Waters-Xevo-TQS液相色谱质谱操作(共6页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)操作指南1. 适用范围：本使用规范适用于有机室所备有的Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)。2. 仪器设备的主要技术指标：1) 梯度性能：保留时间标准偏差（SD）0.047min。2) ESI正离子灵敏度和精密度：测试样品：磺胺二甲基哒嗪(Sulfadimethoxine)，浓度：0.1pg/l指标要求：平均信噪比（S/N）3000:1；平均峰面积60000；峰面积相对标准偏差（%RSD）3.0%；保留时间标准偏差（SD）0.047min测试结果：信噪比（S/N）:4500psi；峰面积：；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.5%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。3) ESI负离子灵敏度和精密度：测试样品：氯霉素(chloramphenicol)，浓度：0.05pg/l指标要求：平均信噪比（S/N）400:1；平均峰面积1000；峰面积相对标准偏差（%RSD）3.0%；保留时间标准偏差（SD）0.047min测试结果：信噪比（S/N）:520psi；峰面积：1500；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.8%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。4) 系统精密度（TUV/PDA）：峰面积相对标准偏差（%RSD）0.5%；峰高相对标准偏差（%RSD）0.9%。5) NanoFlow正离子灵敏度 指标要求：峰强（m/z =785.8）1×107，测试样品： Glu-Fibrinopeptide B，浓度：100fmol/l测试结果：峰强度（m/z =785.8）：1.48×107；符合指标要求。6) TRIZAIC正离子模式MS说明：测试样品：ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59, ENL T43, ADH T17, BSA T10, PHO T88指标要求：保留时间标准偏差：0.25%测试结果：ADH T19：标准偏差为 0.02% (23.77min)；PHO T33：标准偏差为0.03% (25.12min)；ENL T4：标准偏差为0.02% (21.83min)；BSA T59：标准偏差为0.01% (21.58min)；ENL T43：标准偏差为0.04% (22.33min)；ADH T17：标准偏差为0.03% (23.31min)；BSA T10：标准偏差为0.02% (24.41min)；PHO T88：标准偏差为0.03% (24.81min)7) 系统性能测试一维系统精密度测试：测试样品17-OHP。一维保留时间重复性(PDA)指标：保留时间标准偏差(SD): 1.0s；一维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD): 0.5%；一维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD): 0.9%；二维系统精密度测试：测试样品17-OHP。二维保留时间重复性(PDA)指标：保留时间标准偏差(SD): 1.0s；二维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD): 0.5%；二维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD): 0.9%；所有检测方式的回收率指标：90.0%3. 仪器设备的使用环境要求： 1) 电力要求：仪器室电源要求相对稳定，电压变化要小，最好配备不间断稳压电源，防止意外停电。2) 工作温度：19-22度，不要超过25，保持恒温。3) 相对湿度：50%-70%4. 操作程序： 4.1 开机4.1.1 打开电脑，首先打开自动进样器电源，再逐一打开质谱电源和UPLC各电源，各部件通过自检后，双击工作站图标进入Masslynx工作站。4.1.2 选择InstrumentMS Tune进入调谐界面。从调谐界面选择Vacuunpump，打开真空泵，开始抽真空。机械泵和涡轮分子泵开始工作。4.1.3 质谱上的真空灯开始闪烁，当系统达到真空状态，灯变为绿色，不再闪烁，同时观察调谐界面DiagnosticsTurbo Speed 泵转速达到100%即可，达到实验状态大约要抽真空4小时（注意：真空规，测量工具，无异常状况通常无需打开，尤其在刚开始抽真空时不要打开。）4.1.4 气源压力设置：氮气：90-100psi。氩气：0.05Mpa，不超过0.1Mpa（实验前确认氩气瓶压力，低于1Mpa时需更换氩气。）4.2 准备UPLC系统4.2.1 准备流动相：用0.22m的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天。缓冲盐一定要可挥发的，而且浓度在2mM-5mM之间，不要超过10mM（注：若流动相含有缓冲盐，用完需使用大比例水相长时间冲洗系统和色谱柱，若流动相含有酸，必须为挥发性酸，浓度范围为0.01%-0.1%，进样器高压密封垫要求PH2，不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等离子对试剂）。有机相要使用原装进口的色谱纯。（2） SW+Purge（弱洗：10%ACN+90%纯水或者与流动相梯度初始比例相同）用于清洗泵头和密封清洗；Wash（强洗：90%ACN+10%纯水）；（3）准备样品：所有样品最好都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22m的膜过滤。4.2.2 初始化UPLC泵：在Masslynx主页面上点击MS Console，进入系统控制界面，点击左边Quaternary Solvent Manager选择CONTROLPrime A/B/C/D solvent，选择A/B/C/D输入1min，如果更换了流动相则输入3min，按start。4.2.3 初始化UPLC自动进样器：UPLC控制台上选择Sample Manager，选择ControlPrime syrings，灌注进样器和洗针系统。选择Sample syringe and syringes， Number of cycles 一般选1，但在更换洗针溶液后选3。完成后，UPLC自动进样器准备好。4.2.4 灌注完泵和自动进样器后UPLC准备好。4.3 建立一个Project如果在已有的Project下进行试验，此步可以不做。从Masslynx主窗口选择FileProject Wizard，出现对话窗口，点击Yes，输入Project Name，选择Create using existing project as template.点击Browse选择project的模板。 4.4 准备质谱如果在已有的Project下进行试验，此步可以不做。 4.4.1 MS Tune，首先打开氮气，再开高压（红色表示高压已关，绿色表示高压已开）。（注：一定要打开氮气和高压才能开流动相，关闭流动相后才能关高压和氮气）。4.4.2点击ES+ Source. 输入以下各参数: Capillary (kV): 3；Cone (V): 30；DesolvationTemp (): 550；Desolvation(L/hr): 800；Cone (L/Hr): 50；以下参数最好直接使用intellistart自动校正仪器质量数时自动生的参数：LM Resolution 1: 3；HM Resolution 1: 15；Ion Energy 1: 0.5；LM Resolution 2: 3；HM Resolution 2: 15；Ion Energy 2: 0.5；Collision: 2。4.5 ESI调谐调出目标化合物的最佳质谱参数。4.5.1把调谐液放入A/B/C号位（注：浓度在0.1-1ppm之间，根据实际的灵敏度调整样品浓度）。4.5.2把流动相的流速设为0.2ml/min，有机相和水相比例为1:1。点击Tune界面下的Fluidics，点击Purge syringe 灌注注射器。设置Infusion 流速5uL/min，根据灵敏度可适当调整。设置Flow State模式（Infusion:直接进样；Combined:液相和样品混合进样；LC:液相进样； Waste:废液）。4.5.3 选择Xevo TQ-S MS Detector下面的IntelliStart：Sample Tune and Develop Method 点击Start，调出界面，输入各参数，系统开始自动优化目标化合物的质谱参数。4.6建立质谱的MRM方法。选择InstrumentMS Method进入质谱方法编辑界面。打开新建质谱方法窗口，再点击MRM，按调谐结果输入下列参数：离子模式、化合物名称、母离子质量数、子离子质量数、离子驻留时间、锥孔电压、碰撞能量和MRM运行时间等。4.7建立UPLC方法。选择InstrumentInlet Method进入UPLC方法编辑界面。逐一编辑泵的方法、自动进样器的方法和紫外检测器的方法等。最后把UPLC的方法命名保存。4.8建立样品运行序列表，运行采集数据。在Masslynx主界面上点击FileNew，新建序列表，输入文件名、注释、质谱方法、液相方法、瓶号、进样体积等参数，最后把编辑好的序列表命名保存。4.9处理数据。4.10 关机 一般质谱仪部分不需要关机，不用时只要保持在Standby状态下即可。但如果长时间不用，或是对仪器进行清洗和维修时需要关机。 4.10.1 首先停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。4.10.2 点击MS Tune进入调谐窗口，点击Standby，关闭高压，让MS进入待机状态时，指示灯会由绿色变成红色。4.10.3 等脱溶剂气温度降到常温，关闭氮气。4.10.4 选择OptionVent，这时质谱开始泄真空，待机械泵停止运行，同时观察调谐界面DiagnosticsTurbo Speed 泵转速为0时即可关闭质谱电源。5. 仪器基本维护与使用注意事项：5.1 仪器室要保持整洁、干净、无尘；配套设施布局合理。5.2 开高压之前一定要先开氮气，关氮气之前一定要先关高压。5.3 溶剂和流动相的要求，所有的流动相都要用0.22m的滤膜过滤，水相要用前新配，并不得超过两天。样品必须使用0.22m的滤膜过滤。 5.4 ESI离子化与溶剂密切相关，在使用某些溶剂和添加物需要注意以下几个方面：三氟乙酸（TFA）多用于蛋白质和多肽分析，但对ESI离子化有抑制效应：三乙胺（TEA）在m/z 102处有较强的M+H+峰，有可能会抑制某些碱性化合物在正离子ESI条件下的离子化，也有可能会增强某些碱性化合物在负离子ESI条件下的响应。注意！下列的溶剂添加剂会产生严重的离子化抑制，建议禁用：强酸强碱、不挥发性酸及相应的盐（如磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等）、表面活性剂、离子对试剂。5.5 定期清洗样品锥孔：关闭隔断阀，取下样品锥孔，先用甲醇：水：甲酸（45:45:10）的溶液超声清洗20min，然后分别用超纯水和甲醇各溶液超声清洗10分钟，待晒干后再安装到仪器上。当灵敏度下降时，需要清洗Ion Block、二级锥孔和RF lens。5.6 实验完毕要清洗进样针、进样阀等，用过含酸的流动相后，色谱柱、离子源都要用甲醇/水冲洗，延长仪器寿命。仪器长时间不用，有管路用纯甲醇灌注。5.7 真空无油泵的密封圈1年更换1次。5.8 系统安全：注意！质谱连接的电脑禁止更改网络设置，禁止安装防火墙。尽量避免使用U盘等移动存储设备。请使用光盘刻录来完成数据的拷贝。6. 突发情况的处理 操作时如果发生电脑死机的情况，一般不需要关闭仪器部分，只需强制关闭电脑主机，重新启动电脑，连接工作站，即可恢复正常。 如果发生停电事故，一般UPS可以保障仪器不会马上断电，但应当根据停电时间长短，采取相应的措施。（长时间断电（3小时以上）建议停机）。专心-专注-专业