影响酶活性的因素设计性实验.ppt

影响酶活性的因素实验三组一、实验目的 通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证温度、pH、激活剂、抑制剂等对酶活性的影响。（以唾液淀粉酶为例）二、实验原理唾液淀粉酶可以分解淀粉唾液淀粉酶可以分解淀粉二、实验原理淀粉淀粉(与碘呈与碘呈蓝色蓝色)紫色糊精紫色糊精(与碘呈与碘呈紫色紫色)红色糊精红色糊精(与碘呈与碘呈红棕色红棕色)无色糊精无色糊精(与碘与碘不呈色不呈色)麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖 在不同的温度、pH、及添加激活剂和抑制剂的条件下，将唾液淀粉酶加入到淀粉溶液中，作用一定时间以后，取出反应液，加入碘指示剂，比较各种条件下，反应液与碘反应后颜色的差异，由此说明淀粉酶活性的变化。二、实验原理班氏试剂：即本尼迪特试剂（Benedict），是斐林溶液的改良试剂，与醛或醛（酮）糖反应也生成Cu2O砖红色沉淀。它是由硫酸铜、柠檬酸钠和无水碳酸钠配置成的蓝色溶液。柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐，在水中它们均可水解产生OH-，与柠檬酸钠-碳酸钠溶液和CuSO4溶液混合时，Cu2+和OH-结合，生成Cu（OH）2，Cu（OH）2与葡萄糖中的醛基反应生成红黄色沉淀。优点：可以存放备用，避免斐林溶液必须现配现用的缺点。二、实验原理三、实验试剂及器材1.试剂 碘液 蒸馏水 班氏试剂 0.1%NaCl 1%淀粉溶液 0.1%CuSO4溶液 pH52.器材 电炉 制冰机 白瓷板 恒温水浴锅 试管、滴管四、实验流程1.唾液淀粉酶的制备 取干净的水杯，盛上蒸馏水。用蒸馏水漱口。口含约20ml蒸馏水，1-2分钟后，吐入一干净烧杯中，棉花过滤。酶的特异性3.将上述各管放沸水浴中煮沸将上述各管放沸水浴中煮沸35 min，观察记录结果，观察记录结果1.制备稀释唾液。制备稀释唾液。2.取取3支试管，编号，按下表操作支试管，编号，按下表操作1.制备稀释唾液。制备稀释唾液。2.取取4支试管，编号，按下表操作支试管，编号，按下表操作3.以以2号管为标准管号管为标准管每隔每隔2min做碘反应。到做碘反应。到接近浅红接近浅红时，取出时，取出各管，分别做碘反应各管，分别做碘反应,观察结果。观察结果。4.将将4只试管均放入只试管均放入37水浴中，水浴中，5-10min取出各管，分别各取取出各管，分别各取1滴做碘反应，观察结果。滴做碘反应，观察结果。温度对酶活性影响 pH对酶活性影响1.制备稀释唾液。制备稀释唾液。2.取取5支试管，编号，按下表操作支试管，编号，按下表操作3.以以5号管为标准管，加号管为标准管，加10滴稀释唾液放滴稀释唾液放37水浴中，测定水浴中，测定淀粉水解所需时间。淀粉水解所需时间。4.1号管号管加加10滴滴蒸馏水，蒸馏水，24号管号管加加10滴滴稀释唾液稀释唾液，以，以1min间隔，间隔，取样，做碘反应。取样，做碘反应。5.观察各管颜色，确定其最适观察各管颜色，确定其最适pH。激活剂和抑制剂对酶活性影响1.制备稀释唾液。制备稀释唾液。2.取取3支试管，编号，按下表操作支试管，编号，按下表操作3.将将3只试管均放入只试管均放入37水浴中，以水浴中，以1号管为标准管号管为标准管每隔每隔2min做做碘反应。到碘反应。到接近浅红接近浅红时，取出各管，分别做碘反应时，取出各管，分别做碘反应,观察结观察结果果。操作操作注意事项注意事项：1.唾液稀释（方法）唾液稀释（方法）2.要求器材干净，避免杂质干扰。要求器材干净，避免杂质干扰。3.取样体积尽可能准确。取样体积尽可能准确。4.准确计时和依次加液，各管反应时间应严格控准确计时和依次加液，各管反应时间应严格控制一致制一致。五、实验结果根据实验结果，说明各种因素对唾液淀粉酶活性的影响情况。