纸层析法分离氨基酸.ppt

纸层析法分离氨基酸 指导教师：程靖实验原理实验目的：1）通过对氨基酸的分离，学习运用纸色谱法分离 混合物的基本原理，掌握纸色谱的操作方法；2）学习如何根据不同组分的分离结果来鉴别未知试样的组分。实验原理：纸色谱分离法又称纸层析法，是根据不同物质在两相中的分配比不同而进行分离的一种微量分离方法。纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离 实验原理：实验原理：原点原点展开后展开后斑点斑点溶剂溶剂前沿前沿a1a2bAB实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题 Rf：01，Rf值相差越大，分离效果越好。本实验分离和鉴定的氨基酸混合液：异亮氨酸、赖氨酸和谷氨酸。无色物质的纸色谱可用光谱法（紫外光照射）或显色法鉴定，氨基酸纸色谱图谱常用茚三酮或吲哚醌作为显色剂，本实验采用茚三酮作为显色剂。显色机理：（1）（2）(3)仪器试剂：主要仪器：主要仪器：（1 1）玻璃层析筒）玻璃层析筒 120mm250mm(h)。（2）层析纸条）层析纸条 100mm220mm。（3）毛细管）毛细管 直径直径1mm左右。左右。（4 4）喷雾器）喷雾器 。（5 5）直尺，铅笔，电吹风，一次性手套。）直尺，铅笔，电吹风，一次性手套。主要试剂：主要试剂：（1）展开剂展开剂 正丁醇正丁醇:甲酸甲酸:水水60:12:8。（2）氨基酸标准溶液）氨基酸标准溶液 2 gL-1水溶液。水溶液。（3）茚三酮）茚三酮 1 gL-1乙醇溶液。乙醇溶液。（4）氨基酸混合试液）氨基酸混合试液 将（将（2）配制的三种氨基酸等量混合。）配制的三种氨基酸等量混合。实验操作：1.在层析缸中装入展开剂，其高度约；2.准备滤纸：戴上手套，取层析滤纸一张，在纸的另一端距边缘处用铅笔画一直线，在此直线上每隔2cm作一记号，为点样位置（即原点）；3.点样：用毛细血管依次将异亮氨酸，谷氨酸，赖氨酸和混合样品分别滴在四个位置，点样干后再点一次；注意事项：每个点在纸上扩散的直径，最大不超过3mm；实验步骤实验步骤点点 样样3.0cm3.0cm1 2 3 4 异异亮亮氨氨酸酸赖赖氨氨酸酸谷谷氨氨酸酸混混合合液液各点各点2mm实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题 4.展层：将滤纸直立于层析缸中（点样的一端在下，展开剂的液面需低于点样线1cm，滤纸勿与缸壁接触），盖好层析缸盖，进行展层，待溶剂上升1520cm时，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，电吹风吹干；5.显色：用喷雾器均匀喷上水合茚三酮乙醇溶液，然后用电吹风吹干，即可显出各层析斑点。纸层析结果赖氨酸赖氨酸 异亮氨酸异亮氨酸 谷氨酸谷氨酸 原点到层析斑点中原点到层析斑点中心的距离心的距离 原点到溶剂前沿的原点到溶剂前沿的距离距离 标准标准aaRaaRf f混合混合aaRaaRf f实验处理：思考题：1.纸层析法属于吸附层析还是分配层析，为什么？2.此三种氨基酸还能用什么层析方法进行分离，为什么？