细胞培养-细胞培养用液及培养基.ppt

细胞培养用液及培养基（液）细胞培养用液及培养基（液）临床免疫教研室临床免疫教研室李雪李雪主要内容主要内容v 培养用液培养用液v 培养基（液）培养基（液）主要内容主要内容v 培养用液培养用液v 培养基（液）培养基（液）培养用液培养用液 细胞培养时，除需要培养基，还细胞培养时，除需要培养基，还需要大量的液体，包括需要大量的液体，包括v水水v盐溶液盐溶液v消化液消化液v缓冲液缓冲液v维生素液等维生素液等4培养用液培养用液v水水细胞培养所必须的成分（吸收与代谢）细胞培养所必须的成分（吸收与代谢）维持细胞形态、调节渗透压及维持细胞形态、调节渗透压及PHPH细胞培养对水质的要求极高细胞培养对水质的要求极高培养用液培养用液v水水自来水自来水蒸馏水蒸馏水 （三蒸）（三蒸）离子交换水离子交换水培养用液培养用液v水水培养用液培养用液v水水超纯水超纯水 将水中的导电介质几乎完全去除，将水中的导电介质几乎完全去除，又将水中不离解的胶体物质、气体及有又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水。电阻率大机物均去除至很低程度的水。电阻率大于于18M*cm18M*cm，或接近，或接近18.3M*cm18.3M*cm极限值。极限值。培养用液培养用液v平衡盐溶液（平衡盐溶液（BSSBSS）组织细胞培养基中常用的基本液体。组织细胞培养基中常用的基本液体。功能功能 维持渗透压、调节维持渗透压、调节PHPH、供给细胞生存所需、供给细胞生存所需能量及无机离子成分。能量及无机离子成分。用途用途 合成培养基（液）的基础液及用于洗涤组合成培养基（液）的基础液及用于洗涤组织、细胞等织、细胞等培养用液培养用液v平衡盐溶液平衡盐溶液10培养用液培养用液v消化液消化液-用途用途分散组织、细胞分散组织、细胞使细胞脱离附着底物使细胞脱离附着底物培养用液培养用液v消化液消化液-成分成分胰蛋白酶胰蛋白酶二乙烯四乙酸二钠（二乙烯四乙酸二钠（EDTAEDTA）胶原酶溶液胶原酶溶液培养用液培养用液v消化液消化液-胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶：胰蛋白酶：从动物胰脏分离的一种水从动物胰脏分离的一种水解酶解酶功能：功能：使细胞间的蛋白质水解、细胞使细胞间的蛋白质水解、细胞分散分散配置比例：配置比例：1:125 1:125 或或 1:2501:250培养用液培养用液v消化液消化液-胰蛋白酶胰蛋白酶注意事项注意事项配置胰蛋白酶消化液时应采用不含配置胰蛋白酶消化液时应采用不含CaCa2+2+、MgMg2+2+和和血清的液体血清的液体使用时，一旦细胞分散后，立即用适量含血清使用时，一旦细胞分散后，立即用适量含血清的培养基终止消化反应的培养基终止消化反应培养用液培养用液v消化液消化液-EDTAEDTAEDTAEDTA是一种化学螯合剂，能螯合是一种化学螯合剂，能螯合CaCa2+2+、MgMg2+2+而使细胞分离，对细胞毒性较小。而使细胞分离，对细胞毒性较小。工作浓度：工作浓度：0.02%0.02%培养用液培养用液v消化液消化液-EDTAEDTA注意事项注意事项 需用不含离子的平衡盐缓冲液溶解需用不含离子的平衡盐缓冲液溶解 与胰酶联合使用可提高消化效率与胰酶联合使用可提高消化效率 EDTAEDTA不能被血清中和，消化后应彻底不能被血清中和，消化后应彻底 清洗清洗培养基（液）培养基（液）维持体外细胞生存和生长的基本维持体外细胞生存和生长的基本溶液，是组织细胞培养最重要的条件溶液，是组织细胞培养最重要的条件分类分类v天然培养基天然培养基v合成培养基合成培养基培养基（液）培养基（液）-天然培养基天然培养基 取自动物体液或从动物的组织中取自动物体液或从动物的组织中分离提取分离提取优点优点v营养成分丰富，培养效果良好营养成分丰富，培养效果良好缺点缺点v成分复杂，来源受限成分复杂，来源受限培养基（液）培养基（液）-天然培养基天然培养基类型类型v生物性液体（血清）生物性液体（血清）v组织浸液（胚胎浸液）组织浸液（胚胎浸液）v凝固剂（血浆）凝固剂（血浆）v培养基（液）培养基（液）-天然培养基天然培养基v血清血清最常用的天然培养基最常用的天然培养基促进细胞生长繁殖、粘附并中和促进细胞生长繁殖、粘附并中和usuusu常用的血清为小牛血清和胎牛血清常用的血清为小牛血清和胎牛血清培养基（液）培养基（液）-天然培养基天然培养基v血清血清-使用注意事项使用注意事项使用前需灭活使用前需灭活-20-20保存，避免反复冻融保存，避免反复冻融优质血清外观为透明、无溶血、淡黄色液体、优质血清外观为透明、无溶血、淡黄色液体、无沉淀，灭活后颜色略深无沉淀，灭活后颜色略深保证无菌，且球蛋白含量越低者质量越佳保证无菌，且球蛋白含量越低者质量越佳培养基（液）培养基（液）-天然培养基天然培养基v血清血清-鉴定方法鉴定方法细胞集落形成率细胞集落形成率连续传代培养连续传代培养生长曲线法生长曲线法培养基（液）培养基（液）-天然培养基天然培养基v血浆血浆可支持培养组织块，且还供给细胞生长的可支持培养组织块，且还供给细胞生长的营养物质，但易发生液化。营养物质，但易发生液化。常用禽类血浆常用禽类血浆 小于一岁的雄性鸡类小于一岁的雄性鸡类 该类血浆钙水平恒定，激素含量少，易于采该类血浆钙水平恒定，激素含量少，易于采集，整个采集过程需要注意无菌集，整个采集过程需要注意无菌培养基（液）培养基（液）-合成培养基合成培养基对细胞体内生存环境中各种已知物对细胞体内生存环境中各种已知物质在体外人工条件下模拟质在体外人工条件下模拟 为细胞提供了一个近似体内生存环为细胞提供了一个近似体内生存环境、又便于控制和标准化的体外生存境、又便于控制和标准化的体外生存环境。环境。培养基（液）培养基（液）-合成培养基合成培养基v成分成分氨基酸氨基酸-L L型氨基酸型氨基酸 谷氨酰胺谷氨酰胺维生素维生素糖类糖类无机离子无机离子其他成分其他成分培养基（液）培养基（液）-合成培养基合成培养基v常用培养基常用培养基199培养液培养液Eagle培养液培养液RPMI-1640Ham培养液培养液培养基（液）培养基（液）-合成培养基合成培养基v常用培养基常用培养基199培养液培养液 在在Earle生理生理盐盐水的基水的基础础上添加各种上添加各种添加成分。因配置比添加成分。因配置比较较复复杂杂，现现已已较较少少使用。使用。培养基（液）培养基（液）-合成培养基合成培养基v常用培养基常用培养基Eagle培养培养 Eagle等人在等人在该该培养基的基培养基的基础础上，将上，将13种种氨基酸和氨基酸和8种种维维生素生素浓浓度度调调整至接近整至接近细细胞内含胞内含量水平，制成最低必量水平，制成最低必须须培养基（培养基（Eagles minimum essential media,MEM）MEM为为目前常用的培养基目前常用的培养基培养基（液）培养基（液）-合成培养基合成培养基v常用培养基常用培养基Eagle培养培养 BME MEM 高糖型高糖型-DMEM 低糖型低糖型生长快生长快粘附差粘附差培养基（液）培养基（液）-合成培养基合成培养基v常用培养基常用培养基RPMI-1640 最初用于培养小鼠白血病最初用于培养小鼠白血病细细胞，故胞，故该该培养培养基特基特别别适合适合悬悬浮浮细细胞生胞生长长。RPMI-1640不但适于不但适于肿肿瘤瘤细细胞亦适用于正胞亦适用于正常常细细胞。胞。目前目前应应用最广泛的培养基用最广泛的培养基 培养基（液）培养基（液）-无血清培养基无血清培养基v为什么要使用无血清培养基？为什么要使用无血清培养基？血清成分复杂，干扰实验结果血清成分复杂，干扰实验结果血清含有毒性物质、抑制性物质、影响血清含有毒性物质、抑制性物质、影响某些细胞功能某些细胞功能31培养基（液）培养基（液）-无血清培养基无血清培养基v无血清培养基无血清培养基-缺点缺点通用性较差通用性较差细胞增殖缓慢、成本较高细胞增殖缓慢、成本较高可能失去血清的一些保护性作用可能失去血清的一些保护性作用32培养基（液）培养基（液）-无血清培养基无血清培养基v无血清培养基无血清培养基-配置方法配置方法33Hams 12+DMEM基础培养液基础培养液辅加成分辅加成分培养机制培养机制营养成分营养成分酶抑制剂酶抑制剂