医学微生物学实验一.ppt

医学微生物学医学微生物学实验课件实验课件南华大学病原学实验教学中心南华大学病原学实验教学中心EtiologyExperimentalTeachingCenterofUniversityofSouthChina实验内容实验内容一、显微镜的使用操作及注意事项一、显微镜的使用操作及注意事项二、细菌的形态和特殊结构观察：二、细菌的形态和特殊结构观察：1.自阅片：破伤风杆菌（示芽胞）、变形杆菌（示鞭毛）自阅片：破伤风杆菌（示芽胞）、变形杆菌（示鞭毛）2.示教片：肺炎链球菌（示荚膜）示教片：肺炎链球菌（示荚膜）三、革兰染色法（自做）三、革兰染色法（自做）实验室规则实验室规则微生物学实验要求微生物学实验要求1、微生物无处不在：、微生物无处不在：故要树立有菌观念，实验过程要无菌操故要树立有菌观念，实验过程要无菌操作作;2、实验材料为病原微生物，具有感染性、实验材料为病原微生物，具有感染性1）穿好白大衣，除必要的书籍、记录本及文具外，其他）穿好白大衣，除必要的书籍、记录本及文具外，其他个人用品不得带入实验室；个人用品不得带入实验室；2）实验室禁止饮食，未经许可严禁将实验材料带出实验室）实验室禁止饮食，未经许可严禁将实验材料带出实验室3、按照实验要求，认真积极的完成实验，有些实验需第二、按照实验要求，认真积极的完成实验，有些实验需第二天观察结果，要求同学们亲自观察，并详细记录结果，完天观察结果，要求同学们亲自观察，并详细记录结果，完成实验报告；成实验报告；4、爱护实验器材，实验用过的器材放置指定位置，实验室、爱护实验器材，实验用过的器材放置指定位置，实验室仪器不得乱摸乱碰；实验自阅玻片标本损坏仪器不得乱摸乱碰；实验自阅玻片标本损坏10元元/张；张；5、实验完毕后，整理实验台，值日生负责室内卫生，并负、实验完毕后，整理实验台，值日生负责室内卫生，并负责关门、关窗、关水、关电。责关门、关窗、关水、关电。一、显微镜的使用操作及注意事项一、显微镜的使用操作及注意事项二、二、显显微微镜镜的的使使用用（一）观察前准备（一）观察前准备1.显微镜拿取显微镜拿取显微镜拿取显微镜拿取 2.调节通光量调节通光量调节通光量调节通光量 使用使用油镜油镜油镜油镜时，为使通光量最大，可采用：时，为使通光量最大，可采用：1）光圈光圈光圈光圈开到最大；开到最大；2）聚光器聚光器聚光器聚光器上升到最高；上升到最高；3）低倍（）低倍（10）物镜下，转动）物镜下，转动凹面反光镜凹面反光镜凹面反光镜凹面反光镜，使视野的，使视野的光照达到最明亮光照达到最明亮均匀。均匀。（二）（二）低倍镜低倍镜观察观察粗粗粗粗旋钮调节：物像出现旋钮调节：物像出现细细细细旋钮调节：物像清晰旋钮调节：物像清晰为什么为什么镜检任何标本都要先用低倍镜观察镜检任何标本都要先用低倍镜观察镜检任何标本都要先用低倍镜观察镜检任何标本都要先用低倍镜观察？操作要点操作要点操作要点操作要点（三）（三）高倍镜高倍镜观察观察在低倍镜转换高倍镜（在低倍镜转换高倍镜（40 x）适当调节适当调节细细螺旋即可看到物像螺旋即可看到物像忌使用粗螺旋忌使用粗螺旋忌使用粗螺旋忌使用粗螺旋，否则极易压碎标本甚，否则极易压碎标本甚至损坏物镜。至损坏物镜。操作要点操作要点操作要点操作要点注意注意注意注意（四）（四）油镜油镜观察观察 1.滴油（滴油（不要抹开不要抹开不要抹开不要抹开）2.转换为油镜头，使其浸入香柏油转换为油镜头，使其浸入香柏油3.调节调节细螺旋细螺旋细螺旋细螺旋即可找到物像即可找到物像l油镜头须浸入油中油镜头须浸入油中l不使用粗螺旋，细螺旋也不可无限旋转，否则可压不使用粗螺旋，细螺旋也不可无限旋转，否则可压不使用粗螺旋，细螺旋也不可无限旋转，否则可压不使用粗螺旋，细螺旋也不可无限旋转，否则可压碎玻片及损坏物镜头碎玻片及损坏物镜头碎玻片及损坏物镜头碎玻片及损坏物镜头l光圈需开至最大光圈需开至最大l聚光器须上升至最高聚光器须上升至最高注意注意注意注意4.玻片处理玻片处理5.镜头擦拭：限取镜头擦拭：限取3张擦镜纸张擦镜纸-如香柏油不慎玷污如香柏油不慎玷污非油浸镜头非油浸镜头非油浸镜头非油浸镜头应立即应立即直接直接直接直接拭去拭去（勿用二甲苯）勿用二甲苯）勿用二甲苯）勿用二甲苯）-擦拭时沿一个方向，擦拭时沿一个方向，禁止旋转禁止旋转禁止旋转禁止旋转6.还原各部分还原各部分7.填写显微镜使用登记表填写显微镜使用登记表填写显微镜使用登记表填写显微镜使用登记表注意注意二、细菌的形态和特殊结构观察二、细菌的形态和特殊结构观察（一）（一）细菌的基本形态细菌的基本形态1 1球菌球菌球菌球菌：葡萄球菌葡萄球菌葡萄球菌葡萄球菌(葡萄状排列葡萄状排列)链球菌链球菌(链状排列链状排列)脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌(成双排列成双排列)2 2杆菌杆菌杆菌杆菌：大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌、枯草杆菌等、枯草杆菌等3 3螺形菌螺形菌螺形菌螺形菌：霍乱弧菌等霍乱弧菌等1.荚荚膜膜荚膜与微荚膜概念荚膜与微荚膜概念化学成分化学成分变异变异医学意义医学意义（二）细菌的特殊结构（二）细菌的特殊结构取材：小鼠腹腔渗出液取材：小鼠腹腔渗出液染色法：染色法：Hiss染色染色放大倍数：放大倍数：10X100荚膜菌体肺炎链球菌（示荚膜）肺炎链球菌（示荚膜）肺炎链球菌（示荚膜）肺炎链球菌（示荚膜）2.鞭鞭毛（毛（Flagllum）概念概念数目、位置和排列可不同数目、位置和排列可不同鞭毛是细菌的运动器官鞭毛是细菌的运动器官医学意义：医学意义：变形杆菌（示鞭毛）变形杆菌（示鞭毛）变形杆菌（示鞭毛）变形杆菌（示鞭毛）鞭毛菌体取材：纯培养物取材：纯培养物染色法：鞭毛染色染色法：鞭毛染色放大倍数：放大倍数：10X1003.芽芽胞胞概念概念形状、直径、位置随菌种而不同形状、直径、位置随菌种而不同形成条件形成条件非细菌的繁殖体非细菌的繁殖体抵抗力强抵抗力强医学意义：医学意义：破伤风梭菌（示芽胞）破伤风梭菌（示芽胞）破伤风梭菌（示芽胞）破伤风梭菌（示芽胞）芽胞菌体取材：纯培养物取材：纯培养物染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X1004.菌菌毛毛概念概念在光镜下看不见，使用电镜才能观察到在光镜下看不见，使用电镜才能观察到分类：普通菌毛和性菌毛分类：普通菌毛和性菌毛医学意义医学意义三、革兰氏染色法三、革兰氏染色法常用染色方法常用染色方法单染法单染法：一种染料使细菌着色，如美蓝和复红染色；一种染料使细菌着色，如美蓝和复红染色；复染法复染法：两种或两种以上染料染色，有助于鉴别细菌，两种或两种以上染料染色，有助于鉴别细菌，如革兰染色法和抗酸染色法。如革兰染色法和抗酸染色法。结晶紫结晶紫卢戈碘液液卢戈碘液液酒精酒精复红复红G-菌：菌：类脂质类脂质多多多多肽聚糖肽聚糖少少少少G+菌：菌：肽聚糖肽聚糖多多多多交联度大交联度大类脂质类脂质少少少少渗透性学说渗透性学说渗透性学说渗透性学说：两类细菌的两类细菌的细胞壁细胞壁细胞壁细胞壁成分和结构差异成分和结构差异【原理】【原理】【材料】【材料】1.葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液。葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液。2.革兰染色液。革兰染色液。涂片：涂片：注意无菌操作注意无菌操作注意无菌操作注意无菌操作干干燥燥固固定定染染色色【步骤】【步骤】初染初染：结晶紫染液染结晶紫染液染lminlmin水洗，甩干水洗，甩干 媒染媒染：卢戈氏碘液染卢戈氏碘液染1min1min水洗，甩干水洗，甩干 脱色脱色脱色脱色：酒精脱色约酒精脱色约30s30s水洗，甩干水洗，甩干 复染：复红染液染复红染液染1min1min水洗，甩干水洗，甩干 印干印干印干印干 油镜观检油镜观检染染色色关键步骤！关键步骤！关键步骤！关键步骤！革兰阳性球菌革兰阳性球菌革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌取材：培养混合菌液取材：培养混合菌液放大倍数：放大倍数：100X10革兰染色结果革兰染色结果【结果】【结果】作作业业1、细菌特殊结构绘图、细菌特殊结构绘图2、革兰染色法的完全实验报告（实验名称、目的、革兰染色法的完全实验报告（实验名称、目的、材料、步骤、结果、分析、结论）材料、步骤、结果、分析、结论）