实验五细菌的芽孢染色法.ppt

实验五 细菌的芽孢染色法主讲教师：雒晓芳主讲教师：雒晓芳实验目的学习并掌握芽孢染色法初步了解芽孢杆菌的形态特征实验原理芽孢：芽孢：芽孢又叫内生孢子，是某些细芽孢又叫内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段（环境中缺乏营养菌生长到一定阶段（环境中缺乏营养及有害代谢产物积累过多时），及有害代谢产物积累过多时），在细在细胞内形成一个圆形或椭圆形厚壁、含胞内形成一个圆形或椭圆形厚壁、含水量极低、抗逆性极强的休眠体。水量极低、抗逆性极强的休眠体。芽孢的存在和特点是细菌分类与鉴定芽孢的存在和特点是细菌分类与鉴定的重要形态学指标；的重要形态学指标；是衡量各种消毒灭菌手段的重要指标。是衡量各种消毒灭菌手段的重要指标。芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿或碱性品红在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如沙黄）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。实验器材菌种：枯草芽孢杆菌染色剂：5孔雀绿水溶液，0.5番红水溶液器材：接种环，酒精灯，载玻片，擦镜纸、显微镜等。操作步骤1、涂片：将培养24小时左右的枯草 芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。用接种环挑取试管底部菌种于洁净载玻片上，涂成薄膜，然后将涂片通过火焰3次温热固定。细菌涂片的制备过程 孔雀绿染色孔雀绿染色 加热加热(5-10min)水洗脱色水洗脱色 染液切勿干涸染液切勿干涸番红复染番红复染(35min)水洗水洗 镜检镜检 芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红色芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红色注意事项1 1菌液要浓；菌液要浓；2 2选用适当菌龄的菌种；选用适当菌龄的菌种；3 3加热染色时必须维持在染液微冒蒸汽状态加热染色时必须维持在染液微冒蒸汽状态实验结果实验结果游游离离芽芽孢孢芽芽孢孢菌菌体体枯草芽孢杆菌巨大芽孢杆菌六、实验报告实验报告1绘图 枯草芽孢杆菌的芽孢形状、大小、着生位置及染色结果。2思考题 为什么芽孢染色要加热？为什么芽孢和菌体能染成不同的颜色？