铵、柠檬酸钠、乙酸钠、硫酸铵、柠檬酸钠、乙酸钠、硫酸镁和甲酸钠硫酸镁和甲酸钠等。有机溶剂法有机溶剂法。酶液中滴加有机溶剂，有时也能使酶形成结晶。结晶用的有机溶剂有：乙乙醇醇、丙丙醇醇、丁丁醇醇、乙乙腈腈、异异丙丙醇醇、二二恶恶烷烷、二二甲甲亚亚砜砜、二二氧氧杂杂环环己己烷烷等。用有机溶剂法易引起酶失活易引起酶失活。复合结晶法复合结晶法。有时可以利用某某些些酶酶与有有机机化化合合物物或或金金属属离离子子形成复合物或盐复合物或盐的性质来结晶。透析平衡法。透析平衡法。对一定的盐盐溶溶液液或或有有机机溶溶剂剂进行透析平衡，这时酶液可缓慢地达到过饱和缓慢地达到过饱和而析出结晶。等电点法。等电点法。一般地说，在等等电电点点附附近近酶酶的的溶溶解解度度很很小小，这一特征为酶的结晶条件结晶条件提供了理论根据。（2）结晶条件的选择）结晶条件的选择 在进行酶酶的的结结晶晶时，要选择一定条条件件与与相相应应的的结结晶晶方方法法配合。这不仅为了能够得到结晶，也是为了保证不引起酶活力丧失酶活力丧失。影响酶结晶因素很多，下列几个条件尤为重要：酶的纯度酶的纯度。总的来说酶的纯纯度度越越高高，结结晶晶越越容容易易，长成大大的的单晶单晶可能性也越大。酶的浓度酶的浓度。结晶母液通常应保保持持尽尽可可能能高高的的浓浓度度。酶的浓浓度度越越高高越有利于溶液中溶质分子间的相互碰撞聚合，形形成成结结晶晶的的机机会会也也越越大大，对大多数酶来说，蛋白质浓度为510mgml为好。温度温度。结晶的温度通常在4下下或或室室温温25下下，低温条件下酶不仅溶解度低溶解度低，而且不易变性不易变性。时间时间。结晶形成的时间长短不一，从数数小小时时到到几几个个月月都有，有的甚至需要1年或更长时间年或更长时间。pH。除沉淀剂的浓度外，在结晶条件方面最最重重要要的的因因素素是是pH。结晶溶液pH一般选择在被结晶酶的等电点附近等电点附近。金金属属离离子子。许多金金属属离离子子能引起或有助于酶酶的的结结晶晶，在二二价价金金属属离离子子存在情况下，有促促进进结结晶晶长长大大作作用用。晶晶种种。不易结晶的蛋白质和酶，有的需加入微量的晶种才能结晶。生长大的单晶时，也可引入晶种。结结晶晶器器皿皿处处理理。结晶用的器皿要充充分分清清洗洗、烘烘干干。使用前用结结晶晶母母液液再再冲冲洗洗一一次次，也可用压压缩缩空空气气或或惰惰性气体吹去灰尘性气体吹去灰尘。用于长结晶的玻璃器皿，可用硅硅涂涂料料进进行行表表面面处处理理，以使表表面面光光滑滑且且不不润润湿湿。这样可减减少少晶晶核核数数目目，有助于形成大的单晶。4、酶分离和纯化工作中的注意事项、酶分离和纯化工作中的注意事项 酶是蛋白质，一般不不太太稳稳定定。提纯过程中，酶酶纯纯度度越越高高，就就越越不不稳稳定定，酶分离纯化时尤其要注注意意以以下下几几点：点：（1）防防止止酶酶蛋蛋白白变变性性 为防止酶蛋白变性，应避免pH过过高高或或过过低低，应避避免免高高温温。一般要在中中性性pH和和低低温温（4左左右右）下下操操作作。为防止酶蛋白的表表面面变变性性，不不可可剧剧烈烈搅搅拌拌，以免产产生生泡泡沫沫。应避免酶酶和和重重金金属属或其他蛋白变性剂接触。如要用有机溶剂处理酶液，操作尽可能在低温下，短时间内低温下，短时间内进行。（2）防防止止辅辅因因子子的的流流失失 有些酶除酶蛋白外，还含有辅辅酶酶、辅辅基基和和金金属属等等辅辅因因子子。在进行超超滤滤、透透析析等操作时，要防止这些辅因子的流失防止这些辅因子的流失。（3）防防止止酶酶被被蛋蛋白白水水解解酶酶降降解解 在提取液尤其微生物培养液中，常常同时存在一些蛋蛋白白水水解解酶酶，要及时采取有效措施将它们除去。如果操作时间长，还要防防止止杂杂菌菌污污染染酶酶液液，造成所需要酶的失活酶的失活。三、重要酶类药物的制备三、重要酶类药物的制备（一）药用酶类的概述（一）药用酶类的概述 现在国内外已广泛应用于多种疾病的治疗，其制制剂品种剂品种已超过700余种余种。1、与治疗胃肠道疾病有关的酶类药物、与治疗胃肠道疾病有关的酶类药物 利用酶作为消化促进剂消化促进剂，早已为人们所采用。2、消炎酶类、消炎酶类3、与纤维蛋白溶解作用有关的酶类与纤维蛋白溶解作用有关的酶类4、抗肿瘤的酶、抗肿瘤的酶5、其它药用酶、其它药用酶1、胃蛋白酶、胃蛋白酶（Pepsin，EC3.4.4.1）胃胃蛋蛋白白酶酶广泛存在于哺乳类动物的胃胃液液中，药用胃蛋白酶系从猪、牛、羊猪、牛、羊等家畜的胃粘膜中提取胃粘膜中提取。（1）组成（结构）、性质）组成（结构）、性质 药用胃胃蛋蛋白白酶酶是胃液中多多种种蛋蛋白白水水解解酶酶的混混合合物物，含有胃胃蛋蛋白白酶酶、组组织织蛋蛋白白酶酶、胶胶原原酶酶等，为粗制的酶制剂。水溶液呈酸性酸性，难溶于乙醇、氯仿乙醇、氯仿等有机溶剂。pI为为，最适最适。可溶于可溶于70乙醇和乙醇和pH4的的20乙醇中。乙醇中。胃蛋白酶胃蛋白酶能水解大多数天然蛋白质水解大多数天然蛋白质底物。（2）生产工艺）生产工艺1）工艺路线：）工艺路线：胃蛋白酶原胃蛋白酶原盐酸盐酸催化催化激活激活成胃蛋白酶胃蛋白酶。常用的脱脂剂脱脂剂有乙醚乙醚、氯仿氯仿、四氯化碳四氯化碳。2）工艺过程：）工艺过程：3）胃胃膜膜素素和和胃胃蛋蛋白白酶酶联联产产工工艺艺：向经消消化化、提提取取、脱脱脂脂、分分层层、浓浓缩缩及60丙丙酮酮沉沉淀淀分分离离胃胃膜膜素素的母母液液中中，边搅拌边加冷冷丙丙酮酮，至，即有淡淡黄黄色色胃胃蛋蛋白白酶酶沉出，静放过夜，去上清液，沉淀真空干燥，即得胃胃蛋蛋白酶白酶。4）结结晶晶胃胃蛋蛋白白酶酶的的制制备备：药用胃蛋白酶原粉，溶于20酒酒精精中，加H2SO4调，5静置20h后过滤，加硫硫酸酸镁镁至饱和，进行盐盐析析。盐析物再在的的乙乙醇醇中中溶解，过滤，滤液用硫硫酸酸调调pH至至，即析出针针状状胃胃蛋蛋白白酶酶。沉淀再溶于20%pH4的的乙乙醇醇中，过滤，滤液用硫酸调pH，在20放置，可得板状或针状板状或针状结晶。2、胰蛋白酶、胰蛋白酶 胰蛋白酶胰蛋白酶是从牛、羊胰脏牛、羊胰脏提取、结晶的冻干制剂。（1）化学组成与性质）化学组成与性质易易溶溶于于水水，不不溶溶于于氯氯仿仿、乙乙醇醇、乙乙醚醚等等有有机机溶溶剂剂。在时，短短时时煮煮沸沸几乎不失活；在碱碱溶溶液液中加热则变性沉淀，Ca2+有保护和激活作用有保护和激活作用，胰蛋白酶的pI为为10.1。牛胰蛋白酶在肠肠激激酶酶或或自自身身催催化化下，释放出6肽肽，变成有活性的胰蛋白酶有活性的胰蛋白酶。胰胰蛋蛋白白酶酶专一作用于由碱碱性性氨氨基基酸酸精精氨氨酸酸及及亮亮氨氨酸羧基所组成的肽键酸羧基所组成的肽键。酶本身很酶本身很容易自溶容易自溶。（2）生产工艺）生产工艺1）工艺路线：）工艺路线：3、尿激酶、尿激酶（Urokinase，EC3.4.99.26）尿尿激激酶酶，是一种碱碱性性蛋蛋白白酶酶。由肾肾脏脏产生，主要存在于人及哺乳动物的尿中哺乳动物的尿中。（1）组成（结构）性质）组成（结构）性质 1）尿中的尿尿胃胃蛋蛋白白酶酶原原，在酸酸性性条条件件下下可以激活生成尿胃蛋白酶尿胃蛋白酶，把天然尿激酶原降解尿激酶原降解成为尿激酶尿激酶。2）尿尿激激酶酶是专一性很强的蛋蛋白白水水解解酶酶，它作用于精精氨氨酸酸-缬缬氨氨酸酸键键使使纤纤溶溶酶酶原原转为纤纤溶溶酶酶。尿尿激激酶酶也具有酯酶活力酯酶活力。3）尿尿激激酶酶的pI为为pH89，主要部分在左左右右。溶溶液液状状态态不不稳稳定定，冻干状态可稳稳定定数数年年。加入1EDTA、人血白蛋白或明胶人血白蛋白或明胶可防止酶的表面变性表面变性作用。（2）生产工艺）生产工艺1）工艺路线：）工艺路线：2）工艺过程：）工艺过程：molL氯化钠洗脱洗脱。QAESephadex层析柱 去热原、热原、色素色素。CMC浓缩浓缩。4、蚯蚓纤溶酶、蚯蚓纤溶酶 本本草草纲纲目目中记载蚯蚓又称地地龙龙、曲曲蟮蟮，能活血化淤，主治肢体麻木，口眼歪斜语言障碍，半身不遂等。近代生物学家发现，蚯蚓死后，其死体能很快的自行溶解。经研究揭示，蚯蚓体内存在有纤纤维维蛋蛋白白水水解解酶酶及及纤纤维维蛋蛋白白酶酶原原激激活活物物质质而使其死体自自行行溶溶解解。人们以人工养殖的蚯蚓为原料，获得一组能水水解解纤纤维维蛋蛋白白的的活活性性物物质质，称为蚯蚯蚓蚓纤纤溶溶酶酶。经药理实验证明，对体内、体外血血栓栓和和纤纤维维蛋蛋白白均有明显的溶解作用，能使纤维蛋白的精精氨氨酸酸及及赖赖氨氨酸酸羧羧基基端端链链水水解解，又又能能激激活活纤纤溶溶酶酶原原转转化化成成纤纤溶溶酶酶，具有双重作用，溶栓更迅速，更彻底。（1）化学组成和性质）化学组成和性质 蚯蚯蚓蚓纤纤溶溶酶酶是一组蛋白水解酶类。蚯蚓的种类不同，其含酶酶量量和和酶酶的的活活性性也不同活性组分的相相对对分分子子量量通通常常在在2000070000。呈白白色色或或微微黄黄色色粉末，易溶于水，最适最适pH8，加热，加热70全部失去活力。制备时，常选用赤赤子子爱爱胜胜蚓蚓、锯锯齿齿远远蚓蚓、太太平平2号号蚓蚓（赤子爱胜蚓与美国红蚯蚓杂交种）、湖湖北北环环毛毛蚓蚓）等。2）以赤子爱胜蚓为原料制备蚯蚓纤溶酶蚯蚓纤溶酶 取人工养殖蚯蚓放入水中浸浸泡泡1h，尽量排出内脏污物，洗净，于组织捣碎机中匀匀浆浆，再加入等体积01molL NaCl液液，于冰箱中提取6h，以6000rmin离离心心20min，弃取沉淀，上清液加固体（NH4）2SO4至至70饱饱和和度度，冰箱放置过夜，次日过滤，收集沉淀，透透析析去盐，以8000rmin离离心心30min，上清液冷冻干燥，得蚯蚓纤溶酶粗品。将粗粗品品经SephadexG175柱柱凝凝胶胶过过滤滤，分出3个组分，纤溶活性几种在B峰。将B峰合并，透析，冷冻干燥。取B峰40mg在DEAESephadexCL6B柱上层析分离，层析柱以002molL，pH 78磷酸盐缓冲液平衡，样品上柱，用用NaCl溶溶液液进进行行梯梯度度洗洗脱脱，其中峰B至峰至峰B有纤溶活性。5、溶菌酶、溶菌酶（Lysozyme）溶溶菌菌酶酶，又称胞胞壁壁质质酶酶或N-乙乙酰酰胞胞壁壁质质聚聚糖糖水水解解酶酶。它广泛存在于鸟鸟类类和和家家禽禽的蛋蛋清清、哺乳动物的泪泪、唾唾液液、血血浆浆、尿尿、乳乳汁汁、白白细细胞胞和和组组织织（如如肝肝、肾肾）细胞内细胞内，其中以蛋清含量最丰富蛋清含量最丰富。溶溶菌菌酶酶是一种具有杀杀菌菌作作用用的的天天然然抗抗感感染染物物质质，具有抗菌、抗病毒、抗炎症抗菌、抗病毒、抗炎症。（1）组成（结构）和性质）组成（结构）和性质 溶菌酶溶菌酶是一碱性球蛋白碱性球蛋白，分子中碱性氨基酸碱性氨基酸、酰氨酰氨残基残基及芳香族氨基酸芳香族氨基酸（如色氨酸）比例很高。溶溶菌菌酶酶能催化粘粘多多糖糖或或甲甲壳壳素素中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的-1，4糖苷键糖苷键。溶菌酶溶菌酶是一种罕见的稳定蛋白质稳定蛋白质。在pH5.5加热加热4h后，酶变得更活泼。低浓度的低浓度的Mn（10-7molL）在中性和碱性条件中性和碱性条件下下能使酶免受热的失活作用免受热的失活作用。（2）生产工艺）生产工艺1）工艺路线）工艺路线